ПОЛУЧЕНИЕ РЕАГЕНТОВ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ТОКСОПЛАЗМОЗА

Abstract

The article reveals the results on studying immunological potency, immunogenicity and specific features of toxoplasmic antigen received from Тoxoplasma gondii RH culture and its applying in immune-enzyme analysis in order to make serological diagnosis. The authors applied toxoplasma produced from serebrum suspension and passed through the mice organisms in order to receive antigen. The research trained the method which allows accumulating parasitic mass with low concentration of exudative cells. The paper defines survival of toxoplasma and protection its virulent properties in keeping. The authors certify that used parasitic strain keeps biological activity and virulence during 17 days at 4оС. Toxoplasmic antigen was of high immunological potency and allowed receiving hyperimmune sheep serum at 1 : 51200 titer in immune-enzyme analysis. The specimen 1 : 10 solution responses positively with antiserum at 1 : 5 titer and 1 : 10 in immune-enzyme analysis; it didn’t affect antibodies subject to chlamidia, besnoitia and brucella. Studying protein concentration of toxoplasmic antigen by means of electrophoresis showed major protein with molecular mass 140 kilodalton. The research demonstrates that reactive chemical Active T.gondi p30 protein fragment (Abcam) applied as parasitic protein with molecular mass 30 kilodaltonresponded equally to hyperimmune toxoplasmic serum; this certifies antigen similarity of the specimens compared. The authors conclude there is a possibility to apply toxoplasmic antigen and hyperimmune antiserum in development of immune-enzyme diagnosis.Приведены результаты изучения иммуногенности, антигенности и  специфичности токсоплазмозного антигена, полученного из штамма Тoxoplasma gondii RH (КазНИВИ), а также возможности его использования в  ИФА для серологической диагностики болезни. Для изготовления антигена была использована культура токсоплазмы из суспензии головного мозга, пассажированная через организм мышей. В  ходе исследований был отработан метод, позволяющий эффективно аккумулировать паразитарную массу с низким содержанием экссудативных клеток. В результате проведенной работы определены сроки выживаемости культуры токсоплазмы и сохранения ее вирулентных свойств в процессе хранения. Установлено, что использованный штамм паразита сохраняет свою биологическую активность и вирулентность в течение 17 суток хранения при температуре 4о С. Токсоплазмозный антиген обладал достаточной иммуногенностью и позволил получить гипериммунную овечью сыворотку с титром в ИФА 1: 51200. В разведении 1: 20 препарат давал положительную реакцию в РСК с антисывороткой в титрах 1 : 5 и 1 : 10 и не вступал во взаимодействие с антителами, имеющими специфичность к хламидиям, безноитиям и бруцеллам. Изучение белкового состава токсоплазмозного антигена с помощью электрофореза в  10%-м ПААГ-ДСН показало наличие в  нем мажорного белка с молекулярной массой 140 кДа. Коммерческий реагент Active T. gondi p30 protein fragment (Abcam), представляющий собой белок паразита с молекулярной массой 30 кДа, в равной степени реагировал с гипериммунной токсоплазмозной сывороткой, что свидетельствует об антигенном сходстве сравниваемых препаратов. Авторами сделан вывод о возможности использования токсоплазмозного антигена и гипериммунной антисыворотки в разработке иммуноферментных диагностикумов

    Similar works