Obtention of callus and cell suspension of different plant species

Abstract

Plântulas de alfafa (Medicago sativa L.), puerária (Pueraria phaseoloides (Roxb.) Benth) e tomateiro (Lycopersicum esculentum Mill) com quinze dias após a germinação, e de batata (Solanum tuberosum L.) e batata-doce (Ipomoea batatas (L.) Lam) com 40 dias, foram utilizadas na obtenção de explantes, transferidos para tubos contendo 20 ml de meio Murashige & Skoog (MS) suplementado com 5 mg de 2,4-D e 1 mg de cinetina por litro de meio, para obtenção de calos. Os calos obtidos foram repicados para meio MS com 2 g/l de caseina hidrolizada e utilizados para a obtenção de suspensões de células, em frascos-erlenmeyer, contendo 25 ml de meio MS líquido, suplementados com 5 tng de 2,4-D, 2 mg de biotina, 1 mg de cinetina e 1 g de caseina hidrolizada por litro e de meio. As suspensões de células foram mantidas sob agitação, de 90 rpm, a 27 ºC e com 16 hs/diárias de luz (1000 lux). O estabelecimento das curvas de crescimento e peso fresco de células foi determinado durante 24 dias, em intervalos de três dias, sendo sua viabilidade monitorada, periodicamente, pela técnica de redução do INT. As suspensões de células obtidas de calos de hipocótilo de alfafa, batata-doce e puerária, apresentaram maior viabilidade e crescimento mais rápido e abundante, que aquelas obtidas de calos de hipocótilo de batata e tomateiro, e radícula de pueráriaFifteen-day old seedlings of lucerne (Medicago sativa L.), pueraria (Pueraria phaseoloides (Roxb.) Benth) and tomato (Lycopersicum esculentum Mill), and sweet potato (Ipomoea batatas (L.) Lam) were transfered to tubes containing 20 ml of Murashige & Skoog (MS) medium, ammended with 5 mg/l of 2,4-D and 1 mg/l of cinetin per litre of medium, for the obtention of callus. The obtained calluses were transplanted to Erlenmeyer flasks containing MS medium with 2 g/l of casem, and were used for the obtention of cell suspensions, in Erlenmeyer flasks containing 25 ml of liquid MS medium, ammended with 5 mg of 2,4-D, 2 mg of biotin, 1 mg of cinetin and 1 g of casein per litre of medium. The cell suspensions were incubated, under 90 rpm shaking at 27 ºC temperature and 16 h of light a day (1,000 lux). The establishment of the growth curves and fresh weight of cells was determined, every three days, during 24 days with periodical monitoring of cell viability, through INT (iodonitrotetrazolium) monitoring technique. Suspensions from calluses of lucerne, sweet potato and pueraria hypocotyl exhibited more abundant and faster growth rate and greater viability than those from potato and tomato hypocotyl, and pueraria radicles

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