Rabenstein, F.

Smalla, K.

Thiele, K.

German

JKI Open Journal Systems (Julius Kühn-Institut)

3. Nachwuchswissenschaftlerforum 2010  Thiele, K. et al.    Berichte aus dem Julius Kühn-Institut 157. 2010 Acidovorax valerianellae sp. nov. als Erreger von Blattflecken an Feldsalat [Valerianella locusta (L.) Laterr.] - Untersuchungen zur Biologie und Entwicklung praxisrelevanter Nachweismethoden   K. Thiele, K.  Smalla, F. Rabenstein   Julius Kühn-Insitut, Institut für Epidemiologie und Pathogendiagnostik katja.thiele@jki.bund.de  Projektziele Seit 1999 treten in Deutschland vermehrt schwarze Blattflecken an Feldsalat [Valerianella locusta (L.) Laterr.] auf, die auf einen Befall durch das Bakterium Acidovorax valerianellae (Av) zurückzufüh-ren sind und im Erwerbsanbau hohe Ver-luste verursachen. Zur Lösung der offenen epidemiologischen Fragen werden inner-halb dieses Projektes serologische und molekularbiologische Diagnosemethoden entwickelt. Der Erreger soll hinsichtlich seiner Übertragungswege und Wachs-tumsbedingungen untersucht werden. Weiterhin soll mit der molekularbiologi-schen Charakterisierung des Erregers be-gonnen werden. Diagnostik Zunächst wurden monoklonale Antikörper gegen das Typisolat des Erregers (16619, DSMZ Braunschweig) erzeugt, selektiert und mit bereits verfügbaren polyklonalen Kaninchenseren hinsichtlich Spezifität und Sensitivität verglichen. Die ausgewählten Hybridom-Klone produzieren hochspezifi-sche anti-Av-Antikörper in hoher Konzent-ration. Mittels TAS-ELISA (triple antibody sandwich) kann der Erreger in infiziertem Pflanzenmaterial sowie in Saatgut sicher nachgewiesen werden. Erstmals konnten mittels Immunogold-Labeling und Trans-missions-Elektronenmikroskopie Av-Zellen in symptom-  tragenden Feldsalatblättern dargestellt werden. Die Bakterienzellen wurden in sehr hoher Dichte im Interzellularraum in den Randregionen der Läsionen gefunden, jedoch nicht in symptomfreien Blattregio-nen. Alle bisher eingesetzten PCR-Primer er-wiesen sich als sehr unspezifisch und für den sicheren Nachweis von Av als unge-eignet. Da für A. valerianellae nur wenige Sequenzinformationen vorliegen, wurden einige durch BOX-PCR generierte Amplifikate kloniert und sequenziert. Die dabei gewonnenen Sequenzdaten ermög-lichten die Etablierung einer für Av spezifi-schen PCR. Alle vorhandenen Isolate konn-ten damit nachgewiesen werden, die Übertragbarkeit der Methode auf Saatgut und Boden wird gegenwärtig getestet. Infektionsquellen Hinweise auf die Übertragbarkeit des Er-regers durch Boden und Saatgut konnten bestätigt werden. Infiziertes Feldsalat-Blattmaterial wurde im Herbst 2009 (in Schifferstadt) und März 2010 (in Quedlin-burg) mit Erde gemischt und in einge-senkte Container im Freiland ausgebracht. Im Abstand von 4 Wochen wurden Erd-proben entnommen und darauf Feldsalat ausgesät. Über einen Zeitraum von drei Monaten traten Av-Symptome an den Fangpflanzen auf und konnten serologisch diagnostiziert werden. Bei dem leicht 6

Acidovorax valerianellae sp. nov. als Erreger von Blattflecken an Feldsalat [Valerianella locusta (L.) Laterr.] - Untersuchungen zur Biologie und Entwicklungpraxis-relevanter Nachweismethoden

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