Universidad Autónoma Metropolitana (México). Unidad Azcapotzalco. División de Ciencias Básicas e Ingeniería.
Abstract
La proteína humana GPN2 participa en la biogénesis de la RNA polimerasa II, se expresó como proteína recombinante en E. coli y se purificó por cromatografía por afinidad por metales inmovilizados en níquel (IMAC, por sus siglas en inglés Immobilized Metal Afinity Chromatography). El uso de IMAC en proteínas extraídas por E. coli genera muchos contaminantes y requiere de un proceso laborioso de purificación pasando por diferentes procesos cromatográficos. Los aminoácidos ácido glutámico y arginina incrementan la solubilidad de proteínas lo que sugiere que su uso combinado facilite el proceso de purificación. Se usaron dichos aminoácidos durante la purificación de la GPN2 obteniendo la muestra completamente pura pero con un bajo rendimiento de la proteína recombinante. Para ello, se sustituyó arginina por lisina consiguiendo mejorar la cantidad de proteína expresada y purificada. Finalmente, se analizó empleando electroforesis de poliacrilamida (SDS-PAGE) y azul de Coomassie y se midió la cantidad de proteína obtenida por el método de Bradford alcanzando una concentración de 2mg/ml.The human protein GPN2 collaborate in the biogenesis of RNA polymerase II, was expressed like recombinant protein in E. coli and was purified by Immobilized Metal Affinity Chromatography with nickel (IMAC). The use of IMAC in proteins expressed in E. coli recuperate many impurities and is necessary other chromatographic steps. The amino acids glutamic acid and arginine increase the solubility of proteins, this suggest that the combined use of them make easy the purification process. We use both amino acids in the purification of the GPN2 protein obtaining the sample completely pure but with low performance. For that we interchange arginine for lysine and we get a better performance of the quantity of GPN2 in pure form. Finally, was revealed by Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) and stained with Coomassie blue. The Bradford method quantifies a concentration of 2mg/ml
