Objetivos: Estudiar la cronología de aparición de células INGAP positivas en fetos de ratas normales y la evolución simultánea de su masa y la de las células β en ratas preñadas y su presencia en el páncreas de rata.Facultad de Ciencias Médica

Borelli, María Inés

Del Zotto, Héctor Herminio

Flores, Luis Emilio

Madrid, Viviana

Maiztegui, Bárbara

Raschia, M. A.

Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

    2010 Octubre, 2(1): 1-2  1  ONTOGÉNESIS Y EVOLUCIÓN DE LA MASA DE CÉLULAS INGAP (ISLET  NEOGENESIS ASSOCIATED PROTEIN) POSITIVAS EN EL PERÍODO INTRAUTERINO Y EN ADULTOS CON INSULINORRESISTENCIA  FISIOLÓGICA (RATAS PREÑADAS)  Madrid V, Raschia MA, Maiztegui B, Flores LE, Borelli MI, Del Zotto H. CENEXA. Centro de Endocrinología Experimental y Aplicada (UNLP-CCT La Plata CONICET) vivianamadrid@hotmail.com  Introducción Durante la gestación hay un desarrollo progresivo de insulinorresistencia (IR) y un incremento compensador de la masa y función de las células β pancreáticas. El INGAP, identificado en hámster pero no en rata, facilitaría dicha compensación aumentando la neogénesis insular.   Objetivo a) Estudiar la cronología de aparición de células INGAP positivas en fetos de ratas normales y la evolución simultánea de su masa y la de las células β en ratas preñadas y b) su presencia en el páncreas de rata.   Materiales y Métodos Ratas Wistar preñadas se dividieron en 5 grupos: control no preñadas (M0), con 11 (M11), 17 (M17) y 19 (M19) días de gestación y ratas  mantenidas con sus crías una semana post parición (M28). Estudiamos además fetos de 17 (E17) y 19 días de gestación (E19) y crías de una semana de edad (P7). Medimos: peso corporal, glucemias, secreción de insulina in vitro inducida por glucosa 3.3 y 16.6 mM y arginina 10mM en fetos y crías. En adultos medimos insulinemias e índices HOMA-β y HOMA-IR. En fetos medimos expresión de genes (PCR Real time) PDX-1, Ngn3, INGAP (utilizando cebadores específicos) y Reg3β (cebadores específicos y degenerados diseñados en base a una región del ADNc de INGAP de alta homología con el Reg3β (Deg-RI). Realizamos inmunohistoquímica de páncreas de ratas adultas, fetos y crías.   Resultados En las madres, la glucosa 16,6 mM aumentó la secreción de insulina respecto del basal en todos los grupos (p<0,05). En los fetos la arginina estimuló la secreción de insulina sobre el basal, mientras que la glucosa 16,6 mM sólo lo hizo en las crías (P7). Tanto los niveles de ARNm de PDX-1 como de Reg3β aumentaron en E19 (p<0,05) mientras que los de Ngn3 disminuyeron (p<0,05). INGAP y Reg3β mostraron una homología del 68% (ADNc) y 58.5% (proteína). Los cebadores de Reg3β y Deg-RI amplificaron en rata y hámster mientras que los de INGAP sólo lo hicieron en hámster. La secuenciación del fragmento obtenido con cebadores Deg-RI en rata presentó un 94% de homología con Reg3β y 64% con INGAP. En ambas especies detectamos células INGAP inmunopositivas con un anticuerpo cuyo epitope antigénico presenta 84% de homología entre INGAP y Reg3β. La presencia de células INGAP positivas en fetos se detectó a partir del día 17.      Tabla 1 E17 E19 P7 Peso (g) 0,85 ±0,03a   1,84 ±0,04a   12,31 ± 0,22 a Glucemia (mg/dl) 61,8 ± 3,08a 56,6 ± 2,40b 88,1 ± 0,90 ab Masa β (ug)  5,9 ± 1,30 a 24,1 ± 76,0a 330 ± 92,0a CK19 (mg) 0,01 ± 0,001a 0,02 ± 0,002a 0,25 ± 0,090ª PCNA (%) 11,7 ± 3,50 a 12,2 ± 6,10 1,9 ± 0,41 a INGAP (mg) 0,04 ± 0,020  0,01 ± 0,002 a 0,15 ± 0,060 a Apoptosis (%) 3,4 ± 2,3  ---- 1,6 ± 0,1         Tabla 1: Datos bioquímicos y morfológicos de fetos y crías.  Tabla 2: Datos bioquímicos y morfológicos de ratas madre.   En ambas tablas los valores indicados con una misma letra son estadísticamente diferentes (p<0,05).             2010 Octubre, 2(1): 1-2  2             Tabla 2 M0 M11 M17 M19 M28 Peso (g) 193±4,2 203±6,1 217±11,2 204±14,7 203±5,8 Glucemia (mg/dl) 158 ±3,4ad 162 ± 15,2be 117 ± 6,7abc 108 ± 5,2def 149 ± 7.2cf Insulinemia (ng/ml) 0,9 ± 0,09a 1,6 ± 0,18abc 1,2 ± 0,21 0,9 ± 0,12b 0,8 ± 0,07c HOMA-β 73 ± 8,4ad 100 ± 5,1abc 69 ± 5,6be 96 ± 14,5f 50 ± 3,9 cdef HOMA-IR 6  ± 0,2a 21  ± 2,3abcd 6 ± 1,1b 5 ± 0,4c 6 ± 0,1d Masa β (mg) 2,4 ± 0,24abc 3,6± 1,80 3,7± 0,51a 5,2± 0,78b 6,1± 1,28c CK19 (mg) 0,9±0,10a 0,6±0,10a 0,6±0,19 0,8±0,10 0,6±0,17 PCNA (%) 2,2±0,30a 1,9±0,20b 5,8±0,72abcd 2,2 ±0,45c 1,5 ± 0.20d INGAP (mg) 0,5 ± 0,03a 0,4 ± 0,01b 0,5± 0,07c 0,8± 0,10abc 0,5 ± 0,23 Apoptosis (%) 3,9 ± 0,95ab ---- 0,7 ± 0,10 a ---- 0,9 ± 0,20b    Conclusiones Nuestros resultados demuestran por primera vez que: 1) El INGAP y el Reg3β coexisten en el páncreas de hámster pero en la rata sólo estaría el Reg3β;  2) La aparición de células INGAP/Reg3β-positivas al momento de diferenciación endócrina fetal, sugiere su participación en el control de la masa celular β; 3) En la rata preñada el INGAP y el Reg3β participarían en la regulación de la masa/función de las células β; opuesto a lo ocurrido en el feto, su acción se ejercería afectando la replicación y apoptosis con escaso efecto sobre la neogénesis.    

Ontogénesis y evolución de la masa de células INGAP (Islet Neogenesis Associated Protein) positivas en el período intrauterino y en adultos con insulinorresistencia fisiológica (ratas preñadas)

El Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

 
 
 
 
2010 Octubre, 2(1): 1-2 
 
1 
 
ONTOGÉNESIS Y EVOLUCIÓN DE LA MASA DE CÉLULAS INGAP (ISLET  NEOGENESIS 
ASSOCIATED PROTEIN) POSITIVAS EN EL PERÍODO INTRAUTERINO Y EN ADULTOS 
CON INSULINORRESISTENCIA  FISIOLÓGICA (RATAS PREÑADAS) 
 
Madrid V, Raschia MA, Maiztegui B, Flores LE, Borelli MI, Del Zotto H. 
CENEXA. Centro de Endocrinología Experimental y Aplicada (UNLP-CCT La Plata CONICET) 
vivianamadrid@hotmail.com 
 
Introducción 
Durante la gestación hay un desarrollo progresivo de insulinorresistencia (IR) y un 
incremento compensador de la masa y función de las células β pancreáticas. El INGAP, 
identificado en hámster pero no en rata, facilitaría dicha compensación aumentando la 
neogénesis insular.  
 
Objetivo 
a) Estudiar la cronología de aparición de células INGAP positivas en fetos de ratas normales 
y la evolución simultánea de su masa y la de las células β en ratas preñadas y b) su 
presencia en el páncreas de rata.  
 
Materiales y Métodos 
Ratas Wistar preñadas se dividieron en 5 grupos: control no preñadas (M0), con 11 (M11), 17 
(M17) y 19 (M19) días de gestación y ratas  mantenidas con sus crías una semana post 
parición (M28). Estudiamos además fetos de 17 (E17) y 19 días de gestación (E19) y crías 
de una semana de edad (P7). Medimos: peso corporal, glucemias, secreción de insulina in 
vitro inducida por glucosa 3.3 y 16.6 mM y arginina 10mM en fetos y crías. En adultos 
medimos insulinemias e índices HOMA-β y HOMA-IR. En fetos medimos expresión de genes 
(PCR Real time) PDX-1, Ngn3, INGAP (utilizando cebadores específicos) y Reg3β 
(cebadores específicos y degenerados diseñados en base a una región del ADNc de INGAP 
de alta homología con el Reg3β (Deg-RI). Realizamos inmunohistoquímica de páncreas de 
ratas adultas, fetos y crías.  
 
Resultados 
En las madres, la glucosa 16,6 mM aumentó la secreción de insulina respecto del basal en 
todos los grupos (p<0,05). En los fetos la arginina estimuló la secreción de insulina sobre el 
basal, mientras que la glucosa 16,6 mM sólo lo hizo en las crías (P7). Tanto los niveles de 
ARNm de PDX-1 como de Reg3β aumentaron en E19 (p<0,05) mientras que los de Ngn3 
disminuyeron (p<0,05). INGAP y Reg3β mostraron una homología del 68% (ADNc) y 58.5% 
(proteína). Los cebadores de Reg3β y Deg-RI amplificaron en rata y hámster mientras que 
los de INGAP sólo lo hicieron en hámster. La secuenciación del fragmento obtenido con 
cebadores Deg-RI en rata presentó un 94% de homología con Reg3β y 64% con INGAP. En 
ambas especies detectamos células INGAP inmunopositivas con un anticuerpo cuyo epitope 
antigénico presenta 84% de homología entre INGAP y Reg3β. La presencia de células 
INGAP positivas en fetos se detectó a partir del día 17.  
 
 
 
 
Tabla 1 E17 E19 P7 
Peso (g) 0,85 ±0,03a   1,84 ±0,04a   12,31 ± 0,22 a 
Glucemia (mg/dl) 61,8 ± 3,08a 56,6 ± 2,40b 88,1 ± 0,90 ab 
Masa β (ug)  5,9 ± 1,30 a 24,1 ± 76,0a 330 ± 92,0a 
CK19 (mg) 0,01 ± 0,001a 0,02 ± 0,002a 0,25 ± 0,090ª 
PCNA (%) 11,7 ± 3,50 a 12,2 ± 6,10 1,9 ± 0,41 a 
INGAP (mg) 0,04 ± 0,020  0,01 ± 0,002 a 0,15 ± 0,060 a 
Apoptosis (%) 3,4 ± 2,3  ---- 1,6 ± 0,1 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tabla 1: Datos bioquímicos y morfológicos 
de fetos y crías.  
Tabla 2: Datos bioquímicos y morfológicos 
de ratas madre.   
En ambas tablas los valores indicados con 
una misma letra son estadísticamente 
diferentes (p<0,05).  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2010 Octubre, 2(1): 1-2 
 
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Tabla 2 M0 M11 M17 M19 M28 
Peso (g) 193±4,2 203±6,1 217±11,2 204±14,7 203±5,8 
Glucemia (mg/dl) 158 ±3,4ad 162 ± 15,2be 117 ± 6,7abc 108 ± 5,2def 149 ± 7.2cf 
Insulinemia (ng/ml) 0,9 ± 0,09a 1,6 ± 0,18abc 1,2 ± 0,21 0,9 ± 0,12b 0,8 ± 0,07c 
HOMA-β 73 ± 8,4ad 100 ± 5,1abc 69 ± 5,6be 96 ± 14,5f 50 ± 3,9 cdef 
HOMA-IR 6  ± 0,2a 21  ± 2,3abcd 6 ± 1,1b 5 ± 0,4c 6 ± 0,1d 
Masa β (mg) 2,4 ± 0,24abc 3,6± 1,80 3,7± 0,51a 5,2± 0,78b 6,1± 1,28c 
CK19 (mg) 0,9±0,10a 0,6±0,10a 0,6±0,19 0,8±0,10 0,6±0,17 
PCNA (%) 2,2±0,30a 1,9±0,20b 5,8±0,72abcd 2,2 ±0,45c 1,5 ± 0.20d 
INGAP (mg) 0,5 ± 0,03a 0,4 ± 0,01b 0,5± 0,07c 0,8± 0,10abc 0,5 ± 0,23 
Apoptosis (%) 3,9 ± 0,95ab ---- 0,7 ± 0,10 a ---- 0,9 ± 0,20b 
 
 
 
Conclusiones 
Nuestros resultados demuestran por primera vez que: 1) El INGAP y el Reg3β coexisten en 
el páncreas de hámster pero en la rata sólo estaría el Reg3β;  2) La aparición de células 
INGAP/Reg3β-positivas al momento de diferenciación endócrina fetal, sugiere su 
participación en el control de la masa celular β; 3) En la rata preñada el INGAP y el Reg3β 
participarían en la regulación de la masa/función de las células β; opuesto a lo ocurrido en el 
feto, su acción se ejercería afectando la replicación y apoptosis con escaso efecto sobre la 
neogénesis.  
 
 


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