The objective of this work was to evaluate the chemical composition and fatty acid profile of milk from F1 Holstein/Zebu cows in different lactation periods, when receiving different levels of dietary supply in percentage of body weight. Sixty cows were evaluated, with five levels of dietary supply and three lactation periods. The levels of dietary supply had no effect on the production of milk corrected to 3.5% fat (12.25 kg per day). There was also no effect of dietary supply levels, in the different lactation periods, on contents of fat (3.34%), protein (3.41%), lactose (4.60%), total solids (12.0%), defatted dry extract (8.80%), and urinary nitrogen (14.5 mg dL-1), nor on somatic cell count (89.98 mL-1). As the dietary supply level was reduced, the sum of saturated fatty acids in milk was decreased in up to 9.15% and that of monounsaturated fatty acids was increased in up to 25.28%. Feed restriction does not alter the chemical composition of milk, but improves its quality of fat by reducing saturated fatty acid content, increasing the concentration of monounsaturated and desirable fatty acids in up to 54%, and increasing the hypo- and hypercholesterolemic fatty acid ratio in up to 168.97%.O objetivo deste trabalho foi avaliar a composição química e o perfil de ácidos graxos do leite de vacas F1 Holandês/Zebu, em diferentes períodos de lactação, ao receber diferentes níveis de fornecimento da dieta em percentagem de peso corporal. Foram utilizadas 60 vacas, com cinco níveis de oferta da dieta e três períodos de lactação. Os níveis de oferta não influenciaram a produção de leite corrigida a 3,5% de gordura (12,25 kg por dia). Também não houve efeito dos níveis de oferta, nos diferentes períodos de lactação, sobre os teores de gordura (3,34%), proteína (3,41%), lactose (4,60%), sólidos totais (12,0%), extrato seco desengordurado (8,80%) e nitrogênio urético (14,5 mg dL-1), nem sobre a contagem de células somáticas (89,98 mL-1). À medida que os níveis de oferta foram reduzidos, o somatório dos ácidos graxos saturados do leite diminuiu em até 9,15% e o dos monoinsaturados aumentou em até 25,28%. A restrição alimentar de vacas F1 Holandês/Zebu não altera a composição química do leite, mas melhora a qualidade da sua gordura, ao reduzir os teores de ácidos graxos saturados, aumentar os dos ácidos graxos monoinsaturados e dos ácidos graxos desejáveis em até 54%, e elevar a relação dos ácidos graxos hipo e hipercolesterolêmicos em até 168,97%