武田 弘志

渋谷 健

武田, 弘志

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渋谷, 健

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Tokyo Medical University Institutional Repository / 東京医科大学学術情報リポジトリ

1990年9月 第125回東京医科大学医学会総会 一　667　一5 クーロメトリック高速液体クロマトグラフィーによる多種生理活性アミンの迅速、高感度かつ同時測定法の開発と応用6 HPtc・・multip量e［CDシステムによる脳内生理活性アミン測定のための新しい同定モード（薬理学）武田弘志、渋谷　健 （薬理学）武田弘志、増田幹生、辻　裕子、　　　　高田　香、渋谷　健（東海大学薬理学）松宮輝彦　微量生理活性アミンの正確な量的変動の把握には、高感度、選択性、再現性、安定性および簡易性などの諸条件を兼ね備えた定量分析法の確立が必要である。本研究では、演者らが考案した多重クーロメトリック検出器を有する高速液体クロマトグラフィー（HPLC）のcatecholamine（CA）（norepinephrine，epinephrine，　dopamine），　indoleamine　（IA）（5－hydroxytryptamine）およびその関連代謝物（4－hydroxy－3－methoxypheny　iglyco　l，　3，4－d　i　hydroxy－phenylacetic　acid，　homovanillic　acid，　3－metho－xytyramine，5－hydroxyindole－3－acetic　acid）の迅速、高感度かつ同時測定への応用について検討した。CA，　IAおよびその関連代謝物を迅速かつ系絞的に分離を行うために、0．e4Mリン酸と0．04Mクエン酸の混合緩衡液を主体に7，5mM　1一ヘプタンスルホン酸ナトリウム、O．08mM　EDTA，11．7％メタノールおよび4．7Xアセトニトリルから構成されるPH　3．　0の移動相とLZ　BONDAPAK　C18逆相カラムの組合せが適していた。さらに、検出モードの適正を検討した結果、catechol化合物の高感度検出には、酸化シングル、酸化還元および酸化還元スクリーンモードが、またindOleおよびO－methylated　CateChOl化合物には、酸化シングルおよび酸化スクリーンモードが適していた。一方、これら化合物の選択的検出には、酸化還元スクリーンモードが最も適した。以上の結果をふまえ、粗製ラット脳サンプルのCA，1Aおよびその関連代謝物の同時分析に、酸化還元スクリーン検出モードを導入したHPtcシステムを応用した。本システムでの第1、第2電極は、検体の前反応と共殺物質の除去を目的として、それぞれ＋0．35V，＋O．05Vに、実際の測定電極（第3電極）は一〇．35Vに設定した。測定限界は、　O．5－5．Opgであり、分析時間は約20分であった。また、通常、粗製サンプルの直接注入時に認められるクロマトグラム上の大きなフロントピークは、本システムでは、著しく削減されることが観察された。以上の所見から、本HPtcシステムは、微量生理活性アミンの量的変動を追求する多くの研究分野において、実用化が期待できると考える。　微量生理活性アミンの量的変動を把握する上で、多成分系より構成される生体サンプルから目的物質をいかに選択的かつ高感度に検出し、測定するかが重要な課題の1つである。我々は、先に酸化還元スクリーン検出モードを導入した高速液休クロマトグラフィー一（HPLC）が微量生理活性アミンの高感度かつ同時測定に有用であることを報告した。本研究では、このHPLCシステムにおいて、今回、新たに考案したspecitic　ratio（sR）の同定モードとしての適正を検討した。SRは、測定物質の酸化反応に由来する電流と還元反応で得られる電流の比値である。すなわち、本研究で採用した直列三重クーロメトリー作用電極を用いた酸化還元スクリーンモードを導入したHPtcシステムでは、第1と第3作用電極から得られるピーク高さの比として示される。本システムにおける各測定標準物質のSRは、4・一hydrQxy－3－methoxyphenylglyCol：49．3±o：s　（×一io－2）’imea－n±s，b［），　60Febinephrine　：　　　　　　　　一263．8±　Q．2　（×10　　　　 　　　　），　epinephrine　：64．3±　O．46謄21173耀鼎謝誰・羅ll，　　　一2（xJle　　　　），　deoxyepinephrine　：　66．0±　O．7　（×　一2　　），5－hyd－roxyindole－3－kacetic　acid　：　41．9±10　　　　　－2　　　　　　），　homovanillic　acid　：　18，1　±　O，40．3　（XJ　I　O　　　－2　　　　），3・一methoxytyramine　：　51．4±　O．6　（×（×一le　－2　　），　5－hydroxytryptamine　：　38．1　±　1．1　（×10　d2　　），5－hydiroxy－Nw－methyltryptamine　：　37，8±10　　　　　－2　　　　　　）の値を示した。また、粗製ラット線O．9　（×10条体サンプル中の各測定物質のSR値も、標準物質と同様の値を示すことを確認した。さらにSRは、retention　timeと異なり、分離条件の変動に影響を受けず、各測定物質に特有な安定した値を示すことが認められた。以上の所見から、SRは従来の同定モードの指標（retention　time，　capacity　factor）と同様、測定物質の同定に有用であり、さらには、未知物質の検索に応用であると考える。（6）

クーロメトリック高速液体クロマトグラフィーによる多種生理活性アミンの迅速、高感度かつ同時測定法の開発と応用

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