Développement de méthodes analytiques : détermination de médicaments dans les fluides biologiques et études de stabilité de nouveaux composés antiplasmodiaux in vitro
L'analyse de composés ou de métabolites dans les fluides biologiques nécessite des méthodes sélectives et très sensibles pour leur détection et leur quantification lors des études pharmacologiques et cliniques. La première partie du travail a pour objet l'analyse d'antiinflammatoires non stéroïdiens dans des médicaments et du sérum, par HPLC et détection de fluorescence. En complément, une comparaison entre l'HPLC avec fluorescence conventionnelle et la µHPLC avec fluorescence induite par laser a été menée pour déterminer la chloroquine et la quinine dans le sérum humain en utilisant de très faibles volumes d'échantillons injectés. Ceci a conduit à la méthode la plus sensible connue à ce jour (LOD < 2 femtomoles). Dans une seconde partie, la biotransformation de nouvelles entités chimiques (NCE) à activité antiplasmodiale a été étudiée en utilisant plusieurs systèmes analytiques incluant les méthodes LC-MS. La stabilité des NCE in vitro et leurs interactions avec les globules rouges ont été recherchées afin d'approcher leurs mécanismes d'action. L'utilisation de molécules marquées a permis de confirmer l'interprétation des spectres de masse et de comprendre les premières étapes de la biotransformation.The analysis of compounds and/or metabolites in biological fluids needs very sensitive and selective methods for the detection and quantification in pharmacological and clinical studies. The first part of the work concerns the determination of NSAIDs in pharmaceuticals and human serum by dual-mode gradient HPLC and fluorescence detection. In addition a comparison between HPLC with conventional fluorescence, and µHPLC with laser induced fluorescence detection was carried out to determine chloroquine and quinine in human serum, using very small injected samples. This resulted in the most sensitive method known to date (LOD < 2 femtomoles). In the second part of the work, the biotransformation of new chemical entities (NCEs) showing promising antiplasmodial activity has been studied with several analytical systems including LC-MS methods. The stability of the NCEs in vitro and their interactions with human red blood cells have been investigated to begin to understand their mechanisms of action. Tagged molecules have been used to confirm the interpretation of the mass spectra and the first step in the biotransformation pathway
