Staphylococcus aureus é um dos principais agentes das mastites do rebanho leiteiro em vários países do mundo. O aparecimento de cepas multirresistentes a antibióticos tem dificultado o tratamento dessas infecções. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de suscetibilidade antimicrobiana de Staphylococcus aureus, isolados de 55 amostras de leite de vacas com suspeita de mastite no Extremo-Oeste catarinense. Foram inoculados 1 mL de cada amostra em caldo Infuso Cérebro Coração, incubados a 36±1 °C por 24 horas. Posteriormente, as amostras foram estriadas em Ágar Sangue e Ágar Sal Manitol, incubadas à 36±1 °C por 48 horas. Colônias características foram identificadas por coloração de Gram e testes bioquímicos. O antibiograma foi realizado por meio da técnica de difusão em disco descrita por Kirby-Bauer, conforme Clinical and Laboratory Standards Institute (2005). Foram testados os seguintes antibióticos: penicilina, ciprofloxacin, clindamicina, eritromicina, nitrofurantuína, rifampicina, sulfazotrin, tetraciclina, vancomicina e gentamicina. Das 55 amostras, 39 (70,9%) foram positivas para Staphylococcus aureus. Os percentuais gerais de sensibilidade, resistência e sensibilidade intermediária foram 78,72%, 13,59% e 7,69%, respectivamente. Os antibióticos mais eficazes foram ciprofloxacin e sulfazotrin, com 97,44% de eficácia e vancomicina, com 94,87%, e os menos eficazes foram a penicilina, com 46,15% de resistência e tetraciclina, com 30,77%. Conclui-se que S. aureus é um dos principais agentes etiológicos causadores de mastite, com resistência a diversos antimicrobianos. Assim, a análise antimicrobiana in vitro deve ser considerada pelos proprietários rurais para reduzir perdas na produção leiteira e em programas de controle da doença em questão.Palavras-chave: Staphylococcus aureus. Mastite. Suscetibilidade antimicrobiana.