El trasplante renal en ratas isogénicas es el modelo más ampliamente usado para el estudio de factores de daño no-inmunológicos. TNF∝ es una citokina pro inflamatoria que esta up-regulada en el proceso de injuria por isquemi-reperfusión (IRI) y está involucrada en la vía extrínseca de apoptosis. Bcl-2 y Bax son genes anti y pro apoptóticos involucrados en la vía intrínseca. Nuestro objetivo fue determinar cuáles vías apoptóticas están afectadas por la administración de diferentes drogras inmunosupresoras (sirolimus y FK506) al donanteFacultad de Ciencias Médica

Cicora, F.

Lausada, Natalia Raquel

Raimondi, C.

Stringa, Pablo

Vásquez, Daniela N.

Zalazar, Gustavo

El Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

 
 
 
 
2010 Octubre, 2(1): 1-1 
 
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AFECTACION DE VÍAS DE APOPTOSIS CUANDO SE ADMINISTRA 
INMUNOSUPRESIÓN A LOS DONANTES: ROL DE TNFA, BAX Y BCL-2. 
 
Cicora F*·, Lausada N*, Gonzales P.&, Zalazar G*, Stringa P*, Vásquez D*·, Raimondi C* 
*Laboratorio - Programa de Trasplante de Órganos y Tejidos, Facultad de Ciencias Médicas - Universidad 
Nacional de La  Plata. ·FINAER. Mail de Contacto: nlausada@gmail.com 
 
 
Introducción 
El trasplante renal en ratas isogénicas es el modelo más ampliamente usado para el 
estudio de factores de daño no-inmunológicos. TNF∝ es una citokina pro inflamatoria 
que esta up-regulada en el proceso de injuria por isquemi-reperfusión (IRI) y está 
involucrada en la vía extrínseca de apoptosis. Bcl-2 y Bax son genes anti y pro 
apoptóticos involucrados en la vía intrínseca. Nuestro objetivo fue determinar  cuáles 
vías apoptóticas están afectadas por la administración de diferentes drogras 
inmunosupresoras (sirolimus y FK506) al donante. 
  
Materiales y Métodos 
Fueron evaluadas 24 ratas distribuidas al azar en los siguientes grupos: 
Grupo 1 Sham. 
Grupo 2 Control: el riñón izquierdo del donante fue extraído posteriormente al 
lavado con 3 ml de Ringer Lactato heparinizado y preservad en la misma solución 
durante 3 horas. En el receptor el riñón fue implantado a los vasos abdominales con 
nefrectomía bilateral de los riñones propios del receptor en el mismo acto quirúrgico. 
Los animales fueron sacrificados a las 24 hs de trasplantados.  
Grupo 3 Sirolimus: Comparte el protocolo quirúrgico del grupo 2 control, no 
obstante los donantes son medicados 6 a 12 hs previas al trasplante con una 
monodosis de Sirolimus 2 mg/kg. 
Grupo 4 Fk506: Comparte el protocolo quirúrgico del grupo 2 control, no obstante los 
donantes son medicados 6 a 12 hs previas al trasplante con una monodosis de Fk506 
0.3 mg/kg. Los receptores no recibieron terapias inmunosupresoras en el 
postoperatorio Las muestras histológicas fueron analizadas por un patólogo, que fue 
ciego a los grupos ( Apop Tag Kit). La apoptosis fue evaluada por el número de núcleos 
apoptóticos en 10 campos de 1mm2. Fueron extraídas muestras de sangre basales y previo 
al sacrificio de los animales (24 horas post tx renal). La expresión de TNF∝, Bax y Bcl-2 fue 
calculada mediante la evaluación en 10 campos consecutivos de 1 mm2 con una escala 
semicuantitativa. Cada score por campo refleja la extensión más que la intensidad de la 
marcación, dependiendo del porcentaje túbulo-intersticial afectado. Escala Semicuantitativa: 
0 (<5%), 1 (5-25%), 2 (25-50%), 3 (51-75%), 4(>75%).  
 
Resultados 
Apoptosis G2: 138 +- 10,123, G3: 22,33 +- 1,84, G4: 59,5 +- 13,75. G2 vs G3 p <0.01, G2 vs 
G4  p<0,05 y  G3 vs G4 p>0,05. TNF∝ in situ G2: 3,67 (3-4), G3 0,5 (0-1), G4: 1,5 (1-2). G2 
vs G3 y G4  p<0.01 y G3 vs G4 p<0.01. Bcl-2 in situ G2:1,83 (1-2), G3 4 (3-5), G4: 3 (2-
4). G2 vs G3 y G4 p<0,01 y  G3 vs G4 p<0,01. BAX in situ: G2: 0,5 (0-1); G3 0,5 (0-
1) ; G4 0,5 (0-1). G2 vs G3 Vs G4 p>0,05. 
 
Conclusión 
La administración de Sirolimus o FK506 al donante atenua la apoptosis inducida por 
el proceso de IRI en modelo de ratas isogénicas en el trasplante renal. El Sirolimus , 
respecto al FK506, up regula el Bcl-2 y atenúa la producción in situ de TNF∝ en 
forma significativa.  
 
 
 
 
 


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Afectación de vías de apoptosis cuando se administra inmunosupresión a los donantes: rol de TNFA, BAX y BCL-2

Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

    2010 Octubre, 2(1): 1-1  1  AFECTACION DE VÍAS DE APOPTOSIS CUANDO SE ADMINISTRA INMUNOSUPRESIÓN A LOS DONANTES: ROL DE TNFA, BAX Y BCL-2.  Cicora F*·, Lausada N*, Gonzales P.&, Zalazar G*, Stringa P*, Vásquez D*·, Raimondi C* *Laboratorio - Programa de Trasplante de Órganos y Tejidos, Facultad de Ciencias Médicas - Universidad Nacional de La  Plata. ·FINAER. Mail de Contacto: nlausada@gmail.com   Introducción El trasplante renal en ratas isogénicas es el modelo más ampliamente usado para el estudio de factores de daño no-inmunológicos. TNF∝ es una citokina pro inflamatoria que esta up-regulada en el proceso de injuria por isquemi-reperfusión (IRI) y está involucrada en la vía extrínseca de apoptosis. Bcl-2 y Bax son genes anti y pro apoptóticos involucrados en la vía intrínseca. Nuestro objetivo fue determinar  cuáles vías apoptóticas están afectadas por la administración de diferentes drogras inmunosupresoras (sirolimus y FK506) al donante.   Materiales y Métodos Fueron evaluadas 24 ratas distribuidas al azar en los siguientes grupos: Grupo 1 Sham. Grupo 2 Control: el riñón izquierdo del donante fue extraído posteriormente al lavado con 3 ml de Ringer Lactato heparinizado y preservad en la misma solución durante 3 horas. En el receptor el riñón fue implantado a los vasos abdominales con nefrectomía bilateral de los riñones propios del receptor en el mismo acto quirúrgico. Los animales fueron sacrificados a las 24 hs de trasplantados.  Grupo 3 Sirolimus: Comparte el protocolo quirúrgico del grupo 2 control, no obstante los donantes son medicados 6 a 12 hs previas al trasplante con una monodosis de Sirolimus 2 mg/kg. Grupo 4 Fk506: Comparte el protocolo quirúrgico del grupo 2 control, no obstante los donantes son medicados 6 a 12 hs previas al trasplante con una monodosis de Fk506 0.3 mg/kg. Los receptores no recibieron terapias inmunosupresoras en el postoperatorio Las muestras histológicas fueron analizadas por un patólogo, que fue ciego a los grupos ( Apop Tag Kit). La apoptosis fue evaluada por el número de núcleos apoptóticos en 10 campos de 1mm2. Fueron extraídas muestras de sangre basales y previo al sacrificio de los animales (24 horas post tx renal). La expresión de TNF∝, Bax y Bcl-2 fue calculada mediante la evaluación en 10 campos consecutivos de 1 mm2 con una escala semicuantitativa. Cada score por campo refleja la extensión más que la intensidad de la marcación, dependiendo del porcentaje túbulo-intersticial afectado. Escala Semicuantitativa: 0 (<5%), 1 (5-25%), 2 (25-50%), 3 (51-75%), 4(>75%).   Resultados Apoptosis G2: 138 +- 10,123, G3: 22,33 +- 1,84, G4: 59,5 +- 13,75. G2 vs G3 p <0.01, G2 vs G4  p<0,05 y  G3 vs G4 p>0,05. TNF∝ in situ G2: 3,67 (3-4), G3 0,5 (0-1), G4: 1,5 (1-2). G2 vs G3 y G4  p<0.01 y G3 vs G4 p<0.01. Bcl-2 in situ G2:1,83 (1-2), G3 4 (3-5), G4: 3 (2-4). G2 vs G3 y G4 p<0,01 y  G3 vs G4 p<0,01. BAX in situ: G2: 0,5 (0-1); G3 0,5 (0-1) ; G4 0,5 (0-1). G2 vs G3 Vs G4 p>0,05.  Conclusión La administración de Sirolimus o FK506 al donante atenua la apoptosis inducida por el proceso de IRI en modelo de ratas isogénicas en el trasplante renal. El Sirolimus , respecto al FK506, up regula el Bcl-2 y atenúa la producción in situ de TNF∝ en forma significativa.       

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