Optimización de un método para la determinación de la peroxidación lipídica en suero humano

Abstract

A variety of free radicals are produced in human organism as a consequence of normal cell metabolism. These free radicals are generally removed by endogenous scavengers but also can interact with plasma and tisular lipids causing its peroxidation. It is very difficult to determine the magnitude of the peroxidation and also the first lipidic peroxidation products due to their very short half-life. However the evaluation of the secondary lipidic peroxidation products can be quantitatively determined as well as their degradation products such as aldehydes with high reactivity among them malondialdehyde (MDA) is the most relevant. Among the variety of assays developed to estimate the magnitude of oxidative damage in humans, the most commonly employed is based on the reaction of endogenous malondialdehyde (MDA) with 2-thiobarbituric acid (TBA). This reaction yields very stable cromogenic and fluorogenic MDA-TBA adducts, that are detectable by UV spectrophotometry and fluorimetry. In the present study, a colorimetric method described by ASAKAWA and MATSUSHITA, was optimized to determine the human serum lipoperoxides based on the TBA reaction. The reaction conditions established by these authors were rigorously investigated in order to optimize this procedure. Mainly, changes were introduced relating to the reaction time and the lipoperoxides extraction method.Como consecuencia del metabolismo celular normal, se producen radicales libres que generalmente son eliminados por receptores endógenos pero también pueden interaccionar con los lípidos séricos y tisulares provocando su peroxidación. Dada la naturaleza inestable de los productos de la peroxidación lipídica resulta dificultoso determinar la magnitud de dicha peroxidación. Es, sin embargo, más accesible determinar los productos de su degradación metabólica, constituidos fundamentalmente por aldehídos de alta capacidad reactiva, siendo el más significativo el malondialdehído (MDA). Entre la variedad de métodos analíticos desarrollados para determinar el daño oxidativo de los lípidos, el más comúnmente utilizado se basa en la reacción del malondialdehído con el ácido 2-tiobarbitúrico (TBA) para formar aductos cromógenos y fluorescentes de MDA-TBA muy estables y que se pueden cuantificar por espectrofotometría de absorción visible o por fluorimetría. En el presente trabajo, para la determinación de lipoperóxidos en suero humano se ha empleado una técnica colorimétrica basada en la reacción del TBA descrita por ASAKAWA y MATSUSHITA. Para la optimización de esta técnica fueron cuidadosamente analizadas las condiciones de reacción establecidas por estos autores introduciéndose modificaciones que afectan principalmente al tiempo de reacción y al método de extracción de los lipoperóxidos

    Similar works