'Stepan Gzhytskyi National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies Lviv'
Abstract
У зв’язку із зростаючою популярністю використання мезенхімальних стовбурових клітин у гуманній і ветеринарній медицині, важливим фактом клітинно-регенеративної терапії є підтвердження генетичної стабільності культур клітин, які вводяться людині/тварині-реципієнту. Цитогенетичні дослідження стовбурових клітин – один із важливих етапів контролю, який дозволяє встановити генетичну стабільність культивуючих клітин. Аналіз метафазних пластинок мезенхімальних стовбурових клітин кроля, одержаних на першому, третьому та п’ятому пасажах культивування, показав, що для цих клітин характерні кількісні порушення хромосом, зокрема анеуплоїдія та поліплоїдія. Анеуплоїдія в МСК кроля проявлялася із частотою 15 % на першому, 15,4 % на третьому та 8,3 % на п’ятому пасажах. Цитогенетичну мінливість (анеуплоїдію) в основному становили гіперплоїдні клітини, каріотип яких дорівнював (n=46; n=56) хромосом. Кратне збільшення гаплоїдного набору хромосом було виявлено у мезенхімальних стовбурових клітин кроля на всіх пасажах культивування. Поліплоїдні клітини були в основному тетра та гексаплоїдні, каріотип яких дорівнював (n=88) та (n=132) хромосом відповідно. Концентрація поліплоїдних клітин у мезенхімальних стовбурових клітинах кроля 1 пасажу становила 6,3 %, 2 – 15,4 %, 3 – 37,5 %. Під час проведення мікроядерного тесту встановлено, що частота двоядерних мезенхімальних стовбурових клітин, клітин із мікроядрами та показник мітотичного індексу підвищені порівняно з рівнем спонтанного мутагенезу, характерного для клітин ссавцівВ связи с повышенной популярностью использования мезенхимальных стволовых клеток в гуманной и ветеринарной медицине, важным фактом клеточно-регенеративной терапии является подтверждение генетической стабильности культур клеток, которые вводятся человеку/животному-реципиенту. Цитогенетические исследования стволовых клеток – один из важных этапов контроля, который позволяет установить генетическую стабильность культивирующих клеток. Анализ метафазных пластинок мезенхимальных стволовых клеток кроля, полученных на первом, третьем и пятом пассажах, показал, что для этих клеток характерные количественные нарушения хромосом, в частности анеуплоидия и полиплоидия. Анеуплоидия в мезенхимальных стволовых клетках кроля проявлялась с частотой 15 % на первом, 15,4 % на третьем, и 8,3 % на пятом пассажах. Цитогенетическую изменчивость (анеуплоидию) в основном представляли гиперплоидные клетки, кариотип которых становил (n=46; n=56) хромосом. Кратное увеличение гаплоидного набора хромосом было выявлено у мезенхимальных стволовых клеток на всех пассажах культивирования. Полиплоидные клетки были в основному тетра и гексаплоидные, кариотип которых ровнялся (n=88) и (n=132) хромосом соответственно. Концентрация полиплоидных мезенхимальных стволовых клеток кроля на первом пассаже становила 6,3 %, 2 пассажа – 15,4 %, 3 пассажа – 37,5 %. Во время проведения микроядерного теста установлено, что частота двуядерных мезенхимальных стволовых клеток, клеток с микроядрами и показатель митотического индекса повышенные сравнительно с уровнем спонтанного мутагенезу, характерного для клеток млекопитающих.Due to the increasing popularity of the use of mesenchymal stem cells in human and veterinary medicine, an important fact for regenerative cell therapy is to confirm the genetic stability of the cell cultures that are introduced into human/animal recipient. Cytogenetic studies of stem cells are one of the most important stages of control, which allows to establish the genetic stability of cultivated cells. Analysis of metaphase plates of rabbit mesenchymal stem cells obtained at the first, third and fifth passages of cultivation have shown that for these cells are typical quantitative chromosome abnormalities, including aneuploidy and polyploidy. Aneuploidy in rabbit mesenchymal stem cells was revealed with the frequency of 15 % at the first, 15,4 % at the third and 8,3 % at the fifth passages. Cytogenetic variability (aneuploidy) mostly constituted the hyperploidy cells which karyotype was (n=46; n=56) chromosomes. Fold increase of haploid set of chromosomes was found in rabbit mesenchymal stem cells at all passages of cultivation. Polyploid cells were mainly tetra- and hexaploid, which karyotype was (n=88) and (n=132) chromosomes respectively. The concentration of polyploid cells in rabbit mesenchymal stem cells at the first passage was 6,3 %, second – 15,4 % and third – 37,5 %. When conducting the micronucleus test it was found that the frequency of binucleated mesenchymal stem cells, cells with micronuclei and mitotic index are increased in compare with the spontaneous mutagenesis that is typical for mammalian cells
