三浦 利彦

application/pdf博士学位論文の要旨及び審査結果の要旨 (Summary of Thesis(DR))128844 bytesothe

三浦, 利彦

Tohoku University Repository (TOUR) / 東北大学機関リポジトリ

キャピラリー電気泳動法によるヒト血清蛋白の分析著者 三浦 利彦号 2691発行年 1994URL http://hdl.handle.net/10097/21123 氏名(本籍) 学位の種類学位記番号学位授与年月日 学位授与の条件最終学歴学位論文題目みうらとしひこ 三浦利彦(秋田県) 博士(医学) 医第2691号 平成6年9月7日 学位規則第4条第2項該当 昭和51年3月8日東北大学医療技術短期大学部卒業 キャピラリー電気泳動法によるヒト血清蛋白の分析論文審査委員 (主査) 教授佐々木毅教授林典夫 教授佐々木英忠 一253一論文内容要旨 未処理溶融シリカキャピラリーを用いたキャピラリー電気泳動が開発されている。本法は超微 量の試料を簡便な手法により,短い時間で分析でき,かっ高分解能の結果が得られるなどの長所 を有する。しかし,血清蛋白の分析では,蛋白がキャピラリー内壁に非特異的に吸着しやすく, 再現性ある所見が得られにくいなどが指摘され,臨床応用が困難であった。 本研究ではキャピラリー電気泳動における泳動緩衝液のpHや添加剤等の分析条件について検 討し,臨床応用への可能性を求めた。その結果,泳動緩衝液としてzwitterionであるLOM Z1-meむhy1含有の50mMホウ酸ナトリウム緩衝液(pH10.0)を,洗浄液として0.1M水酸化リ チウム液を用いることにより,再現性のある分離分析が可能であることを見出した。この分析法 によりヒト血清はアルブミン(Alb),αi一グロブリン(α1-91),α2一グロブリン(α2-gl),β一 グロブリン(β一gi),γ一グロブリン(γ一gl)ならびにいくつかのサブグループに明確に分離さ れ,各分画の再現性および定量性も良好であった。患者血清について,セルロースアセテート膜 電気泳動と比較検討したところ,Albとγ一glにおいて良好な相関を有したが,α1-gl,α2-g1及 びβ一g1では低い相関を示した。さらに,両法による泳動パターンについて比較した結果,セル ロースアセテート膜電気泳動に比べてキャピラリー電気泳動のほうが優れた分離能を示した。特 に,セルロースアセテート膜電気泳動において,M蛋白を検出することができなかった形質細 胞腫等の患者血清中の微量M蛋白を検出することが可能であった。これらより,本法は微量M 蛋白をはじめとするヒト血清蛋白異常を診断する上で,優れた方法として臨床応用可能であるこ とを示唆した。 一254一 審査結果の要旨 キャピラリー(毛細管)電気泳動はキャピラリーを分離の場とする電気泳動である。この方法 を用いると超微量の試料を,簡便な手法により,短い分析時間で,高分解能の結果が得られるな どの長所を有するとされる。このため,これまでに有機酸らの低分子からの医薬品関係あるいは 蛋白,ペプチドなどの生体試料の分析にも応用されてきた。しかし,蛋白の分析においては,ピー クのテーリング(分離能の低下)や再現性の欠如など種々の問題が含まれていた。 本研究では,未処理溶融シリカキャピラリー電気泳動による,精製血清蛋白の分析条件を検討 し,本法の臨床応用のための方法の開発を試みた。まず泳動緩衝液等の種々の測定条件を検討し た。その結果,緩衝液としては,1.OMZlmethy1含有の50mMホウ酸ナトリウム緩衝液(pH10. 0),洗浄液として,0.1M水酸化ナトリウム液を用いることにより,精製血清蛋白について再現 性のある分離分析が可能になった。これに基づき血清試料の分析を試み,アルブミン,αrグ ロブリン,αrグロブリン,βrグロブリン,γ1一グロブリン,ならびにいくつかのサブグ ループに分離できることを認めた。いづれも再現性も確かめられた。本法はセルロースアセテー ト膜電気泳動に比べて感度,分析能力共に優れていると考えられ,特に臨床試料の分析において, セルロースアセテート膜電気泳動においては,検出困難であった蛋白の分析が可能である例を見 出した。すなわち,血清試料で,M蛋白を検出することができず,免疫電気泳動でもM-bow検 出が容易でなかった上咽頭癌,形質細胞腫,Crow-Fukase症候群,原発性マクログロブリン血 症の4症例において,本法により微量M蛋白の検出が可能とされた。このように本研究は臨床 応用を目的とした血清蛋白の新しい分析方法の開発を行った。かっ,従来のセルロースアセテー ト膜法では検出しえなかった微量M蛋白をはじめとするヒト血清の蛋白異常の診断に極めて有 用であることを示す新知見を認めており,学位論文に相応しい研究とみなされる。 一255一

キャピラリー電気泳動法によるヒト血清蛋白の分析

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