Tese de mestrado em Bioquímica (Bioquímica Médica), apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2011A Polineuropatia Amiloidótica Familiar (PAF) é uma doença hereditária e degenerativa autossómica dominante que constitui um paradigma na forma exemplar como tem sido descrita e estudada nas suas múltiplas vertentes, incluindo a abordagem terapêutica. Porém, como consequência de uma aprendizagem cumulativa e de observações fenotípicas que não encontram explicação na simples ocorrência de mutações pontuais na cadeia polipeptídica da Transtirretina (TTR), cada vez mais se sente a necessidade de ruptura do modelo actual de patogénese desta doença, caracterizada pela formação e deposição de fibras amilóides cujo principal componente é a TTR. Virado para criação de um novo paradigma mais abrangente da PAF, o presente trabalho apostou numa abordagem proteómica comparativa entre os vários estados de progressão da Paramiloidose, para o qual utilizou amostras de plasma de indivíduos portadores heterozigóticos da mutação V30M assintomáticos, com manifestações clínicas da PAF e não portadores de mutações conhecidas da TTR. Foram também utilizadas amostras de plasma de pacientes que - por possuírem doença hepática grave - receberam um fígado PAF (DLTs) e de doentes PAF que receberam um fígado wild-type (CTLs). O trabalho desenvolvido mostrou inequivocamente que a relação da TTR wild-type com o mutante V30M (60 vs 40% em circulação) não varia com a progressão da doença, e foi ainda confirmado o envolvimento da glicação na PAF, a qual apresenta um padrão específico que se encontra exclusivamente aumentado em doentes PAF não transplantados e DLTs. Por outro lado, também se observou uma expressão aumentada de um dos enzimas que controla os níveis de metilglioxal intracelulares - um dos principais agentes glicantes in vivo - apenas em indivíduos assintomáticos, razão pela qual os níveis de glicação observados foram mais baixos. Deste trabalho resultou ainda a identificação de um conjunto relevante de proteínas no contexto da PAF. Muitas são interactuantes da TTR no plasma e apresentam funções de interesse, como chaperone molecular, e relacionam-se em vários processos biológicos. A execução deste trabalho permite reforçar o envolvimento de factores não genéticos no modelo de patogenese da PAF.Familial Amyloid Polyneuropathy (FAP) is a hereditary autosomal dominant degenerative disease which is a paradigm in the exemplary manner as has been described and studied in its multiple aspects, including the therapeutic approach. However, as a result of a cumulative learning and of phenotypic observations that have no simple explanation in the occurrence of mutations in the polypeptide chain Transthyretin (TTR), more and more there is a necessity to break the current model of pathogenesis of this disease, characterized by formation and deposition of amyloid fibrils whose main component is TTR. Facing the creation of a new FAP paradigm, more comprehensive than the existing one, this works’ efforts were turned to a comparative proteomic approach between the progression states of the Paramyloidosis, for which were used plasma samples from heterozygous carriers of the V30M mutation – asymptomatic subjects and patients with clinical manifestations of FAP - and also healthy individuals with no known TTR mutation. In this study were also used plasma samples from patients – suffering from severe hepatic disease - that receibed a FAP liver (DLTs) - and FAP patient who got a wild-type liver (CLTs). The work clearly showed that TTR wild-type and V30M ratio (60 vs 40%) does not vary with disease progression, and was further confirmed the involvement of glycation in FAP, which has a specific pattern which is only increased in non-transplanted FAP patients and DLTs. On the other hand, we also observed and increased expression of an enzyme that controls intracellylar levels of methylglyoxal – one of the main glycation agent in vivo – just in asymptomatic individuals, which is why the observed glycation levels were lower. From this work, it was also possible the identification of a relevant set of proteins in the FAP context. Many are TTR interacting partners in plasma and present functions of interest such as molecular chaperone, and relate in several biological processes. The execution of this work reinforces the involvement of non-genetic factor in the pathogenesis model of FAP
