Identification of an antitumoral fraction obtained from the lactic acid bacterium Lactobacillus acidophilus

Abstract

[ES] El estudio de los probióticos ha cobrado una gran importancia en los últimos años debido a su papel en el mantenimiento de una microbiota intestinal equilibrada, así como en el tratamiento de ciertas enfermedades, incluidos ciertos tipos de cáncer. En este trabajo, se ha analizado el efecto anti-proliferativo de un extracto bacteriano obtenido a partir de la cepa probiótica Lactobacillus acidophilus sobre la línea celular HT29. Este efecto se ha detectado con una técnica de impedancia no invasiva que permite cuantificar la proliferación celular. Además, se ha realizado un análisis del ciclo celular mediante citometría de flujo, ya que una posible hipótesis era que este extracto afectase a la división celular. Finalmente, se observó un efecto sobre la línea celular dependiente de la concentración. Aunque dicho efecto se atribuyó inicialmente a un descenso en la proliferación, los resultados de citometría no parecen reflejar esta idea y dan pie a nuevas hipótesis, incluidas una alteración en la morfología/adhesión celular o un efecto anti-proliferativo que no se detectaría debido a la aparición de mecanismos de resistencia. Además, un segundo análisis con citometría de flujo descarta su efecto sobre la viabilidad celular. Por otro lado, la elevada complejidad del extracto requiere de un fraccionamiento previo, por ejemplo mediante cromatografía líquida, para poder identificar qué moléculas son responsables del efecto observado. Antes de llevar a cabo esta operación, es necesaria una optimización de las condiciones de separación, lo cual se presenta en este trabajo utilizando la técnica de cromatografía en capa fina. De esta forma, se consiguió establecer condiciones óptimas tanto para cromatografía en fase reversa con mezclas de acetonitrilo y agua, como para fase normal con mezclas de hexano y acetato de etilo, acetato de etilo y metanol, y cloroformo y metanol.[EN] The global interest in probiotics has gained a great relevance over the last few years due to its importance in both the maintenance of a balanced gut microbiota, and the treatment of several diseases, including certain type of cancers. In the present study, the anti-proliferative effect from a bacterial extract which has been obtained from probiotic strain, Lactobacillus acidophilus, has been tested on the HT29 cell line, derived from a colon adenocarcinome. This effect could be observed thanks to a non-invasive impedance assay, which allows for cell proliferation quantification. Furthermore, a cell cycle analysis through flow cytometry has been also carried out in order to get a better idea about the action mechanism of the extract, as one of the main hypothesis would be its possible impact on the cell division. Finally it could be observed an effect over the cell line dependent on concentration. Although this effect had been previously associated with a decrease in cell proliferation, it seems that flow cytometry results do not reflect this idea and thus, several hypothesis have been purposed, including changes in cell morphology/adhesion or an anti-proliferative effect which was not detected because of resistance mechanisms. Additionally, a second flow cytometry analysis showed no effect on cell viability. On the other hand, the huge complexity of the extract requires a previous separation through liquid chromatography, in order to be able to identify which molecule or molecules are responsible for the observed effect. Before performing this technique, it is necessary to carry out an optimization through thin layer chromatography, which is included in this study. At the end, several optimal conditions have been reached for both reverse phase with mixtures of acetonitrile and water, and normal phase with mixtures of hexane and ethyl acetate, ethyl acetatePeer reviewe