Comparación de dos métodos de extracción de ADN de Boopedon nubilum para estudios de variabilidad genética

Abstract

La extracción de ADN ha sido un factor limitante en estudios genéticos que se basan en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y en digestiones del ADN, por lo que es importante utilizar protocolos que permitan obtener cantidades suficientes de ADN con una pureza elevada. En el presente trabajo se evaluaron dos métodos de extracción de ADN a partir de tejido muscular del fémur posterior de Boopedon nubilum (Ortoptera: Acrididae), basados en CTAB y SDS; las cantidades promedio obtenidas fueron 286 y 302 ng/µL respectivamente, que son suficientes para la amplificación por PCR de algún tipo de marcador molecular; las diferencias no fueron estadísticamente significativas (p=0.82). El ADN obtenido con el método que usa CTAB presentó mayor contaminación con proteínas (A260/A280 = 1.46) que el obtenido con el método que usa SDS (A260/A280 = 1.97). El ADN obtenido con el método de SDS fue de mayor tamaño molecular y presentó menor degradación que el obtenido con el método de CTAB, además pudo ser digerido con enzimas de restricción con mayor reproducibilidad que el obtenido con el método con CTAB. La inclusión del detergente SDS en el método de extracción de ADN de Boopedon nubilum permite obtener este material en cantidad y calidad adecuadas para estudios de variabilidad genética de esa especie