Análise pós-genômica de via de transduçao de sinal mediado por AMPc durante o ciclo de vida do Trypanosoma cruzi

Abstract

Orientador : Marco Aurelio KriegerDissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Biologia Celular Molecular. Defesa: Curitiba, 25/06/2004Inclui bibliografia e anexoO processo de diferenciação celular de epimastigotas para tripomastigotas metacíclicos em Trypanosoma cruzi, bem como alguns genes e fatores envolvidos neste processo, incluindo a importância do AMPc como segundo mensageiro na indução da metaciclogênese, vêm sendo caracterizados por nosso grupo. Para melhor entender a via de transdução de sinal do AMPc, foram realizadas buscas em bancos de seqüência, por genes que codificariam para diferentes proteínas relacionadas com esta via de sinalização (adenilato ciclases, fosfodiesterases e genes codificando as subunidades da holoenzima PKA), permitindo selecionar diferentes membros destas famílias gênicas e objetivando criar um cenário para esta via de transdução de sinal. Para quantificar os transcritos destes genes selecionados ao longo do ciclo de vida do T. cruzi, oligonucleotídeos iniciadores foram sintetizados, e a quantificação foi feita por PCR em tempo real. O conjunto de dados sugere que esses genes sofrem uma regulação complexa e coordenada de sua expressãoThe cellular differentiation process from epimastigote to metacyclic tripomastigote in Trypanosoma cruzi , as well as some genes and factors involved in this process, have been characterized by our group including the role of cAMP as an important secondary messenger in inducing metacyclogenesis. We have searched in the sequence data banks for genes that encode different proteins related to this transduction pathway (Adenylate Cyclases, Phosphodiesterases and the genes for the holoenzyme cAMP dependent Protein Kinase), allowing us to selected different members of these genes family. In order to quantify their gene expression during the T. cruzi life cycle we have developed primers and probes for Real time RT-PCR. Our data strongly suggest that genes related to this pathway have a complex and coordinate gene expression regulation