Study of the virulence of serotype 4 and 9 of African horse sickness virus in two mouse models

Abstract

Objectifs Le virus de la peste équine (African horse sickness virus ; AHSV) est un virus segmenté à ARN double brin, appartenant à la famille des Reoviridae et au genre Orbivirus. L’AHSV se différencie en 9 sérotypes distincts et est transmis par la piqûre d’un vecteur, principalement Culicoides imicola. L’AHSV cause une sévère morbidité et un taux de mortalité qui peut atteindre 95 % chez les chevaux avec de lourdes conséquences économiques. L’établissement d’un modèle d’étude en souris est nécessaire pour plusieurs applications, comme l’investigation de la pathogénie de ce virus, l’étude de la virulence, l’étude d’efficacité de nouveaux vaccins. Méthodes Deux modèles murins, soit une lignée de souris déficientes en récepteur à l’interféron α (A129 KO ou IFNAR -/-), et une lignée immunocompétente (A 129 WT) ont été testées. Les virus de sérotypes 4 et 9 de l’AHSV ont été utilisés pour les inoculations des souris ; ces deux sérotypes ont été à l’origine des épidémies observées en Espagne en 1969 et à la fin des années 80 en Espagne et au Portugal. Le virus a été inoculé par voie sous-cutanée (SC) et/ou par voie intra-nasale (IN) et un groupe de souris témoin (mock-infected) a été utilisé pour les deux modèles testés. Des échantillons de sang ont été prélevés de chaque souris infectée et témoin à intervalles réguliers. Les organes (foie, rate, reins, poumon et cerveau) ont été prélevés à la fin de l’expérience pour la plupart des souris ou lors de l’euthanasie des souris qui présentaient des signes cliniques très prononcés. Tous les échantillons, sang et organes, ont été analysés par qRT-PCR avec comme cible le segment 7 codant la protéine VP7 de l’AHSV qui est la protéine de structure la plus conservée entre les différents sérotypes. Résultats Les deux sérotypes de l’AHSV ont été détectés par qRT-PCR jusqu’à 3 semaines post-infection (ce qui correspond à la fin de l’expérience) dans le sang des souris IFNAR -/- et A129 WT infectées par la voie SC. Le virus de sérotype 4 atteint des niveaux de virémie légèrement plus élevés par rapport au virus de sérotype 9. Les souris A129 WT infectées par la voie intra-nasale ne montrent à aucun moment de l’expérience de virémie détectable par la qRT-PCR. Le pic de virémie a été mesuré entre le jour 2 et le jour 4 post-infection pour les deux lignées de souris. Au pic de virémie, la quantité de ADNc correspondant au segment-7 viral, après quantification par qRT-PCR, était plus élevée chez les souris IFNAR -/-. Conclusions Les souris immunodéficientes (IFNAR -/-) présentent des caractéristiques cliniques et biologiques permettant l’établissement d’un modèle in vivo pertinent. Selon les premiers résultats obtenus, il semble que la voie sous-cutanée soit la voie à privilégier pour les expériences in vivo futures. La mise au point de ce modèle sur souris permet de disposer d’un outil efficace et nécessaire pour l’étude in vivo de l’AHSV, afin de caractériser in vivo la virulence de ce virus et de suivre l’évolution des populations virales pendant la multiplication virale in vivo. Remerciements Recherche financée par le service Recherche Contractuelle, Service Public Fédérale, Santé Publique, Sécurité de la Chaîne alimentaire et Environnement (RT 12/6262 INDEVIREQ 2.0)INDEVIREQ 2.