3週齢のSD系雄性ラット12匹を食糞行動を許容した対照区と食糞行動阻止区に6匹ずつ配し,4週間の飼育期間中に,対照区からは普通糞を,食糞行動阻止区からは含水糞を採取し,それぞれの糞の微生物数を測定した。普通糞では含水糞に比べStaphylococciとVeillonellaeが多く,StreptococciとBacteroidaceaeが少ないことが明らかとなった。普通糞と含水糞で微生物叢が異なることは,含水糞に含まれるビタミン類の合成や消費に関わるものと考えられた。Hydrous feces were ingested by rats in coprophagous behavior. Twelve healthy male Sprague-Dawley strain rats (3 weeks old) were divided into a control group (coprophagy-allowed) of 6 rats and a coprophagy-prevented group of 6 rats. The usual feces from the control group and the hydrous feces from the coprophagy-prevented group were collected during 4 weeks of the experimental period. The viable number of microorganisms in the feces was estimated. The numbers of Staphylococci and Veillonellae, in the usual feces were higher than those of the hydrous feces. Furthermore, the numbers of Streptococci and Bacteroidaceae in the usual feces were lower than those of the hydrous feces. The differences of microflora between the usual feces and hydrous feces seemed to relate to the synthesis and consumption of vitamins in hydrous feces

Ikeda Shuhei

Inamoto Tamio

Kurihara Yoshio

Kurosawa Akira

Sukemori Seizi

Tomoko Hagiwara

栗原 良雄*

池田 周平

祐森 誠司

稲元 民夫

萩原 友子

黒澤 亮

3週齢のSD系雄性ラット12匹を食糞行動を許容した対照区と食糞行動阻止区に6匹ずつ配し,4週間の飼育期間中に,対照区からは普通糞を,食糞行動阻止区からは含水糞を採取し,それぞれの糞の微生物数を測定した。普通糞では含水糞に比べStaphylococciとVeillonellaeが多く,StreptococciとBacteroidaceaeが少ないことが明らかとなった。普通糞と含水糞で微生物叢が異なることは,含水糞に含まれるビタミン類の合成や消費に関わるものと考えられた。Hydrous feces were ingested by rats in coprophagous behavior. Twelve healthy male Sprague-Dawley strain rats (3 weeks old) were divided into a control group (coprophagy-allowed) of 6 rats and a coprophagy-prevented group of 6 rats. The usual feces from the control group and the hydrous feces from the coprophagy-prevented group were collected during 4 weeks of the experimental period. The viable number of microorganisms in the feces was estimated. The numbers of Staphylococci and Veillonellae, in the usual feces were higher than those of the hydrous feces. Furthermore, the numbers of Streptococci and Bacteroidaceae in the usual feces were lower than those of the hydrous feces. The differences of microflora between the usual feces and hydrous feces seemed to relate to the synthesis and consumption of vitamins in hydrous feces.E3KJ00004019088短報Short Communicationdepartmental bulletin pape

萩原, 友子

ハギワラ, トモコ

クロサワ, アキラ

スケモリ, セイジ

イケダ, シュウヘイ

イナモト, タミオ

クリハラ, ヨシオ

Hagiwara, Tomoko

Tokyo University of Agriculture Repository / 東京農業大学リポジトリ

ラット普通糞と含水糞中の微生物叢萩原友子*黒澤 亮*祐森誠司*池田周平**稲元民夫***栗原良雄*平成 +/年 2月 ,+日受付平成 +/年 +,月 +*日受理要約 : -週齢の SD系雄性ラット +,匹を食糞行動を許容した対照区と食糞行動阻止区に 0匹ずつ配し .週間の飼育期間中に 対照区からは普通糞を 食糞行動阻止区からは含水糞を採取し それぞれの糞の微生物数を測定した 普通糞では含水糞に比べ Staphylococciと Veillonellaeが多く Streptococciと Bacte-roidaceaeが少ないことが明らかとなった 普通糞と含水糞で微生物叢が異なることは 含水糞に含まれるビタミン類の合成や消費に関わるものと考えられたキワド : ラット 含水糞 微生物叢緒 言ラットの食糞行動における栄養学的意義についての研究報告は数多くあるが ウサギの硬糞 軟糞のように排泄糞を分類している例は少ない KURIHARAらはラットを食糞行動阻止下で飼育した際に排泄される糞には普通糞と含水糞があり このうち含水糞が食糞行動によって摂取されることを明らかにしている+ また SUKEMORIらは 含水糞は普通糞に比べて ビタミン B+,を約 -..倍 葉酸を約 ..2倍含むことを報告している, これらビタミンは核酸やタンパク質の合成に関与することから 食糞行動を阻止したラットにおいて摂取不足により成長が遅延すると推測されている+, -1水溶性ビタミンは腸内微生物によって合成されることが知られている 飼料に難消化性繊維を添加した際の糞や盲腸内容物の微生物叢に関する報告は数多くあるが 普通糞と含水糞を区別して 微生物叢を確認した例はみられない 先に述べたように 普通糞と含水糞ではビタミン含量に大きな差があり これら糞中に含まれる微生物叢は異なると考えられるそこで本試験は 阻止ケジにより完全に食糞行動を阻止した際の普通糞と含水糞の糞中微生物叢の比較検討を目的として行った材料および方法日本クレア株 より購入した -週齢のコンベンショナル SD系雄性ラット +,匹を対照区 食糞行動許容区と食糞行動阻止区の ,区に 0匹ずつ配分した 室温 ,-++,時間の明暗周期に設定した調温室内で +週間の予備飼育を行った 対照区のラットは市販の金属ケジで単飼したが 食糞行動阻止区のラットについては GEYER ら+3.02が考案しさらに我が改良を加えた3筒型阻止ケジに +匹ずつ収容し 市販の金属ケジに頭の向きが逆になるように ,匹ずつ吊して .週間の飼育試験を行った 供試飼料は日本クレア株 の飼育繁殖用飼料 CE-,を毎朝 3時に給与した 飼料および水は自由摂取とした糞は両区ともにケジの下に準備した受け皿で 尿やこぼした飼料の付着のないものを採取した 対照区からは食糞行動を許容して含水糞を摂取させた際の普通糞を 食糞行動阻止区からは含水糞を各採取し それぞれの微生物数を測定した微生物の分離は MITSUOKA et al.+*の方法に準拠して非選択培地 -種 RGCA agar, TS agar 日水 EG agar日水ならびに選択培地 ++種を用いて行った嫌気性菌用稀釈液で +*倍段階稀釈した稀釈液をそれぞれの選択培地すなわち Enterobacteriaceaeには DHL agar 日水Staphylococciに は PEES agar, Streptococciに はTATAC agar,また酵母および糸状菌には PD agarを調製して塗抹し TS agarとともに好気的に -/ ,.時間培養した また Bifidobacteriaは BS agar, Lactobacilliは変法 LBS agar, Veillonellaeは変法 VS agar, Eubacteriaは ES agar, Bacteroidaceaeは Bacteroides agar 日水Clostridiaは NN agarに塗抹して EG agarとともにアネロパック 三菱ガス で嫌気的に -/ .2時間培養した SelenomonadsはM agarに塗抹し RGCA agarと共にロルチュブ法にてそれぞれ -/ ,ないし /日間嫌気培養した 培養後にそれぞれの平板上に観察された典型的なコロニをそれぞれの属とみなし 各糞 +g当たりの生菌数 Colony forming unit : CFUを算出した統計処理は一元配置分散分析で検定した この際の反復数は 0とした結 果好気培養菌数 : 普通糞では Enterobacteriaceaeが /.-1短 報ShortCommunications******東京農業大学大学院農学研究科畜産学専攻東京農業大学農学部畜産学科秋田県立大学生物資源学部応用生物科学科Jour. Agri. Sci., Tokyo Univ. of Agric., .2 (.), +03+1, (,**.)東京農大農学集報 .2 . +03+1, ,**.*..2 log CFUg Staphylococciが 1.00*./. logCFUg Streptococciが 2.*0*.-. log CFUg 含水糞では Enterobacteriaceaeが ...2*.0* log CFUgStaphylococciが /.23*.-0 log CFUg Streptococciが 2.3**.+, log CFUgとなった酵母と糸状菌はいずれの糞においても検出限界以下の数値であった 普通糞では含水糞に比べ Staphylococciが有意に高く また有意の差は認められなかったが 含水糞では普通糞に比べ Strep-tococciが高くなる傾向を示した嫌気培養菌数 : 普通糞では Lactobacilliが 2.01*.,,log CFUg Bifidobacteriaが 1.2,*.,2 log CFUgVeillonellaeが 0.0,*.-0 log CFUg Eubacteriaが-..3*../ log CFUg Bacteroidaceaeが 1..,*.-.log CFUg Clostridiaが 3.+,*.,* log CFUgSelenomonadsが /.12*..* log CFUg 含水糞ではLactobacilliが 2..0*..- log CFUg Bifidobacteriaが 1.0* *.+, log CFU g Veillonellaeが /.12 *.3-log CFUg Eubacteriaが -./.*.,3 log CFUgBacteroidaceaeが 2.1.*..* log CFUg Clostridiaが3.*. *.+3 log CFU g Selenomonadsが ..32 *.0-log CFUgとなった有意の差は認められなかったが普通糞では含水糞に比べVeillonellaeが高く また含水糞では普通糞に比べ Bacteroidaceaeが有意に高くなる傾向を示した考 察ラットの含水糞にはタンパク質合成 核酸合成に関わるビタミンが多く含まれており 食糞行動にはそれらビタミンを摂取するという栄養学的意義があると考えられる 本試験は 普通糞と含水糞のビタミン含量が異なることから 普通糞と含水糞の微生物叢の比較検討を目的として行った含水糞中の生菌数は 普通糞に比べて 好気培養菌ではStreptococciが高くなる傾向を示し また嫌気培養菌ではBacteroidaceaeが有意に高い数値を示した この傾向は砂川ら++が報告しているラットの盲腸内容物の微生物叢と類似している 通常飼育下で 盲腸内容物と排泄糞 普Fig. , Comparison of aerobic-cultured bacteria in each fecesSigniﬁcant di#erence was recognized between the di#erent superscript letters (n0, P*.*/).Fig. + Coprophagy-prevented tube cageFig. - Comparison of anaerobic-cultured bacteria in each fecesSigniﬁcant di#erence was recognized between the di#erent superscript letters (n0, P*.*/).萩原黒澤祐森池田稲元栗原170通糞 では優勢な微生物群は異なるが 含水糞中の優勢な微生物群は盲腸内容物と類似であったことから 含水糞は微生物学的には盲腸内容物が殆ど変化を受けない状態で排泄されており ラットは食糞行動において盲腸内容物を摂取していると考えられる これは KENAGYと HOYT+,TAKAHASHIと SAKAGUCHI+-が 他の齧歯目で盲腸内容物を摂取しているという報告と一致した食糞行動を阻止することによる微生物叢への影響について GUSTAFSSONと FITZGERALDの食糞行動阻止により糞や盲腸内容物中の乳酸菌量が減少したという報告+.とは逆に LEV et al.+/は糞中の Lactobacilli数は食糞行動の許容または阻止により左右されないことを報告している 上述した報告では糞を分別することなく 採取した糞を均一と考え微生物定量を行っているのに対し 本試験ではKURIHARAの報告+に基づき糞の分別を行っている よって本試験の結果において 含水糞が普通糞に比べ Strepto-cocciや Bacteroidaceaeを多く含んでいたことは食糞行動を阻止することによって これら微生物数に差が生じたのではなく 機序はまだ明らかでないが 普通糞と含水糞が形成される過程の違いによるものと考えられる またBROWN et al.+0はラットやウサギにおける食糞行動は ムラミルペプチドの一種で 細菌細胞壁の構成分子であるFactor S FSの効果的な摂取手段であると述べている今回 FSについては確認を行っていないが含水糞中に水溶性ビタミンが多いことは SUKEMORIら,により報告されており さらに ヒトの糞便でも 結腸に存在する細菌により合成されたビタミン B+,は +日の必要量以上に含まれている+1が ヒトは糞食でもしない限り このビタミンを利用できないとする報告+2もある 今回 含水糞中に多いと判断された Bacteroidaceaeならびに Streptococciとビタミン合成および消費に関して Bacteroidaceaeはビタミン類 B+, B,, B0, B+,, K, E,ニコチン酸 ビオチン 葉酸など を合成して 宿主に利用させることが広く知られているまた Streptococciはアミノ酸やビタミンなどを要求する場合が多いといわれている さらに光岡+3は葉酸を合成する Escherichia coliと これを必要とする Streptococ-cus faecalisとのビタミン合成の面での共生を示唆している従ってビタミン B+,, 葉酸を合成する Bacteroidaceaeが含水糞中に多く含まれることは 含水糞にこれらビタミンが多く含まれることを裏付ける結果と考えられた しかし これらビタミンを消費する側にある Streptococciが多く含まれるのはビタミン合成の面での共生のためではないかと考えられるこのことから今後 Bacteroidaceaeのみを抑制する抗菌剤を投与するなどして葉酸量と Strep-tococci数の推移を見極めて判断する必要があると思われた謝辞 : 終わりに 本報告を作成するにあたり御校閲を賜りました 鹿江雅光博士ならびに本試験の実施にあたり御協力を賜りました 黒澤利江氏に深謝致します参考文献+ KURIHARA, Y., IKEDA, S., SUKEMORI, S. and ITOH, S. +331.Hydrous Feces Induced Coprophagy in Rat., Jpn. J.Livest. Management, -, (-), 3+32., SUKEMORI, S., IKEDA, S., KURIHARA, Y. and ITO, S. ,**,.Amino acid,mineral and vitamin levels in hydrous fecesobtained from coprophagy-prevented rats., J. Anim.Physiol a Anim. Nutr., 21, ,+-,,*.- BARKI, V.H., DERSE, P.H., COLLINS, R.A. HART, E.B. andELVEHJEM, C.A. +3.3. The infuluence of coprophagy onthe biotin and folic acid requirements of the rat., J.Nutr., -1, .--./0.. BARNES, R.H. and FIALA, G. +3/2 a. E#ect of the preven-tion of coprophagy in the rat. I. Growth studies., J. Nutr.,0., /--/.*./ BARNES, R.H., FIALA, G. and KWONG, E. +30-. Decreasedgrowth rate resulting from prevention of coprophagy.,Federation Proc., ,,, +,/+,2.0 DAFT, F.S., MCDANIEL, E.G., HERMAN, L.G., ROMINE, M.K.and HEGNER, J.R. +30-. Role of coprophagy in utilizationof B vitamins synthesized by intestinal bacteria., Feder-ation Proc., ,,, +,3+--.1 池田周平祐森誠司栗原良雄伊藤澄麿 ,**+ 食糞行動の阻止時間の相違がラットの成長におよぼす影響 東京農業大学農学集報 .0 , +,.+,3.2 GEYER, R.P., GEEYER, B.R., DERSE, P.H., ZINKIN, T.,ELVERJEM, C.A. and HART, E.B. +3.0. Growth studies withrats kept under conditions which prevent coprophagy.,J. Nutr., --, +,3+.,.3 SUKEMORI, S., IKEDA, S., KURIHARA, Y. and ITO, S. ,***.Comparison of Three Types of Equipment for Prevent-ing Coprophagy in Rats., Jpn. J. Livest. Management, -0(,), 031/.+* MITSUOKA, T., OHNO, K., BENNO, Y., SUZUKI, K. and NAMBA,K. +310. Die Faekalﬂora bei Menschen. IV. Mitteilung.Vergleich des neu entwickelten Verfahrens mit dembisherigen ublichen Verfahren zur Darmﬂoraanalyse.,Zentralbl. Bakteriol. Parasitenkd. Infektionskr. Hyg., I,Abt. Orig., A,-. : ,+3,--.++ 砂川武史青山祐美松山 惇新井千秋清澤 功,**+ プロピオン酸トリグリセリドのラット糞便および盲腸内容物のミクロフロラと有機酸組成に及ぼす影響 日本栄養食料学会誌 /. , 1+2*.+, KENAGY, G.J. and HOYT, D.F. +32*. Reingestion of feces inrodents and its daily ryhthmicity., Oecologia., .., .*-.*3.+- TAKAHASHI, T. and SAKAGUCHI, E. ,***. Role of the furrowof the proximal colon in the production of soft and hardfeces in nutrias, Myocastor coypus., J. Comp. Physiol. B.,+1*, /-+/-/.+. GUSTAFSSON, B.E. and FITZGERALD, R.J. +30*. Alterationin intestinal microbal ﬂora of rat with tail cups toprevent coprophagy., Proc. Soc. Exptl. Biol. Med., +*.,-+3-,,.+/ LEV, M., ALEXANDER, R.H. and LEVENSON, S.M. +300. Sta-bility of the Lactobacillus Population in Feces and Stom-ach Contents of Rats Prevention from Coprophagy., J.Bacteriol., 3,, +, +-+0.+0 RICHARD, B., PRICE, R.J. KING, M.G. and HUSBAND, A.J.+322. Autochthonous Intestinal Bacteria and Copro-phagy : A Possible Contribution to the Ontogeny andRhythmicity of Slow Wave Sleep in Mammals., MedicalHypotheses, ,0, +1++1/.ラット含水糞中の微生物叢 171+1 GIRDWOOD, R.H., +30*. The intestinal content in perni-cious anemia of factors for the growth of Streptococcusfaecalis and Lactobacillus leichmanni., Blood, /, +**3+*+0.+2 矢島高二 +33* 栄養素の補給 光岡知足編 腸内細菌学朝倉書店 東京 -*1-+-.+3 光岡知足 +312 腸内細菌と家畜の生産性 日獣会誌 -+,/3,01.Microﬂora in Usual Feces andHydrous Feces of RatsByTomoko HAGIWARA*, Akira KUROSAWA*, Seizi SUKEMORI*, Shuhei IKEDA**,Tamio INAMOTO*** and Yoshio KURIHARA*(Received August ,+, ,**-/Accepted December +*, ,**-)Summary : Hydrous feces were ingested by rats in coprophagous behavior. Twelve healthy maleSprague-Dawley strain rats (- weeks old) were divided into a control group (coprophagy-allowed) of 0rats and a coprophagy-prevented group of 0 rats. The usual feces from the control group and thehydrous feces from the coprophagy-prevented group were collected during . weeks of the experimen-tal period. The viable number of microorganisms in the feces was estimated. The numbers ofStaphylococci and Veillonellae, in the usual feces were higher than those of the hydrous feces.Furthermore, the numbers of Streptococci and Bacteroidaceae in the usual feces were lower thanthose of the hydrous feces. The di#erences of microﬂora between the usual feces and hydrous fecesseemed to relate to the synthesis and consumption of vitamins in hydrous feces.Key Words : rat, hydrous feces, microﬂora******Department of Animal Science, Graduate School of Agriculture, Tokyo University of AgricultureDepartment of Animal Science, Faculty of Agriculture, Tokyo University of AgricultureDepartment of Biotechnology, Faculty of Bioresouece Sciences, Akita Prefectural University萩原黒澤祐森池田稲元栗原172

Microflora in Usual Feces and Hydrous Feces of Rats

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ラット フツウ フン ト ガンスイ フン チュウ ノ ビ セイブツ ソウ

ラットフツウフントガンスイフンチュウノビセイブツソウ

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