Herpes-virus infection decrease of activity of villus Bcl-2 was increased in process of increase of a credit of antibodies to virus herpes. The increase of activity kaspasa-3 created action on DNK nucleus sincythiotrophoblast.При обострении герпес-вирусной инфекции во время беременности на фетоплацентарный барьер повреждающее влияние оказывают интерлейкин, фактор некроза опухоли α, нитросоединения, приводящее к подавлению активности белка Bcl2 и увеличению активности каспазы-3

I. Andriyevskaya A.

M. Lutsenko T.

И. Андриевская А.

М. Луценко Т.

M. T. Lutsenko

I. A. Andriyevskaya

М. Т. Луценко

И. А. Андриевская

Bulletin of Siberian Medicine / Бюллетень сибирской медицины

   82 Бюллетень сибирской медицины, № 3, 2010  Морфофункциональная характеристика фетоплацентарного барьера  при герпес-вирусной инфекции Луценко М.Т., Андриевская И.А. Morphofunctional characteristic of fetoplacentar barrier at the pregnancy complicated herpes-virus infection Lutsenko M.T., Andriyevskaya I.A. Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН, г. Благовещенск © Луценко М.Т., Андриевская И.А. При обострении герпес-вирусной инфекции во время беременности на фетоплацентарный барьер повреждающее влияние оказывают интерлейкин, фактор некроза опухоли α, нитросоединения, приводящее к подавлению активности белка Bcl-2 и увеличению активности каспазы-3. Ключевые слова: герпес, синцитиотрофобласт, фактор некроза опухолей α, Bcl-2, каспаза-3. Herpes-virus infection decrease of activity of villus Bcl-2 was increased in process of increase of a credit of antibodies to virus herpes. The increase of activity kaspasa-3 created action on DNK nucleus sincythiotrophoblast. Key words: herpes, sincythiotrophoblast, tumor necrosis factor α, Bcl-2, kaspasa-3. УДК 618.36:57.016.6:578.825.13  Введение В настоящее время внимание специалистов привле-кает частое обострение герпес-вирусной инфекции во время беременности [1, 9], приводящее к нарушению обмена основных веществ и ферментативных процессов в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты [3, 5, 10].  Причины, обусловливающие повреждение фето-плацентарного барьера при герпес-вирусной инфек-ции, могут быть разнообразными. Наименее изучен-ными являются процессы, вызываемые сильнодейст-вующими повреждающими факторами, такими как нитросоединения [6, 8], которые могут привести к активизации в синцитиотрофобласте каспазного цикла и снижению защитной функции белка Bcl-2. Это про-воцирует нарушение апоптоза в ядрах синцитиотро-фобласта ворсинок плаценты. Материал и методы Материалом для исследования послужила пери-ферическая кровь и плаценты, полученные в результа-те своевременных родов на сроке 38—40 нед геста-ции. Обследовано 60 женщин с различной степенью агрессивности герпесной инфекции первого типа: с тит-рами антител иммуноглобулина G (IgG) 1 : 1 600 (I группа), 1 : 6 400 (II группа) и 1 : 12 800 (III группа). В каждую группу вошли по 20 беременных. Контрольную группу составили 20 женщин с неосложненным тече-нием беременности. Исследования проводились на базе стационара аку-шерского отделения клиники Дальневосточного науч-ного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН (г. Благовещенск). Все исследования были про-ведены с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведе-ния научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и Правил клинической практики в Российской Федерации, утвержденных при-казом Минздрава РФ от 19.06.2003 № 226. Плаценту получали в течение 10—15 мин после ро-дов. Поверхность плаценты со стороны базальной пла-стинки отмывали большим количеством физиологиче-ского раствора (ФР). Плодовая часть плаценты (ворсин-чатый хорион) срезалась скальпелем небольшими пластинками площадью до 2—3 см2, толщина срезаемо-го слоя не превышала 1 мм. Кусочки ткани помещали в  Экспериментальные и клинические исследования  химические стаканы, содержащие 200 мл ФР, отмывали от клеток крови, перемешивая на магнитной мешалке в течение 15 мин. Для получения экстрактов отмытые кусочки плаценты слегка подсушивали на фильтроваль-ной бумаге и взвешивали. Затем ткань растирали пести-ком в фарфоровой ступке и гомогенизировали до одно-родной кремообразной массы. К полученному гомоге-нату добавляли ФР в объеме, равном изначальному весу ткани (на 1 г — 1 мл ФР). Взвесь помещали в пластиковые пробирки Falcon и подвергали замора-живанию при температуре –20 °С в течение суток. Затем гомогенат размораживали и ультрацентрифуги-ровали при 4 000 об/мин при температуре 4 °С. Надоса-дочную жидкость разливали мелкими аликвотами и хранили при температуре –20 °С до проведения имму-ноферментного анализа (ИФА).  В гомогенате плаценты белок Bcl-2, каспазу-3 и NO2– определяли, используя наборы компании Bender MedSystems (Австрия). По динамике титров антител IgG в периферической крови с помощью стандартных тест-систем фирмы «Вектор-Бест» (г. Новосибирск)  проводилась верификация вируса простого герпеса типа 1 (ВПГ-1) и оценивалась степень агрессивности инфекции Анализ проводили на микропланшетном ридере Stat-Fax2100 (США). Электронно-микроскопи-ческие исследования выполняли по стандартным ме-тодикам с конечной заливкой в аралдит. Ультратонкие срезы изготавливали на ультрамикротоме LKB (Шве-ция), контрастировали уранилацетатом. Для просмот-ра и цифрового фотографирования использовали мик-роскоп Tesla (Чехия). Морфологическая детекция апоптоза проводилась на парафиновых срезах плаценты по метке концов фраг-ментов ДНК по методу in situ end-labeling (ISEL) [4]. Содержание фактора некроза опухоли α (ФНО-α) опре-деляли с помощью твердофазного ИФА с использова-нием наборов ООО «Цитокин» (г. Санкт-Петербург). Для световой микроскопии материал фиксировали в 0,5%-м растворе параформальдегида на 80%-м эта-ноле и заливали в парафин. На срезах иммуногисто-химически выявляли белок Вс1-2 с помощью моно-клональных антител (клон 124, Dako Cytomation, Да-ния).  Статистическую обработку данных проводили с ис-пользованием t-критерия Стьюдента. Результаты пред-ставлены в виде X ± m, где X — выборочное среднее значение, m — стандартное отклонение. Статистически значимыми считали отклонения при уровне р < 0,05. Результаты и обсуждение Проведенные исследования показали, что при бере-менности, осложненной герпес-вирусной инфекцией, основными экзогенными индукторами влияния на фе-топлацентарный барьер ворсинок плаценты были в той или иной степени выраженности антигенная перегрузка и выработка иммунокомпетентными клетками ФНО-α. Количество ФНО-α в гомогенате плаценты в I группе составило (21,10 ± 0,08) пг/мл; во II группе — (84,3 ± ± 0,3) пг/мл и в III группе — (89,98 ± 0,34) пг/мл (в кон-троле — (11,6 ± 0,09) пг/мл). В гомогенате плаценты на этом фоне резко нараста-ло содержание каспазы-3: в I группе (26,70 ± 0,08) нг/мл; во II группе — (79,50 ± 0,40) нг/мл и в III группе — (103,70 ± 0,80) нг/мл. Одновременно оценивалась динамика содержания в этих же гомогенатах белка Bcl-2, являющегося анти-апоптозным фактором в клетках. В I группе содержание белка Всl-2 нарастало и составило (9,24 ± 0,09) пг/мл (контроль — (3,80 ± 0,02)). Максимума содержание Всl-2 достигало во II группе — (42,5 ± 0,6) пг/мл, но затем, по мере нарастания титра антител IgG к вирусу герпе-са до 1 : 12 800, его содержание начинало резко сни-жаться — до (28,14 ± 0,70) пг/мл (таблица, рис. 1).  Динамика изменений содержания каспазы-3, белка Bcl-2 и NO2–  в гомогенате плацент от женщин, перенесших в третьем триместре обострение герпес-вирусной инфекции Показатель Контроль Группа I Группа II Группа III Каспаза-3, нг/мл  19,00 ± 0,09 26,70 ± 0,05*  79,50 ± 0,40* 103,70 ± 0,80*Белок Bcl-2, пг/мл  03,80 ± 0,02 09,24 ± 0,09*  42,50 ± 0,30* 028,14 ± 0,79*NO2–, мкмоль/л  20,31 ± 0,09 38,80 ± 1,50*  92,10 ± 1,20* 105,70 ± 1,50* * Различия по сравнению с контролем p < 0,001.   Рис. 1. Взаимоотношения каспазы-3, Bcl-2 и NO2– в гомогенате   плаценты рожениц после перенесенной герпес-вирусной инфекции  Бюллетень сибирской медицины, ¹ 3, 2010 83 Луценко М.Т., Андриевская И.А. Морфофункциональная характеристика фетоплацентарного барьера…  По мере нарастания агрессивности герпес-вирусной инфекции в гомогенате плаценты увеличивалось содер-жание NO2–. Антиапоптозная функция симпласта начи-нала снижаться, что и проявлялось в увеличении числа ядер в фетоплацентарном барьере в состоянии апоптоза до (4,00 ± 0,02)% (в контроле — 1,00 ± 0,01).   Рис. 2. Белок Bcl-2 в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты роженицы, не имевшей вирусных заболеваний во время беременно-сти.   Иммуногистохимическая реакция. Ув. 400  Рис. 3. Белок Всl-2 в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты роженицы, перенесшей вспышку герпес-вирусной инфекции в третьем триместре (титр антител к вирусу герпеса 1 : 12 800). Имму-ногисто-  химическая реакция. Ув. 400 Таким образом, проявление антиапоптозной функции клеток (в данном случае симпласта) зависит от концентрации антигена, возникающего в крови бе-ременной при вспышке герпес-вирусной инфекции. Если на начальном этапе развития инфекции защит-ные свойства синцитиотрофобласта могут противо-стоять вступлению ядер в апоптоз, содержание белка Bcl-2 увеличивается почти в 11 раз по сравнению с контролем, то при тяжелой форме герпес-вирусной инфекции (титр антител 1 : 12 800) синтез Bcl-2 подав-ляется и создается благоприятная почва для прежде-временного формирования апоптоза ядер в синцитио-трофобласте фетоплацентарного барьера (рис. 2, 3). Заключение Герпес-вирусная инфекция подавляет активность белка Bcl-2 в плаценте беременной и способствует наращиванию активности каспазы-3 и NO2–, увеличи-вая вхождение в апоптоз ядер симпласта ворсинок. Литература 1. Андриевская И.А. Гормональные и микробицидные из-менения у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюл. физиологии и патологии дыхания. 2004. Вып. 17. С. 65—68. 2. Кобозева Н.В., Гуркин Ю.А. Перинатальная эндокрино-логия.  Л.: Медицина, 1986. 310 с. 3. Марусов А.П. Доклиническая форма позднего токсикоза беременных: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. М., 1991. 32 с. 4. Погорелов В.М., Козинец Г.И. Гематология и трансфу-зиология. 1995. Т. 43, № 5. С. 21—24. 5. Протопопова Н.В., Колесникова Л.И., Ильин В.П. Мета-болизм и гемодинамика у беременных с артериальной гипертензией. Новосибирск: Наука, 2000. 146 с. 6. Реутов В.П. Изучение механизмов восстановления ио-нов NO2– в крови и митохондриях клеток тканей млеко-питающих: дис. … канд. биол. наук. М., 1988. 245 с. 7. Реутов В.П., Орлов С.Н. Физиологическое значение гуа-нилатциклазы и роль окиси азота и нитросоединений в регуляции активности этого фермента // Физиология че-ловека. 1993. № 19 (1). С. 124—135. 8. Реутов В.П., Каюшин Л.П., Сорокина Е.Г. Физиологическая роль цикла окиси азота в организме человека и животных // Физиология человека. 1994. № 20 (3). С. 165—174. 9. Соловьёва А.С., Луценко М.Т. Характеристика местного иммунитета на поверхности небных миндалин у бере-менных с герпес-вирусной инфекцией // Дальневост. мед. журн. 2007. № 3. С. 22—24. 10. Cambein J., Jacgueson V. At the level of serum triglycerides a significant predictor of coronary death in normocholes-terolemic subjects // Amer. J. Epidimiol. 1986. V. 124. № 4. P. 624—632. 11. Demura R., Odagiri E., Yoshimura M. Placental secretion of prolactin. ACTH and immunoreactive β-endorphin during pregnancy // Acta endocrinol (Kbh). 1982. V. 100. № l. P. 114—119.  Поступила в редакцию 13.08.2009 г. Утверждена к печати 17.03.2010 г. Сведения об авторах 84  Бюллетень сибирской медицины, ¹ 3, 2010  Экспериментальные и клинические исследования  М.Т. Луценко — академик РАМН, советник при дирекции Дальневосточного НЦ физиологии и патологии дыхания СО РАМН (г. Благовещенск). И.А. Андриевская — канд. биол. наук, научный сотрудник Дальневосточного НЦ физиологии и патологии дыхания СО РАМН (г. Благовещенск). Для корреспонденции Луценко Михаил Тимофеевич, e-mail: Lucenko@mail.ru, tatiana1383@list.ru  Бюллетень сибирской медицины, ¹ 3, 2010 85 

Морфофункциональная характеристика фетоплацентарного барьера при герпес-вирусной инфекции

https://bulletin.tomsk.ru/jour/article/download/1600/1120

Морфофункциональная характеристика фетоплацентарного барьера при герпес-вирусной инфекции

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Bulletin of Siberian Medicine / Бюллетень сибирской медицины