Ruiz, R.M.; Ramírez, N.N.; Alegre, A.E.; Bastiani, C.E.; De Biasio, M.B.: Detección de Leishmania (Viannia) braziliensis en gato doméstico de Corrientes, Argentina, por técnicas de biología molecular. Rev vet 26: 2, 147-150, 2015

Alegre, A. E.

Bastiani, C. E.

De Biasio, M. B.

Ramírez, N. N.

Ruiz, R. M.

Revista Veterinaria

Spanish

Las leishmaniasis constituyen un grupo de enfermedades de gran impacto en la salud pública. En gatos, esta parasitosis es considerada de rara ocurrencia, sin embargo, hay un aumento en el número de casos notificados en todo el mundo. En Argentina existe poca información sobre la prevalencia y la importancia de los gatos en la transmisión de la enfermedad. El objetivo del presente trabajo fue comunicar un caso de leishmaniasis felina en la ciudad de Corrientes, Argentina, con una descripción de su presentación y la identificación de la especie aplicando técnicas de biología molecular. El caso fue ratificado como leishmaniasis cutánea ulcerativa y el agente etiológico fue identificado como Leishmania (V) braziliensis.Leishmaniasis is a parasitic disease of great impact on public health. Feline leishmaniasis is rare, however, there is an increment in the number of cases reported around the world. In Argentina little information is available regarding the prevalence of this disease as well as the role of cats in its transmission. The objective of this work was to report a case of feline leishmaniasis in Corrientes City, Argentina, with a description of the clinical aspects and the identification of the parasite by means of molecular biology techniques. It can be concluded that this is a case of ulcerative cutaneous leishmaniasis, being the etiologic agent Leishmania (V) braziliensis

Ruiz, Raquel Mónica

Ramírez, Natalia N.

Alegre, Elsa Agustina

Bastiani, Cristian Eduardo

De Biasio, María Bárbara

Repositorio Institucional de la Universidad Nacional del Nordeste (RIUNNE)

Detection of Leishmania braziliensis in a domestic cat using molecular biology techniques in Corrientes, Argentina

Revistas UNNE (Universidad Nacional del Nordeste, Argentina)

Detección de Leishmania (Viannia) braziliensis en gato doméstico de Corrientes, Argentina, por técnicas de biología molecular

Fil: Ruiz, Raquel Mónica. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Fil: Ramírez, N. N. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Fil: Alegre, Elsa Agustina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Fil: Bastiani, Cristian Eduardo. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Fil: De Biasio, María Bárbara. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Las leishmaniasis constituyen un grupo de enfermedades de gran impacto en la salud pública. En gatos, esta parasitosis es considerada de rara ocurrencia, sin embargo, hay un aumento en el número de casos notificados en todo el mundo. En Argentina existe poca información sobre la prevalencia y la importancia de los gatos en la transmisión de la enfermedad. El objetivo del presente trabajo fue comunicar un caso de leishmaniasis felina en la ciudad de Corrientes, Argentina, con una descripción de su presentación y la identificación de la especie aplicando técnicas de biología molecular. El caso fue ratificado como leishmaniasis cutánea ulcerativa y el agente etiológico fue identificado como Leishmania (V) braziliensis.Leishmaniasis is a parasitic disease of great impact on public health. Feline leishmaniasis is rare, however, there is an increment in the number of cases reported around the world. In Argentina little information is available regarding the prevalence of this disease as well as the role of cats in its transmission. The objective of this work was to report a case of feline leishmaniasis in Corrientes City, Argentina, with a description of the clinical aspects and the identification of the parasite by means of molecular biology techniques. It can be concluded that this is a case of ulcerative cutaneous leishmaniasis, being the etiologic agent Leishmania (V) braziliensis

LAReferencia - Red Federada de Repositorios Institucionales de Publicaciones Científicas Latinoamericanas

Rev vet 26 (2): 147-150, 2015www.vet.unne.edu.arCorrientes, ArgentinaRevista VeterinariaISSN (papel): 1668-4834ISSN (on line) 1669-6840Detección de Leishmania (Viannia) braziliensis en gato domésticode Corrientes, Argentina, por técnicas de biología molecularRuiz, R.M.1; Ramírez, N.N.1; Alegre, A.E.1; Bastiani, C.E.1; De Biasio, M.B.21Cátedra Salud Pública, 2Servicio Veterinario de Biología Molecular, Facultad de Ciencias Veterinarias  (UNNE), Sargento Cabral 2139, Corrientes (3400), Argentina. Tel/Fax: 379-4425753.  E-mail: raquel_monicaruiz@hotmail.comResumenRuiz, R.M.; Ramírez, N.N.; Alegre, A.E.; Bastiani, C.E.; De Biasio, M.B.: Detección de Leishmania (Viannia) braziliensis en gato doméstico de Corrientes, Argentina, por técnicas de biología molecular. Rev vet 26: 2, 147-150, 2015. Las leishmaniasis constituyen un grupo de enfermedades de gran impacto en la salud pública. En gatos, esta parasitosis es considerada de rara ocurrencia, sin embargo, hay un aumento en el número de casos no-tificados en todo el mundo. En Argentina existe poca información sobre la prevalencia y la importancia de los gatos en la transmisión de la enfermedad. El objetivo del presente trabajo fue comunicar un caso de leishmaniasis felina en la ciudad de Corrientes, Argentina, con una descripción de su presentación y la identificación de la especie aplicando técnicas de biología molecular. El caso fue ratificado como leishmaniasis cutánea ulcerativa y el agente etiológico fue identificado como Leishmania (V) braziliensis.Palabras clave: gato, Leishmania braziliensis, Corrientes Argentina.AbstractRuiz, R.M.; Ramírez, N.N.; Alegre, A.E.; Bastiani, C.E.; De Biasio, M.B.: Detection of Leishmania braziliensis in a domestic cat using molecular biology techniques in Cor-rientes, Argentina,. Rev vet 26: 2, 147-150, 2015. Leishmaniasis is a parasitic disease of great impact on public health. Feline leishmaniasis is rare, however, there is an increment in the number of cases reported around the world. In Argentina little information is available regarding the prevalence of this disease as well as the role of cats in its transmission. The ob-jective of this work was to report a case of feline leishmaniasis in Corrientes City, Argentina, with a description of the clinical aspects and the identification of the parasite by means of molecular biology techniques. It can be concluded that this is a case of ulcerative cutaneous leishmaniasis, being the etiologic agent Leishmania (V) braziliensis.Key words: cat, Leishmania braziliensis, Corrientes, Argentina.Recibido: 21 mayo 2015 / Aceptado: 30 de junio 2015INTRODUCCIÓNLa infección por Leishmania sp. en gatos domés-ticos ha sido reportada en varios países en los cuales esta zoonosis es endémica, tales como Portugal, Espa-ña, Italia, Francia, Grecia, Israel, Palestina y Brasil 4 . Muchos estudios imputaron a los animales domésticos como reservorios de leishmaniasis cutánea en América; sin embargo, en la literatura los casos en felinos son considerados como raros y esporádicos 2, 9 . Los sínto-mas clínicos de la leishmaniasis felina son inespecíficos y en ocasiones similares a los signos presentados en la especie canina, lo cual torna difícil el diagnóstico 15, 16 . En los felinos la sintomatología puede incluir anorexia, depresión, estomatitis, gingivitis, vómitos, diarrea, deshidratación, hipertermia, linfoadenopatía local o generalizada, uveítis y atrofia del músculo tem-poral 8, 10 . Como síntoma clínico dermatológico pueden citarse la dermatitis seborreica y alopecia difusa 10 y en cuanto a la localización de las lesiones, éstas pueden ser divididas según área del cuerpo afectada en aqué-llas presentes en extremidades, tronco, todo el cuerpo o cabeza, esta última a su vez se divide en zona de área ocular, nariz, orejas, labios y áreas aleatorias. A nivel mundial los casos de leishmaniasis felina registrados tienen diferentes presentaciones tales como nodular, ul-cerativa, dermatitis, pápulas y lesiones vegetativas, en ese orden de importancia con respecto a la frecuencia 148hallada 5, 8, 16 . Sin embargo esta enfermedad puede ser frecuentemente confundida con otras como micosis 12 . Si bien la leishmaniasis cutánea es la más comúnmente hallada en gatos 8, 9, 13, 14 , la variedad visceral también está presente en esta especie 3, 8, 10 . En cuanto al diagnóstico, las técnicas de biología molecular demostraron ser más sensibles que el cultivo de tejidos de órganos para detectar Leishmania (L) in-fantum chagasi 10 . En estudios serológicos realizados en gatos se demostró que los anticuerpo anti-leishma-nia aparecían más tardíamente que las propias lesiones, lo cual revela que la serología no constituye un buen marcador de enfermedad en aquellos animales que no muestran síntomas clínicos 16 .Los gatos son mamíferos domésticos susceptibles a la infección por Leishmania sp. Dado el constante incremento del número de felinos criados como mas-cotas, resulta necesario esclarecer su participación en el ciclo epidemiológico de la enfermedad, para lo cual deben reportarse casos que permitan establecer su pre-valencia en gatos e identificar la/s especie/s del parásito hallada/s. El objetivo de la presente comunicación fue reportar un caso de leishmaniasis felina en la ciudad de Corrientes, Argentina, con identificación de la especie de Leishmania circulante en la zona.MATERIAL Y MÉTODOSEl hallazgo se produjo durante una campaña de va-cunación antirrábica, desparasitación y diagnóstico de leishmaniasis en caninos y felinos de zonas periféricas de la Ciudad de Corrientes (barrios Anahí y Canal 13). Datos de la Dirección de Zoonosis de la Municipalidad local dan cuenta que se trata de un área con elevado número de casos de leishmaniasis canina. Entre las ac-tividades de campaña, se identificó un gato que presen-taba una lesión cercana al ángulo interno del ojo, cuyo dueño manifestó que la lesión tenía una antigüedad de aproximadamente un año hasta la fecha. El paciente fue un gato doméstico (Felis domesti-cus catus), de sexo hembra, de aproximadamente 5 años de edad y pelo de mediana longitud, bicolor (plata-gris con líneas atigradas). A la inspección reveló buen esta-do general. La lesión cutánea medía 1,5 por 2 cm y era de tipo ulceroso con bordes medianamente elevados, estando situada en un área cercana al ángulo interno del ojo derecho (Figura 1). A la palpación el animal no presentó ganglios inflamados. Se tomó una muestra de la lesión, previo lavado con agua estéril, realizando un suave raspado en los bordes de la úlcera, colocando el material en tubo Ep-pendorf estéril para ser sometido en primera instancia al diagnóstico por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con el fin de detectar la presencia del parásito para luego, en caso afirmativo, identificar la especie mediante biología molecular. Para la detección molecular de Leishmania se pro-cedió a la extracción de ácido desoxirribonucleico de la muestra mediante la digestión con detergente CTAB (bromuro de cetil trimetil amonio) y la purificación se llevó a cabo con cloroformo: alcohol isoamílico. El ADN obtenido fue sometido a la técnica de PCR anida-da para la detección de genomas de Leishmania sp., la cual comprende dos rondas de amplificación. Para la primera ronda se utilizaron los iniciadores externos S4 y S12 16 los cuales amplifican fragmentos de 520 pares de base (pb). Para incrementar la sensibilidad y la especificidad de la reacción con el producto de la primera reacción se aplicó una segunda ronda de amplificación con inicia-dores internos S17 y S18 11 que generan fragmentos de 490 pb. Se utilizó ADN de Leishmania chagasi (pro-veniente del Instituto Nacional de Parasitología “Dr. Mario Fatala Chaben”) como control positivo y agua destilada como control negativo. Para ambas rondas se realizaron las reacciones propuestas en 1994 por Ulia-Figura 1. La flecha indica la lesión ulcerosa en la zona periocular del ángulo interno del ojo derecho del gato.Figura 2. Electroforesis en gel de agarosa 2%. PCR sencilla para Leishmania braziliensis. Calle 1: co-rresponde al material genético de gato y la flecha a la izquierda señala la banda de 103 pb. Calle 2: marcador de peso molecular (Ladder 100). Calles 3 y 4: perte-necen a muestras de caninos no detectables para Leis-hmania braziliensis y si detectables para Leishmania chagasi, utilizadas también como controles. Calle 5: control negativo y calle 6: control positivo a Leishma-nia braziliensis. Ruiz R.M. et al.: Leishmaniasis felina en Argentina. Rev. vet. 26: 2, 147-150, 20151 2 3 4 5 6149na y colaboradores 17 . Para identificar especie de Leis-hmania se desarrollaron reacciones de amplificación específicas para Leishmania chagasi y Leishmania (V) braziliensis. Según técnica descripta por investigadores brasile-ros, para Leishmania (V) braziliensis se utilizaron los iniciadores b1 y b2 que flanquean una región de 103 pb y para Leishmania chagasi se utilizaron los iniciado-res RV1 y RV2 que amplifican fragmentos de 145 pb 1 . Como control positivo se utilizó Leishmania (V) brazi-liensis provista por el Centro Nacional de Parasitología y Enfermedades Tropicales de la Ciudad de Corrientes - CENPETROP (gentileza del Dr. C. Borda) y agua des-tilada como control negativo. Todos los productos de PCR fueron separados por electroforesis en gel de agarosa al 2% y buffer TBE1X, teñidos con bromuro de etidio y visualizados por tran-siluminación UV. Para la comparación de tamaños de los fragmentos amplificados se utilizó un marcador de peso molecular (Ladder 100). RESULTADOS Las pruebas de laboratorio confirmaron el diag-nóstico. Como ratificación de la presencia de ADN del género Leishmania, en el material del raspado de los bordes de la lesión ulcerosa, se verificaron bandas de amplificación de 520 pb para la técnica anidada en la primera ronda y de 490 pb para la segunda ronda de amplificación.Para la identificación de la especie, se constató la presencia de una banda de amplificación de 103 pb, se-ñalando la presencia de ADN de Leishmania (V) brazi-liensis (Figura 2). No hubo evidencias de bandas para Leishmania chagasi.DISCUSIÓN Existe gran controversia sobre el rol que desempe-ñan los gatos en la cadena epidemiológica de la leish-maniasis: algunos investigadores los consideran reser-vorios 6 y otros afirman que son reservorios secundarios o huéspedes accidentales 16 . Es importante destacar que la mayoría de los reportes de casos en gatos se origi-nan en zonas endémicas de leishmaniasis canina 7, 10, 16 , situación que coincide con lo descrito en el presente reporte. Catalogada como leishmaniasis cutánea, la sin-tomatología consistente en una lesión ulcerosa ubicada topográficamente en la cabeza, coincide con la más comúnmente hallada en esta especie, con localización periocular, como se presenta en numerosos casos estu-diados en Sudamérica 16 . En cuanto a la especie hallada, Leishmania braziliensis, es dable destacar que es una de las más frecuentemente identificadas en esta especie animal en Sudamérica, especialmente en Brasil 7 . En conclusión, se reporta leishmaniasis en un gato doméstico de la Ciudad de Corrientes, Argentina, zona geográfica para la cual no se habían encontrado publi-caciones que acreditaran casos anteriores con fehacien-te identificación del parásito. Tal circunstancia quizás deba atribuirse al subdiagnóstico o bien, con respecto al perro, a la menor frecuencia de consultas veteri-narias de pacientes felinos. Se infiere la necesidad de promover la denuncia de nuevos casos de leishmania-sis en gatos, así como la realización de estudios epide-miológicos para establecer de manera fidedigna el rol que desempeñan en la cadena epidemiológica de esta enfermedad en el nordeste argentino. REFERENCIAS 1. DaCosta Lima MS, Andreotti R, Cavalheiros ME, Te-ruya OE, Gutiérrez OA, Cepa MF. 2009. Identificação de espécies de Leishmania isoladas de casos humanos em Mato Grosso do Sul por meio da reação em cadeia da poli-merase. Rev Soc Bras Med Trop 42: 303-308.  2. Laruelle C, Toga I. 1996. Un cas de leishmaniose féline. Prat Med Chir Anim Comp 31: 255-261.  3. Leiva M, Lloret A, Peña T, Roura X. 2005. Therapy of ocular and visceral leishmaniais in a cat. Vet Ophthalmol 8: 71-75. 4. Maia C, Gomes J, Cristóvão J, Nunes M, Martins A, Rebêlo E, Campino L. 2010. Feline leishmania infection in a canine leishmaniasis endemic region, Portugal. Vet Parasitol 174: 336-340. 5. Mancianti F. 2004. Feline leishmaniasis: what’s the epi-demiological role of the cat? Parassitologia 46: 203-206. 6. Maroli M, Pennisi MG, Di Muccio T, Khoury C, Gra-doni L, Gramiccia M. 2007. Infection of sandflies by a cat naturally infected with Leishmania infantum. Vet Par-asitol 145: 357-360.  7. Passos VM, Lasmar EB, Gontijo CM, Fernandes O, Degrave W. 1996. Natural infection of a domestic cat (Fe-lis domesticus) with Leishmania (Viannia) in the metro-politan region of Belo Horizonte, State of Minas Gerais, Brazil. Mem Inst Oswaldo Cruz 91: 19-20.  8. Pirajá GV, DaSilva DT, Baldini LC, Alves MF, Dos-Santos F, Baldini S, DosSantos WJ, Guiraldi LM. 2013. Leishmaniose felina: Revisão de Literatura. Vet e Zootec 20: 203-216. 9. Santos GP, Sanavria A, Marzochi MC, Santos EG, Silva VL, Pacheco RS, Mouta E, Espindola CB, Sou-za MB, Ponte CS, Conceição NF, Andrade MV. 2005. Prevalência da infecção canina em áreas endêmicas de leishmaniose tegumentar americana, do município de Pa-racambi, Estado do Rio de Janeiro, no período entre 1992 e 1993. Rev Soc Bras Med Trop 38: 161-166.  10. Savani ES, Camargo MC, Carvalho MR, Zampieri RA, Santos MG, D Áudria SR, Shaw JJ, Floeter LM. 2004. The first record in the Americas of an autochthonous case of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in domestic cat (Felix catus) from Cotia county, São Paulo, Brazil. Vet Parasit 120: 229-233.  11. Savani ES, Almeida MF, Oliveira MC, D’Auria SR, Sil-va MM, Oliveira ML, Sacramento D. 2010. Detection of Leishmania (Leishmania) amazonensis and Leishma-nia (Leishmania) infantum chagasi in Brazilian bats. Vet Parasitol 168: 5-10. Ruiz R.M. et al.: Leishmaniasis felina en Argentina. Rev. vet. 26: 2, 147-150, 2015150 12. Schubach TM, Schubach AO. 2000. Esporotricose em cães e gatos: revisão. Clin Vet 29: 21-24. 13. Schubach TM, Figueiredo FB, Pereira SA, Madeira MF, Santos IB, Andrade MV, Cuzzi T, Marzochi MC, Schubach A. 2003. Leishmaniose tegumentar americana em gato doméstico (Felis catus) naturalmente infectado no Rio de Janeiro. Rev Soc Bras Med Trop 36: 342. 14. Schubach TM, Figueiredo FB, Pereira SA, Madeira MF, Santos IB, Andrade MV, Cuzzi T, Marzochi MC, Schubach A. 2004. American cutaneous leishmaniasis in two cats from Rio de Janeiro, Brazil: first report of natural infection with Leishmania (Viannia) braziliensis. Trans R Soc Trop Med Hyg 98: 165-167. 15. Shaw SE, Birtles RJ, Day MJ. 2001. Arthropod-trans-mitted infectious diseases of cats. J Feline Med Surg 4: 193-209. 16. Simões L, Bevilaqua CM, Mattos MR, Pompeui MM. 2004. Feline leishmaniasis uncommon or unknown? Rev Portug Ciênc Vet 550: 78-87. 17. Uliana SR, Nelson K, Beverley SM, Camargo EP, Flo-eter LM. 1994. Discrimination amongst Leishmania by polymerase chain reaction and hybridization with small subunit ribosomal DNA derived oligonucleotides. J Euk Microbiol 41: 324-330. Ruiz R.M. et al.: Leishmaniasis felina en Argentina. Rev. vet. 26: 2, 147-150, 2015

https://revistas.unne.edu.ar/index.php/vet/article/download/229/193

Detección de Leishmania (Viannia) braziliensis en gato doméstico de Corrientes, Argentina, por técnicas de biología molecular

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Repositorio Institucional de la Universidad Nacional del Nordeste (RIUNNE)

Revistas UNNE (Universidad Nacional del Nordeste, Argentina)

LAReferencia - Red Federada de Repositorios Institucionales de Publicaciones Científicas Latinoamericanas