Analisi di polimorfismi del DNA genomico e mitocondriale in tessuti fissati: confronto fra formalina e Complucad\uae

Abstract

Sia in ambito di indagini di paternit\ue0 che in ambito penale sempre pi\uf9 frequentemente il genetista forense si trova a effettuare analisi di campioni provenienti da tessuti conservati e fissati per esami istologici. Scopo del lavoro era di valutare in modo pi\uf9 ampio rispetto ad uno studio gi\ue0 condotto nel nostro laboratorio se il Complucad\uae (Complucad International S.A., Zaragoza, Spagna), fissativo a base alcoolica, possa esser pi\uf9 adatto per l\u2019analisi genetica rispetto alla formalina. A tale fine sono stati prelevati in sede di autopsia 25 mg di tessuto cerebrale, polmonare, epatico, cardiaco e renale da 5 individui. Una parte \ue8 stata impiegata per definire il profilo genetico e il mitotipo del donatore, una parte \ue8 stata conservata in doppio con le due metodiche per 3, 7, 30 e 300 giorni. Il DNA \ue8 stato estratto con NucleoSpin\uae Tissue (Macherey-Nagel, D\ufcren, Germany) e quantificato con QuantiBlot\uae Human DNA Quantitation Kit (Applied Biosystem, Foster City, CA, USA). Di ciascun campione \ue8 stata eseguita una PCR quadruplex dei loci LPL, F13B, FESFPS, F13A01 (Promega, Madison, WI, USA). Per i soli campioni conservati per 300 giorni sono stati analizzati ulteriori 15 loci STR ed il locus dell\u2019Amelogenina impiegando il kit AmpFlSTR\uae Identifiler\uae (Applied Biosystem); gli stessi estratti sono stati inoltre sottoposti a sequenziamento delle regioni HV1 e HV2 del mtDNA. I risultati ottenuti dimostrano come la concentrazione di DNA sia pressoch\ue9 simile per le due metodiche, ma mediante corsa elettroforetica su gel di agarosio si \ue8 osservata una cospicua degradazione del DNA dei tessuti conservati in formalina per pi\uf9 di 3 giorni. Unicamente per i campioni fissati con Complucad\uae \ue8 stato ottenuto un buon profilo STR ad ogni tempo analizzato, mentre nessun profilo genetico utilizzabile per un confronto si \ue8 avuto dai campioni fissati in formalina per pi\uf9 di 7 giorni. Viceversa il sequenziamento del mtDNA \ue8 risultato utile per un confronto in entrambi i casi

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