Universidad Autónoma Metropolitana (México). Unidad Azcapotzalco. División de Ciencias Básicas e Ingeniería.
Abstract
La inhibición enzimática se considera el punto clave en aplicaciones clínicas y farmacoterapia, es por ello que el uso de biosensores enzimáticos es una buena alternativa en la evaluación de los fármacos. En este trabajo se presenta el desarrollo de un biosensor enzimático, basado en la inmovilización de nanopartículas de oro-Acetilcolinesterasa vía crosslinking. La actividad enzimática se evaluó por amperometría, parámetros como concentración de la enzima y del sustrato, pH y potencial de trabajo aplicado (Ea) fueron optimizados. Los resultados mostraron que la respuesta del biosensor es lineal con r² = 0.999, con sensibilidad de 27.621 µA/mM. LOD = 0.022 mM y LOQ = 2.29 mM, el coeficiente de variación fue de 1. 72%, el tiempo de respuesta fue inferior a 0.1 s, además se encontró que no hay diferencias significativas intra e inter biosensores. El biosensor fue viable para la evaluación del efecto farmacológico de fisostigmina a través de la inhibición enzimática, causada por el fármaco.Enzyme inhibition is considered the key point in clinical applications and the pharmacotherapy, so, use of enzymatic biosensors is a good alternative for drug evaluation. This paper presents development of enzymatic biosensor, based on the immobilization of gold nanoparticles¬Acetylcholinesterase via crosslinking. The enzymatic activity was evaluated by amperometry, parameters such as enzyme, and substrate concentration, pH and applied work potential (Ea), were optimized. Results show a linear response of the biosensor with r² = 0.999, and sensitivity of 27.621 µA/mM. LOD = 0.022 mM and LOQ = 2.29 mM, the coefficient of variation was 1. 72 %, while the response time was less than 0.1 s. lt was found that there are no significant differences intra and inter biosensors. The biosensor was suitable for the evaluation of the pharmacological effect of physostigmine through enzymatic inhibition, caused by the drug by cross-linking with glutaraldehyde in a multi-layer deposition
