El núcleo es una estructura altamente dinámica formada por distintos compartimentos y dominios funcionales. En el núcleo, los lípidos se distribuyen en dos pooles: 1) La Envoltura Nuclear, que concentra al 95% de los Lípidos Polares (PL) (GP: glicerofosfolípidos + SL: esfingolípidos) y Colesterol (C). 2) Las Gotas Lipídicas Nucleares (N-LD) constituídas por un core hidrofóbico de lípidos neutros (TAG, CE y C) rodeado por una monocapa de PL, C y proteínas. Las N-LD se visualizan mediante tinción con Sudán Red y BODIPY493/503. Hemos mostrado que los lipídicos endonucleares poseen un metabolismo muy activo y podrían proveer ligandos endógenos al PPARα., a otros factores de transcripción y/o ser metabolizados a prostaglandinas y leucotrienos.Facultad de Ciencias Médica

Lagrutta, M.

Layerenza, Juan Pablo

Sisti, María Susana

Ves Losada, Ana

SEDICI - Repositorio de la UNLP

 
 
 
 
2011 Octubre, 2(3): 1-1 
 
2 
“LA L-FABP MOVILIZA EL ÁCIDO ARAQUIDÓNICO DESDE Y HACIA LAS GOTAS 
LÍPIDICAS NUCLEARES” 
Layerenza JP1, Lagrutta LC1, Sisti MS1, Ves-Losada A1,2 
 
1INIBIOLP (CCT-La Plata, CONICET, UNLP); 2Dpto de Cs Biol. – Fac. de Cs. Exactas, UNLP 
 
E-mail: jplayerenza@biol.unlp.edu.ar 
 
 
Introducción 
El núcleo es una estructura altamente dinámica formada por distintos compartimentos y 
dominios funcionales. En el núcleo, los lípidos se distribuyen en dos pooles:  
1) La Envoltura Nuclear, que concentra al 95% de los Lípidos Polares (PL) (GP: 
glicerofosfolípidos + SL: esfingolípidos) y Colesterol (C).  
2) Las Gotas Lipídicas Nucleares (N-LD) constituídas por un core hidrofóbico  de lípidos 
neutros (TAG, CE y C) rodeado por una monocapa de PL, C y proteínas. Las N-LD se 
visualizan mediante tinción con Sudán Red y BODIPY493/503. Hemos mostrado que los 
lipídicos endonucleares poseen un metabolismo muy activo y podrían proveer ligandos 
endógenos al PPARα.,  a otros factores de transcripción y/o ser metabolizados a 
prostaglandinas y leucotrienos. 
 
Objetivos 
Determinar el mecanismo de incorporación del ácido araquidónico desde el citosol al núcleo 
celular. 
· Hipótesis de trabajo: 
La L-FABP participa en la movilización del 20:4n-6 exógeno hacia los pooles lipídicos 
nucleares y desde esos pooles hacia el citosol. 
 
Materiales y Métodos 
· Aislamiento de núcleos: se aislaron a partir de homogenato de hígado de rata por el 
método de Blobel y Potter.  
· Ensayos de incorporación de Ácidos Grasos: 
En una primera etapa se marcaron los pooles lipídicos con [1-14C] incubando núcleos 
aislados con [1-14C]20:4n-6 libre o unido a L-FABP, ATP y CoA.  
En segunda instancia y para analizar la incorporación en N-LD, éstas fueron aisladas por 
ultracentrifugación en gradiente de sacarosa (técnica puesta a punto en el laboratorio) 
luego de incubar los núcleos con [1-14C]20:4n-6.  
Finalmente, los [14C]lípidos se extrajeron por el método de Folch, se separaron por TLC y 
revelaron por autorradiografía. 
· Distribución nucleat de la L-FABP exógena: 
Núcleos aislados y preincubados con 20:4n-6  se incubaron con apoL-FABP, ATP y CoA, 
los núcleos se fijaron y se analizaron por inmunofluorescencia (anticuerpo primario anti L-
FABP + anticuerpo secundario conjugado con ALEXA555).  Las N-LD se tiñeron con 
BODIPY493/503 (marcador de lípidos neutros). Los núcleos se tiñeron con DAPI. 
Mediante microscopía confocal de fluorescencia se observaron los patrones de 
distribución tanto de la L-FABP como así también de las N-LD. 
 
Resultados 
El  20:4n-6 libre o ligado a L-FABP se incorpora y esterifica en los lípidos nucleares: (PL > 
FFA > TAG y PC > PE > PI > PS) por un mecanismo acil-CoA dependiente. La L-FABP 
moviliza el [1-14C]20:4n-6 desde el pool nuclear de FFA al de lípidos polares, con la mayor 
actividad específica en PI. La L-FABP moviliza el 20:4n-6  fuera del núcleo. 
El [1-14C]20:4n-6 se incorpora  en las N-LD como FFA y se esterifica en PL, TAG y CE. 
Dentro de la N-LD, la L-FABP moviliza 20:4n-6 desde FFA a PL y TAG. 
La L-FABP exógena ingresa al núcleo, colocaliza con N-LD y además se distribuye en forma 
difusa y se concentra en focos intranucleares diferentes a las N-LD. 
 
 
 
 
 
2011 Octubre, 2(3): 2-2 
 
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Conclusiones: 
L-FABP estimula la movilización del 20:4n-6 nuclear. La L-FABP transportaría el 20:4n-6 a 
una acil-CoA sintetasa localizada en la matriz nuclear y luego a aquellas enzimas (acil-
transferasas) responsables de su esterificación en los distintos pooles lipídicos, en particular 
a los TAG de las N-LD, asimismo, llevaría 20:4n-6 desde estos pooles hacia el citosol y otros 
compartimentos celulares.  
 


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La L-FABP moviliza el ácido araquidónico desde y hacia las gotas lipídicas nucleares

El Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

    2011 Octubre, 2(3): 1-1  2 “LA L-FABP MOVILIZA EL ÁCIDO ARAQUIDÓNICO DESDE Y HACIA LAS GOTAS LÍPIDICAS NUCLEARES” Layerenza JP1, Lagrutta LC1, Sisti MS1, Ves-Losada A1,2  1INIBIOLP (CCT-La Plata, CONICET, UNLP); 2Dpto de Cs Biol. – Fac. de Cs. Exactas, UNLP  E-mail: jplayerenza@biol.unlp.edu.ar   Introducción El núcleo es una estructura altamente dinámica formada por distintos compartimentos y dominios funcionales. En el núcleo, los lípidos se distribuyen en dos pooles:  1) La Envoltura Nuclear, que concentra al 95% de los Lípidos Polares (PL) (GP: glicerofosfolípidos + SL: esfingolípidos) y Colesterol (C).  2) Las Gotas Lipídicas Nucleares (N-LD) constituídas por un core hidrofóbico  de lípidos neutros (TAG, CE y C) rodeado por una monocapa de PL, C y proteínas. Las N-LD se visualizan mediante tinción con Sudán Red y BODIPY493/503. Hemos mostrado que los lipídicos endonucleares poseen un metabolismo muy activo y podrían proveer ligandos endógenos al PPARα.,  a otros factores de transcripción y/o ser metabolizados a prostaglandinas y leucotrienos.  Objetivos Determinar el mecanismo de incorporación del ácido araquidónico desde el citosol al núcleo celular. · Hipótesis de trabajo: La L-FABP participa en la movilización del 20:4n-6 exógeno hacia los pooles lipídicos nucleares y desde esos pooles hacia el citosol.  Materiales y Métodos · Aislamiento de núcleos: se aislaron a partir de homogenato de hígado de rata por el método de Blobel y Potter.  · Ensayos de incorporación de Ácidos Grasos: En una primera etapa se marcaron los pooles lipídicos con [1-14C] incubando núcleos aislados con [1-14C]20:4n-6 libre o unido a L-FABP, ATP y CoA.  En segunda instancia y para analizar la incorporación en N-LD, éstas fueron aisladas por ultracentrifugación en gradiente de sacarosa (técnica puesta a punto en el laboratorio) luego de incubar los núcleos con [1-14C]20:4n-6.  Finalmente, los [14C]lípidos se extrajeron por el método de Folch, se separaron por TLC y revelaron por autorradiografía. · Distribución nucleat de la L-FABP exógena: Núcleos aislados y preincubados con 20:4n-6  se incubaron con apoL-FABP, ATP y CoA, los núcleos se fijaron y se analizaron por inmunofluorescencia (anticuerpo primario anti L-FABP + anticuerpo secundario conjugado con ALEXA555).  Las N-LD se tiñeron con BODIPY493/503 (marcador de lípidos neutros). Los núcleos se tiñeron con DAPI. Mediante microscopía confocal de fluorescencia se observaron los patrones de distribución tanto de la L-FABP como así también de las N-LD.  Resultados El  20:4n-6 libre o ligado a L-FABP se incorpora y esterifica en los lípidos nucleares: (PL > FFA > TAG y PC > PE > PI > PS) por un mecanismo acil-CoA dependiente. La L-FABP moviliza el [1-14C]20:4n-6 desde el pool nuclear de FFA al de lípidos polares, con la mayor actividad específica en PI. La L-FABP moviliza el 20:4n-6  fuera del núcleo. El [1-14C]20:4n-6 se incorpora  en las N-LD como FFA y se esterifica en PL, TAG y CE. Dentro de la N-LD, la L-FABP moviliza 20:4n-6 desde FFA a PL y TAG. La L-FABP exógena ingresa al núcleo, colocaliza con N-LD y además se distribuye en forma difusa y se concentra en focos intranucleares diferentes a las N-LD.      2011 Octubre, 2(3): 2-2  2 Conclusiones: L-FABP estimula la movilización del 20:4n-6 nuclear. La L-FABP transportaría el 20:4n-6 a una acil-CoA sintetasa localizada en la matriz nuclear y luego a aquellas enzimas (acil-transferasas) responsables de su esterificación en los distintos pooles lipídicos, en particular a los TAG de las N-LD, asimismo, llevaría 20:4n-6 desde estos pooles hacia el citosol y otros compartimentos celulares.   

http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/18065/Documento_completo__.pdf?sequence=1

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