El objetivo de este trabajo fue validar biológicamente en los felinos domésticos la técnica "a campo" de extracción de progesterona (P4) fecal mediante un estudio de correlación con los valores séricos de esta hormona. Secundariamente se compararon las concentraciones fecales de P 4 en distintas fases del ciclo estral. Se utilizaron un total de 16 muestras fecales procedentes de 13 hembras felinas pospúberes. Las muestras fecales fueron recolectadas en las etapas de estro (n=3), fase lútea (n=10), y gestación (n=3) definidas por comportamiento, citología vaginal o ultrasonografía. En forma simultánea al muestreo fecal se tomaron muestras sanguíneas (n=12). Se realizó el método de extracción de esteroides "a campo" y la P4 fue determinada por radioinmunoensayo en todos los casos. La concentración de P 4 varió de 20 a 463 ng/g de materia fecal húmeda. El coeficiente de correlación de Pearson entre los valores hallados en materia fecal y en suero fue de 0,77 (p4) fecal extraction by a correlating fecal and serum values. Additionally, fecal P 4 concentrations in different stages of estrous cycle were compared. A total at of 16 fecal samples from 13 postpubertal female cats were used. The samples were collected during estrus (n=3), luteal phase (n=10), and gestation (n=3) defined by behavior, vaginal cytology or ultrasonography. Simultaneously blood samples were drawn (n=12). The "field extraction method" was carried out in fecal samples and then P4 was determined by radiommunoassay in all the cases. Fecal P4 concentration ranged from 20 to 463 ng/g wet weight. Pearson correlation coefficient between fecal and serum samples was 0.77 (p4 , and that it provides P4 fecal values highly correlated with serum ones.Facultad de Ciencias Veterinaria

Blanco, Paula Graciela

Corrada, Yanina Alejandra

Díaz, J. D.

García, P.

Gobello, María Cristina

Risso, Analía Lorena

Sota, Pablo Elías de la

Analecta Veterinaria

SEDICI - Repositorio de la UNLP

A. Risso y col.
28 AnAlectA vet 2010; 30 (2): 28-31 Impresa ISSN 0365514-8 Electrónica ISSN 1514-2590 
Trabaj s de Investigación
Dirección para correspondencia: A. Risso, Laboratorio de Nutrición Mineral y Fisiología Reproductiva, Cáte-
dra de Fisiología Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional de La Plata. CC 296, (B1900AVW) 
La Plata. Argentina. E-mail: arisso@fcv.unlp.edu.ar
Fecha de recepción: 07/06/10 Fecha de aprobación: 20/11/10
VALIDACIÓN BIOLÓGICA DE LA TÉCNICA DE 
EXTRACCIÓN A CAMPO DE PROGESTERONA FECAL 
EN EL GATO DOMÉSTICO (Felis catus)
Risso A, de la Sota PE, García P, Díaz J, Corrada Y, Blanco PG, Gobello C.
Laboratorio de Nutrición Mineral y Fisiología Reproductiva, Cátedra de Fisiología. 
Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional de La Plata
 
RESUMEN : El objetivo de este trabajo fue validar biológicamente en los felinos domésticos la 
técnica “a campo” de extracción de progesterona (P4) fecal mediante un estudio de correlación 
con los valores séricos de esta hormona. Secundariamente se compararon las concentraciones 
fecales de P4 en distintas fases del ciclo estral. Se utilizaron un total de 16 muestras fecales 
procedentes de 13 hembras felinas pospúberes. Las muestras fecales fueron recolectadas en 
las etapas de estro (n=3), fase lútea (n=10), y gestación (n=3) definidas por comportamien-
to, citología vaginal o ultrasonografía. En forma simultánea al muestreo fecal se tomaron 
muestras sanguíneas (n=12). Se realizó el método de extracción de esteroides “a campo” y 
la P4 fue determinada por radioinmunoensayo en todos los casos. La concentración de P4 
varió de 20 a 463 ng/g de materia fecal húmeda. El coeficiente de correlación de Pearson 
entre los valores hallados en materia fecal y en suero fue de 0,77 (p< 0,01). Se encontraron 
diferencias entre los valores obtenidos en fase folicular vs. fase lútea (106 ± 22,5 vs. 304 ± 
47,7; p<0,03), ciclos ovulatorios vs. no ovulatorios (313,25 ± 142,3 vs. 118,3 ± 86,4; p<0,02) 
pero no entre los ovulatorios vs. gestantes (313,25 ± 142,3 vs. 292,6 ± 130,7; p = 0,08). Se 
concluye que en el gato doméstico, esta técnica de extracción fecal resulta válida por su alto 
grado de correlación con los valores séricos, además de permitir diferenciar los periodos de 
hiperprogesteronemia de los basales durante el ciclo estral. 
Palabras clave: extracción fecal, esteroide, felino
BIOLOGICAL VALIDATION OF THE “IN FIELD” EXTRACTION 
METHOD FOR FECAL PROGESTERONE IN THE 
DOMESTIC CAT (Felis catus)
ABSTRACT: The objective of this article was to biologically validate in domestic felids the 
¨field method¨ for progesterone (P4) fecal extraction by a correlating fecal and serum values. 
Additionally, fecal P4 concentrations in different stages of estrous cycle were compared. A 
total at of 16 fecal samples from 13 postpubertal female cats were used. The samples were 
collected during estrus (n=3), luteal phase (n=10), and gestation (n=3) defined by behavior, 
vaginal cytology or ultrasonography. Simultaneously blood samples were drawn (n=12). 
The “field extraction method¨ was carried out in fecal samples and then P4 was determined 
by radiommunoassay in all the cases. Fecal P4 concentration ranged from 20 to 463 ng/g 
wet weight. Pearson correlation coefficient between fecal and serum samples was 0.77 (p< 
0.01). Differences between follicular and luteal phase (106 ± 22.5 vs. 304 ± 47.7; p<0.03), 
ovulatory vs. non ovulatory cycles (313.25 ± 142.3 vs. 118.3 ± 86.4; p<0.02) were found, al-
though ovulatory vs. gestational cycles could not be distinguished (313.25 ± 142.3 vs. 292.6± 
130.7; p = 0.08). It is concluded that, in the domestic cat, this extraction method is useful to 
differentiate hyperprogesteronemia from basal P4, and that it provides P4 fecal values highly 
correlated with serum ones.
Key words: fecal extraction, steroid, felid
Progesterona en gato doméstico
29Impresa ISSN 0365514-8 Electrónica ISSN 1514-2590 AnAlectA vet 2010; 30 (2): 28-31
INTRODUCCIÓN
El aumento del número de gatos domésti-
cos (Felis catus), como animal de compañía, ha 
provocado el crecimiento de la demanda del me-
joramiento reproductivo en la especie. De acuerdo 
a su ciclo estral, la hembra felina se clasifica 
como poliéstrica estacional y de ovulación gene-
ralmente inducida (1). Además de su importancia 
como mascota, el gato doméstico es un excelente 
modelo experimental para el estudio de enferme-
dades humanas (2, 3) y de nuevas biotecnologías 
reproductivas para felinos silvestres en peligro 
de extinción (3). 
El seguimiento hormonal del ciclo estral es 
necesario para la evaluación del potencial repro-
ductivo, de distintos tratamientos técnicas o bien 
para el desarrollo de técnicas de reproducción 
asistida. Por esta razón, resulta esencial el desa-
rrollo de métodos prácticos para el monitoreo de 
la actividad endocrina en la especie felina.
Los métodos convencionales para obtener 
datos de la endocrinología de los animales do-
mésticos requieren análisis de muestras sanguí-
neas seriadas. La venopunción periférica es una 
maniobra invasiva que resulta impracticable en 
animales susceptibles al estrés como los felinos. 
Así, los gatos requieren normalmente anestesia 
general para este procedimiento. Sin embargo, 
el análisis de muestras sanguíneas permite la 
medición en tiempo real de la hormona nativa 
representando el “gold standard”. Además, en 
suero o plasma es posible medir todas las hormo-
nas, independiente de su naturaleza bioquímica. 
En contrapartida, métodos no invasivos como la 
medición de metabolitos hormonales excretados 
en orina o heces son alternativas atractivas ya 
que no requieren manipuleo de los animales y 
evidencian concentraciones hormonales prome-
dio. No obstante, solo pueden medirse con estas 
técnicas esteroides o metabolitos gonadales y 
adrenales y no hormonas en estado nativo o 
proteicas. Tampoco resultan en tiempo real las 
mediciones. Así por ejemplo, el desfasaje temporal 
de una hormona en sangre hasta que es elimina-
da es de 4-12 horas para los metabolitos vertidos 
en la orina y de 12-24 horas para los eliminados 
por materia fecal.
La determinación de metabolitos hormona-
les en materia fecal requiere, como paso previo, 
el proceso de extracción. Mediante este método, 
los componentes de interés en las muestras son 
aislados, removidos o concentrados, evitando la 
interferencia de otras partículas.
El objetivo de este trabajo fue validar bioló-
gicamente en el gato doméstico la técnica “a cam-
po” de extracción de P4 en materia fecal, mediante 
un estudio de correlación con los valores séricos. 
Adicionalmente, como objetivo secundario se 
compararon las concentraciones fecales de P4 en 
las distintas fases del ciclo estral. Concretamente, 
se hipotetizó que existe una correlación positiva 
entre los valores de P4 hallados en sangre y en 
materia fecal y que las concentraciones fecales 
de esta hormona permiten determinar el estadío 
del ciclo estral
MATERIALES Y MÉTODOS
ANIMAlES 
Para este estudio se utilizaron un total de 
13 hembras felinas pospúberes, fértiles, entre 2 
y 4 años de edad pertenecientes a la Colonia Ex-
perimental del Laboratorio de Nutrición Mineral 
y Fisiología Reproductiva de la Facultad de Cien-
cias Veterinarias (UNLP). Las gatas estuvieron 
alojadas en gateras individuales, de acuerdo a las 
normas internaciones del cuidado de animales de 
laboratorio, expuestas a fotoperiodo de 14 horas 
luz y 10 horas de oscuridad y alimentadas con 
balanceado comercial y agua ad libitum. Un gato 
macho entero, alojado en similares condiciones, 
se usó para los servicios y para la observación 
del comportamiento de las hembras 
SEguIMIENTO COMPORTAMENTAl 
Y CITOlógICO
Las hembras se examinaron físicamente en 
forma diaria (>1 hora 2 veces al día) para deter-
minar la aparición de estro, el que se corroboró 
por los hallazgos de comportamiento y citológicos 
típicos (4, 5). La citología vaginal, como indicador 
indirecto de las concentraciones estrogénicas, 
se realizó mediante hisopos óticos embebidos 
en solución fisiológica, se tiñó con Tinción 15 
(Biopur, Sta Fe, Argentina) y se analizó e inter-
pretó de acuerdo a Mills y col. (4). Conforme a los 
resultados obtenidos las muestras se clasificaron 
en fase folicular (estro) o interestro.
dIAgNóSTICO dE gESTACIóN 
En tres gatas a las que se les dio servicios 
con el macho, se confirmó la gestación por ul-
trasonografía (Toshiba Core Vision Pro, Japan, 
transductor lineal de 8-MHz) a los 21 días luego 
de los mismos (6).
MuESTREO FECAl
Se recogieron un total de 16 muestras 
fecales durante las etapas de estro (día 3; n=3), 
interestro (25-28 días del primer día del estro; 
n=10), y gestación (24-26 días del servicio; n=3). 
Se seleccionaron heces frescas y libres de ele-
mentos ajenos a la muestra. Las muestras fueron 
conservadas en frascos rotulados a -20 °C hasta 
su procesamiento. 
MuESTREO SANguíNEO
Doce a 24 horas antes del muestreo fecal, 
en 12 de las hembras, se tomaron muestras de 
sangre únicas por venopunción periférica y bajo 
A. Risso y col.
30 AnAlectA vet 2010; 30 (2): 28-31 Impresa ISSN 0365514-8 Electrónica ISSN 1514-2590 
etapas del ciclo estral se muestran la Tabla 1. Se 
encontraron diferencias entre los valores obteni-
dos en fase folicular vs. fase lútea (p<0,03), ciclos 
ovulatorios vs. no ovulatorios (p<0,02) pero no 
entre los ovulatorios vs. gestantes (p = 0,08). 
DISCUSIÓN
Para muchas especies, la decisión de medir 
hormonas en materia fecal o en orina lo determi-
na el hecho de que el material sea fácil de recoger, 
procesar y analizar. Sin embargo, el modo de 
excreción también debe considerarse. En el caso 
de los felinos el análisis urinario de esteroides 
reproductivos no es una opción viable, ya que 
los esteroides se excretan casi exclusivamente 
en las heces (7, 9). Además muchas especies fe-
linas, incluida la doméstica, eliminan la orina en 
forma de spray o gotitas por lo que la recolección 
resulta imposible. 
Así como los estrógenos, en la especie feli-
na, la mayor parte de progesterona (P4) se excreta 
por heces más que por orina. Sin embargo a dife-
rencia de los primeros, la P4 no se excreta en su 
forma nativa (10). En otras especies se describió 
la presencia de metabolitos no conjugados de 
epimeros pregnenolona en extractos fecales (11). 
No obstante en el gato más del 70 % de esteroides 
son conjugados y pueden ser identificados con 
RIA de P4 (12).
Se han descripto variadas técnicas de ex-
tracción de esteroides sexuales en las heces de 
mayor o menor complejidad y número de pasos 
en los felinos (12-14). Empero, la técnica “a cam-
po” resulta muy sencilla y también fue útil para 
la determinación del estradiol fecal en el gato 
doméstico (7, 8).
Hasta donde conocemos, éste es el primer 
reporte de la validación biológica de esta técni-
ca de extracción para P4 en el gato doméstico. 
Si bien los valores absolutos de P4 en materia 
fecal aquí obtenidos resultaron menores a los 
reportados en la bibliografía (>2,0± 0,3 µg/g de 
materia fecal seca(15); es importante considerar 
que las diferencias pueden deberse al método de 
extracción y a la muestra fecal usada por cada 
laboratorio. En este trabajo en particular, el uso 
de una técnica de extracción en materia fecal 
húmeda pudo haber contribuido al hallazgo de 
valores absolutos inferiores que los reportados 
previamente (15).
anestesia general, en las etapas de interestro (n= 
10), estro (n= 1) y gestación (n= 1). Las muestras 
se centrifugaron durante 15 minutos, y el suero 
obtenido fue almacenado a -70ºC hasta su pro-
cesamiento. 
EXTRACCIóN HúMEdA dE METABOlITOS 
FECAlES 
El método de extracción de metabolitos de 
las hormonas esteroideas utilizado es el descripto 
como “método a campo” por Brown y col. (7). Este 
método ha sido previamente validado biológicam-
nte para estradiol fecal felino (8).
dETERMINACIóN dE PROgESTERONA
La P4 fue determinada en duplicado con un 
radioinmunoensayo (RIA) de fase sólida (Coat-A-
Count, DPC®, Los Angeles, USA). Los coeficientes 
de variación intra e inter ensayo fueron menores 
al 10 %. La sensibilidad de este ensayo al 95 
% de unión, según el fabricante, es de 0,1 ng/
ml. De acuerdo a los valores séricos de P4 los 
periodos interestros se clasificaron en ovulato-
rios (> 2ng/ml) y no ovulatorios (< 2ng/ml). Los 
resultados obtenidos en el ensayo en ng/ml se 
transformaron y expresaron en ng/g de materia 
fecal húmeda.
ANálISIS ESTAdíSTICO
Se realizó estadística descriptiva (media 
± SEM) de los valores fecales de P4 obtenidos. 
Además, se calculó el coeficiente de correlación 
de Pearson entre los valores de P4 en materia 
fecal y suero (n= 12). Las diferencias entre las 
concentraciones de P4 en las muestras fecales 
tomadas en fase folicular (n=3) vs. en fase lútea 
(n=13; preñadas y vacías), ciclos ovulatorios (n= 
4) vs. no ovulatorios (n= 6), y ovulatorios (n= 4) 
vs. gestantes (n=3) se compararon mediante tests 
de Student. El nivel de significancia se estableció 
como p< 0.05 (Sigma Stat SPSS, Inc.,Chicago, 
IL, USA). 
RESULTADOS 
En la totalidad de las muestras la concen-
tración de P4 varió de 20 a 463 ng/g de materia 
fecal húmeda. El coeficiente de correlación de 
Pearson entre los valores hallados en materia 
fecal y en suero fue de 0,77 (p< 0,01). Las con-
centraciones fecales de P4 durante las distintas 
Fase folicular Fase lútea
No ovulatoria Ovulatoria Gestante
P4 (ng/g)    106 ± 22,5 118 ± 86,4 313,25 ± 142,3 292 ± 130,7
Tabla 1: Concentraciones (media ± SEM) fecales de progesterona (P4; 
ng/g)  durante las fases folicular y  lútea de trece gatas domésticas.
Progesterona en gato doméstico
31Impresa ISSN 0365514-8 Electrónica ISSN 1514-2590 AnAlectA vet 2010; 30 (2): 28-31
De acuerdo a los resultados aquí obtenidos, 
la técnica de extracción usada resultó represen-
tativa de los valores séricos de esta hormona. 
Además, esta técnica permitió diferenciar los 
periodos de hiperprogesteronemia (ciclos ovulato-
rios y gestación) de los de P4 basal (estro y ciclos 
no ovulatorios) del ciclo estral felino. Como era de 
esperar, y tal como ocurriría en suero alrededor 
del día 25, no se detectaron diferencias significati-
vas en la P4 fecal entre las gatas pseudoporeñadas 
(ovuladas y vacías) y las preñadas.
La determinación de P4 sérica y eventos 
fisiológicos que indirectamente indican pro-
gesteronemia basal (conducta de celo, estro 
colpocitológico) o elevada (gestación) garantizan 
claramente la validez de la técnica. Se concluye 
que en el gato doméstico, la técnica de extracción 
“a campo” para P4 fecal, además de sencilla, re-
sulta útil por su alto grado de correlación con los 
valores séricos y permite diferenciar los periodos 
de hiperprogesteronemia de los de P4 basal del 
ciclo estral. 
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen a la empresa Vital 
can, Argentina por la provisión del alimento de 
los animales de la colonia.
BIBLIOGRAFÍA 
1. Concannon P, hodgson B, Lein, D. Reflex Lh release 
in estrous cats following single and multiple copula-
tions. Biol Reprod 1980; 23: 111-7.
2. Fox PR, Maron BJ, Basso C, Liu SK, Thiene G. 
Spontaneously occurring arrhythmogenic right ven-
tricopathy in the domestic cat: a new animal model 
similar to the human disease. Circulation 2000; 102: 
1863-70. 
3. O’Brien SJ, Nash WG, Winkler CA, Reeves RH. Ge-
netic analysis in the domestic cat as an animal model 
for inborn errors, cancer and evolution, en: Migaki 
G, Desnick RJ, Patterson DF. (Eds.), Animal Models 
of Inherited Metabolic Diseases, Prog. Clin. Biol Res 
1982; 94: 67–90.
4. Mills JN, Valli VE, Lumsden JH. Cyclical changes 
of vaginal cytology in the cat. Can Vet J 1979; 20: 
95-101.
5. Shille VM, Lundström KE, Stabenfeldt GH. Fol-
licular function in the domestic cat as determined by 
estradiol-17β concentrations in plasma: relation to 
estrous behavior and cornifcation of exfoliated vaginal 
epithelium. Biol Reprod, 1979; 21: 953-63.
6. Mattoon J, Nyland T. Ultrasonography of the Genital 
System. En: Nyland T, Mattoon J. (eds.) Veterinary 
Diagnostic Ultrasound. WB Saunders, Philadelphia. 
1995; 141-64
7. Brown JL, Wakter S, Steinman K. Endocrine 
manual for eproductive assessment of domestic and 
non domestic species. Conservation and Research 
Center, Smithsonian´s National Zoological Park VA. 
USA 2008; Pp 62.
8. Risso A, Iglesias M, García Romero G, Valiente C, 
Diaz J, Corrada Y, Gobello C. Validación biológica de 
la técnica de extracción a campo de estradiol fecal 
en el gato domestico (Felis catus) Invet. 2010; 12(1): 
53-58.
9. Shille VM, Wing AE, Lasley BL, Banks JA. Excretion 
of radiolabeled estradiol in the cat (Felis catus, L): a 
preliminary report. Zoo Biol 1984; 3: 2019.
10. Mostl E, Lehmann H, Wenzel U. Gestagens in faeces 
of minks and cats for monitoring corpus luteum activ-
ity. J Reprod Fertil Suppl 1993; 47: 540-41.
11. Wasser SK, Monfort SL, Southers J, Wildt DE. 
Excretion rates and metabolites of oestradiol and pro-
gesterone in baboon (Papio cynocepbalus cynocepbals) 
faeces. J Reprod Fertil 1994; 101: 213-220.
12. Brown JL, Wasser SK, Wildt DE, Graham LH. 
Comparative aspects of steroid hormone metabolism 
and ovarian activity in felids, measured non-invasively 
in feces. Biol Reprod 1994; 51: 776–86.
13. Shile MV, Haggerty MA, Shackleton C, Lasley BL. 
Metabolites of estradiol in serum, bile, intestine and 
feces of the domestic cat ( Felis catus). Theriogenology 
1990; 34: 779-94
14. Graham LH, Raeside JI, Goodrowe KL, Liptrap RM. 
Measurements of faecal oestradiol and progesterone in 
non-pregnant and pregnant domestic and exotic cats. 
J Reprod Fertil Suppl 1993; 47: 119-120.
15. Pelican K.M, Brown JL, Wildt DE, Ottinger MA, 
Howard JG. Short term suppression of follicular re-
cruitment and spontaneous ovulation in the cat using 
levonorgestrel versus a GnRH antagonist. General and 
Comparative Endocrinology 2005; 144: 110-21.


Spanish

Biological validation of the "in field" extraction method for fecal progesterone in the domestic cat (<i>Felis catus</i>)

El Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

LAReferencia - Red Federada de Repositorios Institucionales de Publicaciones Científicas Latinoamericanas

A. Risso y col.28 AnAlectA vet 2010; 30 (2): 28-31 Impresa ISSN 0365514-8 Electrónica ISSN 1514-2590 Trabaj s de InvestigaciónDirección para correspondencia: A. Risso, Laboratorio de Nutrición Mineral y Fisiología Reproductiva, Cáte-dra de Fisiología Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional de La Plata. CC 296, (B1900AVW) La Plata. Argentina. E-mail: arisso@fcv.unlp.edu.arFecha de recepción: 07/06/10 Fecha de aprobación: 20/11/10VALIDACIÓN BIOLÓGICA DE LA TÉCNICA DE EXTRACCIÓN A CAMPO DE PROGESTERONA FECAL EN EL GATO DOMÉSTICO (Felis catus)Risso A, de la Sota PE, García P, Díaz J, Corrada Y, Blanco PG, Gobello C.Laboratorio de Nutrición Mineral y Fisiología Reproductiva, Cátedra de Fisiología. Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional de La Plata RESUMEN : El objetivo de este trabajo fue validar biológicamente en los felinos domésticos la técnica “a campo” de extracción de progesterona (P4) fecal mediante un estudio de correlación con los valores séricos de esta hormona. Secundariamente se compararon las concentraciones fecales de P4 en distintas fases del ciclo estral. Se utilizaron un total de 16 muestras fecales procedentes de 13 hembras felinas pospúberes. Las muestras fecales fueron recolectadas en las etapas de estro (n=3), fase lútea (n=10), y gestación (n=3) definidas por comportamien-to, citología vaginal o ultrasonografía. En forma simultánea al muestreo fecal se tomaron muestras sanguíneas (n=12). Se realizó el método de extracción de esteroides “a campo” y la P4 fue determinada por radioinmunoensayo en todos los casos. La concentración de P4 varió de 20 a 463 ng/g de materia fecal húmeda. El coeficiente de correlación de Pearson entre los valores hallados en materia fecal y en suero fue de 0,77 (p< 0,01). Se encontraron diferencias entre los valores obtenidos en fase folicular vs. fase lútea (106 ± 22,5 vs. 304 ± 47,7; p<0,03), ciclos ovulatorios vs. no ovulatorios (313,25 ± 142,3 vs. 118,3 ± 86,4; p<0,02) pero no entre los ovulatorios vs. gestantes (313,25 ± 142,3 vs. 292,6 ± 130,7; p = 0,08). Se concluye que en el gato doméstico, esta técnica de extracción fecal resulta válida por su alto grado de correlación con los valores séricos, además de permitir diferenciar los periodos de hiperprogesteronemia de los basales durante el ciclo estral. Palabras clave: extracción fecal, esteroide, felinoBIOLOGICAL VALIDATION OF THE “IN FIELD” EXTRACTION METHOD FOR FECAL PROGESTERONE IN THE DOMESTIC CAT (Felis catus)ABSTRACT: The objective of this article was to biologically validate in domestic felids the ¨field method¨ for progesterone (P4) fecal extraction by a correlating fecal and serum values. Additionally, fecal P4 concentrations in different stages of estrous cycle were compared. A total at of 16 fecal samples from 13 postpubertal female cats were used. The samples were collected during estrus (n=3), luteal phase (n=10), and gestation (n=3) defined by behavior, vaginal cytology or ultrasonography. Simultaneously blood samples were drawn (n=12). The “field extraction method¨ was carried out in fecal samples and then P4 was determined by radiommunoassay in all the cases. Fecal P4 concentration ranged from 20 to 463 ng/g wet weight. Pearson correlation coefficient between fecal and serum samples was 0.77 (p< 0.01). Differences between follicular and luteal phase (106 ± 22.5 vs. 304 ± 47.7; p<0.03), ovulatory vs. non ovulatory cycles (313.25 ± 142.3 vs. 118.3 ± 86.4; p<0.02) were found, al-though ovulatory vs. gestational cycles could not be distinguished (313.25 ± 142.3 vs. 292.6± 130.7; p = 0.08). It is concluded that, in the domestic cat, this extraction method is useful to differentiate hyperprogesteronemia from basal P4, and that it provides P4 fecal values highly correlated with serum ones.Key words: fecal extraction, steroid, felidProgesterona en gato doméstico29Impresa ISSN 0365514-8 Electrónica ISSN 1514-2590 AnAlectA vet 2010; 30 (2): 28-31INTRODUCCIÓNEl aumento del número de gatos domésti-cos (Felis catus), como animal de compañía, ha provocado el crecimiento de la demanda del me-joramiento reproductivo en la especie. De acuerdo a su ciclo estral, la hembra felina se clasifica como poliéstrica estacional y de ovulación gene-ralmente inducida (1). Además de su importancia como mascota, el gato doméstico es un excelente modelo experimental para el estudio de enferme-dades humanas (2, 3) y de nuevas biotecnologías reproductivas para felinos silvestres en peligro de extinción (3). El seguimiento hormonal del ciclo estral es necesario para la evaluación del potencial repro-ductivo, de distintos tratamientos técnicas o bien para el desarrollo de técnicas de reproducción asistida. Por esta razón, resulta esencial el desa-rrollo de métodos prácticos para el monitoreo de la actividad endocrina en la especie felina.Los métodos convencionales para obtener datos de la endocrinología de los animales do-mésticos requieren análisis de muestras sanguí-neas seriadas. La venopunción periférica es una maniobra invasiva que resulta impracticable en animales susceptibles al estrés como los felinos. Así, los gatos requieren normalmente anestesia general para este procedimiento. Sin embargo, el análisis de muestras sanguíneas permite la medición en tiempo real de la hormona nativa representando el “gold standard”. Además, en suero o plasma es posible medir todas las hormo-nas, independiente de su naturaleza bioquímica. En contrapartida, métodos no invasivos como la medición de metabolitos hormonales excretados en orina o heces son alternativas atractivas ya que no requieren manipuleo de los animales y evidencian concentraciones hormonales prome-dio. No obstante, solo pueden medirse con estas técnicas esteroides o metabolitos gonadales y adrenales y no hormonas en estado nativo o proteicas. Tampoco resultan en tiempo real las mediciones. Así por ejemplo, el desfasaje temporal de una hormona en sangre hasta que es elimina-da es de 4-12 horas para los metabolitos vertidos en la orina y de 12-24 horas para los eliminados por materia fecal.La determinación de metabolitos hormona-les en materia fecal requiere, como paso previo, el proceso de extracción. Mediante este método, los componentes de interés en las muestras son aislados, removidos o concentrados, evitando la interferencia de otras partículas.El objetivo de este trabajo fue validar bioló-gicamente en el gato doméstico la técnica “a cam-po” de extracción de P4 en materia fecal, mediante un estudio de correlación con los valores séricos. Adicionalmente, como objetivo secundario se compararon las concentraciones fecales de P4 en las distintas fases del ciclo estral. Concretamente, se hipotetizó que existe una correlación positiva entre los valores de P4 hallados en sangre y en materia fecal y que las concentraciones fecales de esta hormona permiten determinar el estadío del ciclo estralMATERIALES Y MÉTODOSANIMAlES Para este estudio se utilizaron un total de 13 hembras felinas pospúberes, fértiles, entre 2 y 4 años de edad pertenecientes a la Colonia Ex-perimental del Laboratorio de Nutrición Mineral y Fisiología Reproductiva de la Facultad de Cien-cias Veterinarias (UNLP). Las gatas estuvieron alojadas en gateras individuales, de acuerdo a las normas internaciones del cuidado de animales de laboratorio, expuestas a fotoperiodo de 14 horas luz y 10 horas de oscuridad y alimentadas con balanceado comercial y agua ad libitum. Un gato macho entero, alojado en similares condiciones, se usó para los servicios y para la observación del comportamiento de las hembras SEguIMIENTO COMPORTAMENTAl Y CITOlógICOLas hembras se examinaron físicamente en forma diaria (>1 hora 2 veces al día) para deter-minar la aparición de estro, el que se corroboró por los hallazgos de comportamiento y citológicos típicos (4, 5). La citología vaginal, como indicador indirecto de las concentraciones estrogénicas, se realizó mediante hisopos óticos embebidos en solución fisiológica, se tiñó con Tinción 15 (Biopur, Sta Fe, Argentina) y se analizó e inter-pretó de acuerdo a Mills y col. (4). Conforme a los resultados obtenidos las muestras se clasificaron en fase folicular (estro) o interestro.dIAgNóSTICO dE gESTACIóN En tres gatas a las que se les dio servicios con el macho, se confirmó la gestación por ul-trasonografía (Toshiba Core Vision Pro, Japan, transductor lineal de 8-MHz) a los 21 días luego de los mismos (6).MuESTREO FECAlSe recogieron un total de 16 muestras fecales durante las etapas de estro (día 3; n=3), interestro (25-28 días del primer día del estro; n=10), y gestación (24-26 días del servicio; n=3). Se seleccionaron heces frescas y libres de ele-mentos ajenos a la muestra. Las muestras fueron conservadas en frascos rotulados a -20 °C hasta su procesamiento. MuESTREO SANguíNEODoce a 24 horas antes del muestreo fecal, en 12 de las hembras, se tomaron muestras de sangre únicas por venopunción periférica y bajo A. Risso y col.30 AnAlectA vet 2010; 30 (2): 28-31 Impresa ISSN 0365514-8 Electrónica ISSN 1514-2590 etapas del ciclo estral se muestran la Tabla 1. Se encontraron diferencias entre los valores obteni-dos en fase folicular vs. fase lútea (p<0,03), ciclos ovulatorios vs. no ovulatorios (p<0,02) pero no entre los ovulatorios vs. gestantes (p = 0,08). DISCUSIÓNPara muchas especies, la decisión de medir hormonas en materia fecal o en orina lo determi-na el hecho de que el material sea fácil de recoger, procesar y analizar. Sin embargo, el modo de excreción también debe considerarse. En el caso de los felinos el análisis urinario de esteroides reproductivos no es una opción viable, ya que los esteroides se excretan casi exclusivamente en las heces (7, 9). Además muchas especies fe-linas, incluida la doméstica, eliminan la orina en forma de spray o gotitas por lo que la recolección resulta imposible. Así como los estrógenos, en la especie feli-na, la mayor parte de progesterona (P4) se excreta por heces más que por orina. Sin embargo a dife-rencia de los primeros, la P4 no se excreta en su forma nativa (10). En otras especies se describió la presencia de metabolitos no conjugados de epimeros pregnenolona en extractos fecales (11). No obstante en el gato más del 70 % de esteroides son conjugados y pueden ser identificados con RIA de P4 (12).Se han descripto variadas técnicas de ex-tracción de esteroides sexuales en las heces de mayor o menor complejidad y número de pasos en los felinos (12-14). Empero, la técnica “a cam-po” resulta muy sencilla y también fue útil para la determinación del estradiol fecal en el gato doméstico (7, 8).Hasta donde conocemos, éste es el primer reporte de la validación biológica de esta técni-ca de extracción para P4 en el gato doméstico. Si bien los valores absolutos de P4 en materia fecal aquí obtenidos resultaron menores a los reportados en la bibliografía (>2,0± 0,3 µg/g de materia fecal seca(15); es importante considerar que las diferencias pueden deberse al método de extracción y a la muestra fecal usada por cada laboratorio. En este trabajo en particular, el uso de una técnica de extracción en materia fecal húmeda pudo haber contribuido al hallazgo de valores absolutos inferiores que los reportados previamente (15).anestesia general, en las etapas de interestro (n= 10), estro (n= 1) y gestación (n= 1). Las muestras se centrifugaron durante 15 minutos, y el suero obtenido fue almacenado a -70ºC hasta su pro-cesamiento. EXTRACCIóN HúMEdA dE METABOlITOS FECAlES El método de extracción de metabolitos de las hormonas esteroideas utilizado es el descripto como “método a campo” por Brown y col. (7). Este método ha sido previamente validado biológicam-nte para estradiol fecal felino (8).dETERMINACIóN dE PROgESTERONALa P4 fue determinada en duplicado con un radioinmunoensayo (RIA) de fase sólida (Coat-A-Count, DPC®, Los Angeles, USA). Los coeficientes de variación intra e inter ensayo fueron menores al 10 %. La sensibilidad de este ensayo al 95 % de unión, según el fabricante, es de 0,1 ng/ml. De acuerdo a los valores séricos de P4 los periodos interestros se clasificaron en ovulato-rios (> 2ng/ml) y no ovulatorios (< 2ng/ml). Los resultados obtenidos en el ensayo en ng/ml se transformaron y expresaron en ng/g de materia fecal húmeda.ANálISIS ESTAdíSTICOSe realizó estadística descriptiva (media ± SEM) de los valores fecales de P4 obtenidos. Además, se calculó el coeficiente de correlación de Pearson entre los valores de P4 en materia fecal y suero (n= 12). Las diferencias entre las concentraciones de P4 en las muestras fecales tomadas en fase folicular (n=3) vs. en fase lútea (n=13; preñadas y vacías), ciclos ovulatorios (n= 4) vs. no ovulatorios (n= 6), y ovulatorios (n= 4) vs. gestantes (n=3) se compararon mediante tests de Student. El nivel de significancia se estableció como p< 0.05 (Sigma Stat SPSS, Inc.,Chicago, IL, USA). RESULTADOS En la totalidad de las muestras la concen-tración de P4 varió de 20 a 463 ng/g de materia fecal húmeda. El coeficiente de correlación de Pearson entre los valores hallados en materia fecal y en suero fue de 0,77 (p< 0,01). Las con-centraciones fecales de P4 durante las distintas Fase folicular Fase lúteaNo ovulatoria Ovulatoria GestanteP4 (ng/g)    106 ± 22,5 118 ± 86,4 313,25 ± 142,3 292 ± 130,7Tabla 1: Concentraciones (media ± SEM) fecales de progesterona (P4; ng/g)  durante las fases folicular y  lútea de trece gatas domésticas.Progesterona en gato doméstico31Impresa ISSN 0365514-8 Electrónica ISSN 1514-2590 AnAlectA vet 2010; 30 (2): 28-31De acuerdo a los resultados aquí obtenidos, la técnica de extracción usada resultó represen-tativa de los valores séricos de esta hormona. Además, esta técnica permitió diferenciar los periodos de hiperprogesteronemia (ciclos ovulato-rios y gestación) de los de P4 basal (estro y ciclos no ovulatorios) del ciclo estral felino. Como era de esperar, y tal como ocurriría en suero alrededor del día 25, no se detectaron diferencias significati-vas en la P4 fecal entre las gatas pseudoporeñadas (ovuladas y vacías) y las preñadas.La determinación de P4 sérica y eventos fisiológicos que indirectamente indican pro-gesteronemia basal (conducta de celo, estro colpocitológico) o elevada (gestación) garantizan claramente la validez de la técnica. Se concluye que en el gato doméstico, la técnica de extracción “a campo” para P4 fecal, además de sencilla, re-sulta útil por su alto grado de correlación con los valores séricos y permite diferenciar los periodos de hiperprogesteronemia de los de P4 basal del ciclo estral. AGRADECIMIENTOSLos autores agradecen a la empresa Vital can, Argentina por la provisión del alimento de los animales de la colonia.BIBLIOGRAFÍA 1. Concannon P, hodgson B, Lein, D. Reflex Lh release in estrous cats following single and multiple copula-tions. Biol Reprod 1980; 23: 111-7.2. Fox PR, Maron BJ, Basso C, Liu SK, Thiene G. Spontaneously occurring arrhythmogenic right ven-tricopathy in the domestic cat: a new animal model similar to the human disease. Circulation 2000; 102: 1863-70. 3. O’Brien SJ, Nash WG, Winkler CA, Reeves RH. Ge-netic analysis in the domestic cat as an animal model for inborn errors, cancer and evolution, en: Migaki G, Desnick RJ, Patterson DF. (Eds.), Animal Models of Inherited Metabolic Diseases, Prog. Clin. Biol Res 1982; 94: 67–90.4. Mills JN, Valli VE, Lumsden JH. Cyclical changes of vaginal cytology in the cat. Can Vet J 1979; 20: 95-101.5. Shille VM, Lundström KE, Stabenfeldt GH. Fol-licular function in the domestic cat as determined by estradiol-17β concentrations in plasma: relation to estrous behavior and cornifcation of exfoliated vaginal epithelium. Biol Reprod, 1979; 21: 953-63.6. Mattoon J, Nyland T. Ultrasonography of the Genital System. En: Nyland T, Mattoon J. (eds.) Veterinary Diagnostic Ultrasound. WB Saunders, Philadelphia. 1995; 141-647. Brown JL, Wakter S, Steinman K. Endocrine manual for eproductive assessment of domestic and non domestic species. Conservation and Research Center, Smithsonian´s National Zoological Park VA. USA 2008; Pp 62.8. Risso A, Iglesias M, García Romero G, Valiente C, Diaz J, Corrada Y, Gobello C. Validación biológica de la técnica de extracción a campo de estradiol fecal en el gato domestico (Felis catus) Invet. 2010; 12(1): 53-58.9. Shille VM, Wing AE, Lasley BL, Banks JA. Excretion of radiolabeled estradiol in the cat (Felis catus, L): a preliminary report. Zoo Biol 1984; 3: 2019.10. Mostl E, Lehmann H, Wenzel U. Gestagens in faeces of minks and cats for monitoring corpus luteum activ-ity. J Reprod Fertil Suppl 1993; 47: 540-41.11. Wasser SK, Monfort SL, Southers J, Wildt DE. Excretion rates and metabolites of oestradiol and pro-gesterone in baboon (Papio cynocepbalus cynocepbals) faeces. J Reprod Fertil 1994; 101: 213-220.12. Brown JL, Wasser SK, Wildt DE, Graham LH. Comparative aspects of steroid hormone metabolism and ovarian activity in felids, measured non-invasively in feces. Biol Reprod 1994; 51: 776–86.13. Shile MV, Haggerty MA, Shackleton C, Lasley BL. Metabolites of estradiol in serum, bile, intestine and feces of the domestic cat ( Felis catus). Theriogenology 1990; 34: 779-9414. Graham LH, Raeside JI, Goodrowe KL, Liptrap RM. Measurements of faecal oestradiol and progesterone in non-pregnant and pregnant domestic and exotic cats. J Reprod Fertil Suppl 1993; 47: 119-120.15. Pelican K.M, Brown JL, Wildt DE, Ottinger MA, Howard JG. Short term suppression of follicular re-cruitment and spontaneous ovulation in the cat using levonorgestrel versus a GnRH antagonist. General and Comparative Endocrinology 2005; 144: 110-21.

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