El Núcleo celular (N) es la adquisición evolutiva que define a las células eucariotas. En el núcleo, los lípidos se encuentran formando parte de dos pooles principales, la doble membrana nuclear compuesta de glicerofosfolípidos, esfingolípidos y colesterol, y dentro del N, la matriz nuclear, enriquecida en Lípidos Neutros (LN), y compuesta principalmente de TAG y CE. En nuestro laboratorio hemos identificado un nuevo dominio nuclear, las Gotas Lipídicas Nucleares (N-LD), donde se concentran los TAG y CE nucleares, y una monocapa lipoproteica, compuesta de fosfolípidos, colesterol y proteinas insertas en la misma. Ambos pooles lipídicos corresponden a fuentes alternativas con diferente composición química, propiedades físicas, regulación y funciones.Facultad de Ciencias Médica

Lagrutta, M.

Layerenza, Juan Pablo

Sisti, María Susana

Ves Losada, Ana

El Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

 
 
 
 
2011 Octubre, 2(3): 1-1 
 
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ANÁLISIS DE LAS PROTEÍNAS DE LAS GOTAS LIPÍDICAS NUCLEARES 
Lagrutta LC1, Layerenza JP1, Sisti MS1, Ves-Losada A1,2 
 
1INIBIOLP (CCT-La Plata, CONICET, UNLP); 2Dpto. Cs. Biol. - Fac. de Cs. Exactas, UNLP 
 
E-mail: lucialagrutta@hotmail.com 
 
Introducción 
El Núcleo celular (N) es la adquisición evolutiva que define a las células eucariotas. En el 
núcleo, los lípidos se encuentran formando parte de dos pooles principales, la doble 
membrana nuclear compuesta de glicerofosfolípidos, esfingolípidos y colesterol, y dentro del 
N, la matriz nuclear, enriquecida en Lípidos Neutros (LN), y compuesta principalmente de 
TAG y CE. En nuestro laboratorio hemos identificado un nuevo dominio nuclear, las Gotas 
Lipídicas Nucleares (N-LD), donde se concentran los TAG y CE nucleares, y una monocapa 
lipoproteica, compuesta de fosfolípidos, colesterol y proteinas insertas en la misma. 
Ambos pooles lipídicos corresponden a fuentes alternativas con diferente composición 
química, propiedades físicas, regulación y funciones.  
 
Objetivos 
El objetivo de este trabajo fue hacer un análisis cualitativo y cuantitativo de las proteínas que 
forman parte de la monocapa de las N-LD, a fin de poder determinar la función de las 
mismas y en qué eventos celulares se encuentran involucradas.Hipótesis de trabajo: la 
monocapa de la N-LD está compuesta por proteínas involucradas en el metabolismo lipídico 
y en los sistemas de transducción de señales nucleares. Ya sea como componentes 
estructurales, enzimas, factores de transcripción y/o proteínas de transporte.  
 
Materiales y Métodos 
Se aislaron núcleos enteros de células de hígado de rata por el método de Blobel y Potter, 
modificado por Kasper. Se determinó la pureza de los mismos por microscopía electrónica y 
por proteínas marcadoras. Se aislaron Gotas Lipídicas Citosólicas (C-LD) y N-LD a partir de  
homogenato y N entero de hígado de rata mediante la técnica de  ultracentrifugación en 
gradiente de sacarosa que se puso a punto en el laboratorio.  
Se puso a punto la metodologia adecuada para cuantificar las proteinas de las N-LD, dado a 
que se encuentran en muy baja concentración.  
Las proteínas se resolvieron por SDS-PAGE. Los geles se tiñeron con Coomassie Blue y 
posteriormente con Plata.  
 
Resultados 
Se obtuvo el perfil proteico de las Gotas Lipícas de N de hepatocitos, y se comparó con el 
perfil de proteínas de N, matriz nuclear (núcleos desprovistos de la doble membrana 
nuclear), homogenato de hígado de rata y C-LD. Las proteínas de las N-LD se resolvieron en 
11 bandas a las que le asignamos la denominación α, siendo las mayoritarias α3, α7 y α11, 
α2 y α4, en ese orden. En el N se observó un perfil proteico diferente al de las N-LD. Por su 
parte, las proteínas de las C-LD se resolvieron en 11 bandas a las que le asignamos la 
denominación A, y las mayoritarias fueron las bandas A5, A8, A6 y A11, A10 en ese orden. 
Las proteínas de las bandas α1, α3 y α11 de las N-LD no están  presentes en las gotas 
citosólicas. Además, las proteínas presentes en las bandas A1, A9 y A11 de las C-LD no 
están en el Núcleo entero. 
 
Conclusiones 
Las proteínas de las N-LD poseen un perfil proteico con diferencias respecto al de las C-LD,  
y por lo tanto podemos suponer que poseen diferencias en su metabolismo y en su 
regulación.  
Teniendo en cuenta que la banda proteica mayoritaria en las N-LD es minoritaria en el N,  y 
que además no se encuentra en las C-LD, la/s proteína/s presentes en la misma podrían ser 
potenciales proteínas marcadoras de las N-LD. 
 


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Análisis de las proteínas de las gotas lipídicas nucleares

Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

    2011 Octubre, 2(3): 1-1  1 ANÁLISIS DE LAS PROTEÍNAS DE LAS GOTAS LIPÍDICAS NUCLEARES Lagrutta LC1, Layerenza JP1, Sisti MS1, Ves-Losada A1,2  1INIBIOLP (CCT-La Plata, CONICET, UNLP); 2Dpto. Cs. Biol. - Fac. de Cs. Exactas, UNLP  E-mail: lucialagrutta@hotmail.com  Introducción El Núcleo celular (N) es la adquisición evolutiva que define a las células eucariotas. En el núcleo, los lípidos se encuentran formando parte de dos pooles principales, la doble membrana nuclear compuesta de glicerofosfolípidos, esfingolípidos y colesterol, y dentro del N, la matriz nuclear, enriquecida en Lípidos Neutros (LN), y compuesta principalmente de TAG y CE. En nuestro laboratorio hemos identificado un nuevo dominio nuclear, las Gotas Lipídicas Nucleares (N-LD), donde se concentran los TAG y CE nucleares, y una monocapa lipoproteica, compuesta de fosfolípidos, colesterol y proteinas insertas en la misma. Ambos pooles lipídicos corresponden a fuentes alternativas con diferente composición química, propiedades físicas, regulación y funciones.   Objetivos El objetivo de este trabajo fue hacer un análisis cualitativo y cuantitativo de las proteínas que forman parte de la monocapa de las N-LD, a fin de poder determinar la función de las mismas y en qué eventos celulares se encuentran involucradas.Hipótesis de trabajo: la monocapa de la N-LD está compuesta por proteínas involucradas en el metabolismo lipídico y en los sistemas de transducción de señales nucleares. Ya sea como componentes estructurales, enzimas, factores de transcripción y/o proteínas de transporte.   Materiales y Métodos Se aislaron núcleos enteros de células de hígado de rata por el método de Blobel y Potter, modificado por Kasper. Se determinó la pureza de los mismos por microscopía electrónica y por proteínas marcadoras. Se aislaron Gotas Lipídicas Citosólicas (C-LD) y N-LD a partir de  homogenato y N entero de hígado de rata mediante la técnica de  ultracentrifugación en gradiente de sacarosa que se puso a punto en el laboratorio.  Se puso a punto la metodologia adecuada para cuantificar las proteinas de las N-LD, dado a que se encuentran en muy baja concentración.  Las proteínas se resolvieron por SDS-PAGE. Los geles se tiñeron con Coomassie Blue y posteriormente con Plata.   Resultados Se obtuvo el perfil proteico de las Gotas Lipícas de N de hepatocitos, y se comparó con el perfil de proteínas de N, matriz nuclear (núcleos desprovistos de la doble membrana nuclear), homogenato de hígado de rata y C-LD. Las proteínas de las N-LD se resolvieron en 11 bandas a las que le asignamos la denominación α, siendo las mayoritarias α3, α7 y α11, α2 y α4, en ese orden. En el N se observó un perfil proteico diferente al de las N-LD. Por su parte, las proteínas de las C-LD se resolvieron en 11 bandas a las que le asignamos la denominación A, y las mayoritarias fueron las bandas A5, A8, A6 y A11, A10 en ese orden. Las proteínas de las bandas α1, α3 y α11 de las N-LD no están  presentes en las gotas citosólicas. Además, las proteínas presentes en las bandas A1, A9 y A11 de las C-LD no están en el Núcleo entero.  Conclusiones Las proteínas de las N-LD poseen un perfil proteico con diferencias respecto al de las C-LD,  y por lo tanto podemos suponer que poseen diferencias en su metabolismo y en su regulación.  Teniendo en cuenta que la banda proteica mayoritaria en las N-LD es minoritaria en el N,  y que además no se encuentra en las C-LD, la/s proteína/s presentes en la misma podrían ser potenciales proteínas marcadoras de las N-LD.  

SEDICI - Repositorio de la UNLP

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