Determinacion del Efecto Citotoxico del Extracto de Hojas de Annona Muricata l. (Guanábana) en Cultivo de Líneas Celulares de Cáncer de Prostata (pc-3) y Cáncer de Páncreas (ASPC-1)

Abstract

El cáncer es una de las causas de muerte más importante a nivel mundial, dentro de ellas el cáncer de próstata y el cáncer de páncreas cuya principal diferencia es que el primero es de tipo localizado y desarrollo lento y el segundo es de tipo metástasico y desarrollo rápido; en ambos tipos se ha observado un incremento en la resistencia a las quimioterapias lo cual motiva la búsqueda de nuevas alternativas de tratamiento. Desde tiempos remotos el uso de plantas ha demostrado efectividad frente a ciertas enfermedades, en la actualidad muchos estudios previos han sugerido que la Annona muricata L. (Guanábana) posee una actividad citotóxica frente a células cancerígenas, esto genera gran interés en el desarrollo de posibles alternativas de tratamiento para el cáncer. Dado que es un tratamiento de origen vegetal se debe determinar el solvente adecuado para extraer la mayor cantidad de sus componentes que le confieren sus propiedades, determinar la concentración y tiempo de exposición óptimo al extracto a utilizar para producir el efecto deseado. La reducción de la viabilidad celular es apoyada por la estadística de significancia, el cual indico una diferencia significativa en la viabilidad entre el control y los grupos de tratamiento (p<0.05). La presente investigación se desarrolló teniendo como objetivo principal la evaluación del efecto citotóxico del extracto de hojas de Annona muricata L. (Guanábana) sobre las líneas celulares de cáncer de páncreas (ASPC-1) y cáncer de próstata (PC-3).Para lograr dicho fin se utilizó hojas de Guanábana las cuales fueron previamente recolectadas en Costa Rica y secadas en sombra; estas fueron molidas para su utilización; luego se procedió a realizar una extracción por maceración utilizando como solvente metanol 90%. Posteriormente se realizaron re-extracciones del primer extracto utilizando 3 solventes adicionales (diclorometano, acetato de etilo, n-butanol), obteniéndose finalmente 5 extractos diferentes: metanol 90% (extracto crudo), diclorometano, acetato de etilo, n-butanol, acuoso (residual); y se procedió a evaluar el rendimiento obtenido de cada re-extracto. Los extractos fueron empleados para evaluar la viabilidad de las líneas celulares ASPC-1 y PC-3 tras ser expuestas a los 5 extractos obtenidos; por 24 y 48 horas de exposición al tratamiento en las siguientes concentraciones 1µg/mL, 3µg/mL, 10µg/mL, 30µg/mL y 100µg/mL. Para poder determinar los efectos de los extractos de hojas de Annona muricata L. sobre la viabilidad celular, se utilizó el ensayo de proliferación celular MTS. También se evaluó si el extracto de hojas de Annona muricata L. puede ser el causante del proceso de activación de las caspasas, lo cual como consecuencia promueve una sucesión de eventos intracelulares que finalmente produce la destrucción controlada de los componentes celulares. El kit de ensayo CaspaseGlo®-3/7 luminescence fue utilizado para determinar y cuantificar el grado y/o nivel de destrucción celular. Paralelamente se midió el nivel de Lactato Deshidrogenasa (LDH) liberada; dado que es una enzima altamente estable la cual es útil para determinar el daño celular a nivel de la membrana.´ PALABRAS CLAVE: Cáncer, Guanábana, Célula