A high-performance liquid chromatographic separation and quantitative method using a RP-18 columneluted isocratically with methanol and water (73:27, v/v) was developed to analyze the isomeric activecompounds, indigotin and indirubin, present in the chloroform extract of indigo naturalis. Standardizedsolutions of indigotin and indirubin were used to evaluate linearity, precision (repeatability), accuracyand specificity of the method were evaluated. The results exhibited a linearity (r2 > 0.999) of between1.8 - 16.2 μg/ml and 1.6 - 14.4 μg/ml for indigotin and indirubin, respectively. A high degree ofspecificity and robustness, as well as repeatability (relative standard deviation less than 5% for bothstandards and the extracts) and accuracy (% recoveries greater than 95%) were also achievedSe desarrolló un método de cromatografía líquida de alto rendimiento cuantitativa y de separaciónutilizando una columna RP-18 eluida isocráticamente con metanol y agua (73:27, v/v) para analizar loscompuestos activos isoméricos indigotina e indirubina presentes en el extracto de cloroformo del índigonatural. Se utilizaron soluciones estandarizadas de indigotina e indirubina para evaluar la linealidad, laprecisión (replicabilidad), la exactitud y la especificidad del método. Los resultados mostraron unalinealidad (r2 > 0,999) de entre 1,8 y 16,2 μg/ml para la indigotina y entre 1,6 y 14,4 μg/ml para laindirubina. También se obtuvo un alto grado de especificidad, robustez, replicabilidad (desviaciónestándar relativa inferior al 5% para estándares y extractos) y exactitud (% de recuperaciones superioral 95%)
