Mestrado em Biologia Molecular e CelularA Polipose Associada ao MYH (MAP) é uma das síndromes de polipose cólica
associadas a risco aumentado de cancro colorretal. Descoberta em 2002, a
MAP é uma síndrome hereditária com transmissão autossómica recessiva.
Causada por mutações bialélicas no gene MYH, a MAP é responsável por
cerca de 0,5 - 1% dos carcinomas colorrectais. O gene MYH codifica a enzima
MYH glicosilase que faz parte do sistema de reparação de DNA por excisão de
bases (BER). O sistema BER desempenha um papel significativo na reparação
de mutações causadas por espécies reativas de oxigénio (ROS).
Este estudo teve como principal objetivo determinar as frequências alélicas
das mutações patogénicas detetadas numa série de 115 amostras
consecutivas estudada no GDPN, de modo a delinear um protocolo laboratorial
de rastreio de alterações do gene MYH eficaz, rentável e adequado. Através
das técnicas de DGGE e sequenciação direta, foram detetados 29 casos com
variações de sequência (excluindo polimorfismos conhecidos), em que as
mutações missense p.Tyr179Cys e p.Gly396Asp foram responsáveis por
72,2% dos alelos mutados. As outras mutações patogénicas encontradas
foram a mutação frameshift c.1227_1228dupGG, já detetada na população
portuguesa e a deleção extensa dos exões 4 ao 16 [c.349-?_(1650_?)del], com
apenas dois relatos na literatura. A maioria das restantes variantes
encontradas, embora classificadas como “provavelmente patogénicas” por
programas computacionais preditivos do efeito das mutações na proteína,
ainda carecem de estudos funcionais para que possam ser definitivamente
“rotuladas” de patogénicas.
Tendo em conta a variedade de mutações encontradas ao longo do gene e os
casos de heterozigotia composta detetados, a melhor estratégia para o rastreio
de alterações do gene MYH neste laboratório, deverá passar pelo estudo
inicial dos exões 7 e 13 do gene, seguindo-se o estudo de toda a sequência
codificante do gene em todos os casos negativos ou heterozigóticos para uma
mutação patogénica. Por outro lado, nos pacientes portadores de mutação em
aparente homozigotia ou heterozigotia deverá ser considerada a hipótese de
uma análise adicional por MLPA no sentido de detetar/excluir a presença de
grandes deleções/duplicações.MYH-associated polyposis (MAP) is one of the colon polyposis syndromes
associated with a significant increased CCR risk. Discovered in 2002, MAP is a
hereditary syndrome with autosomal recessive transmission. Caused by
biallelic mutations in MYH gene, is responsible for about 0.5 – 1% of colorectal
carcinomas. The MYH gene encodes the enzyme MYH glycosylase, which is
part of the DNA repair by base excision (BER). The BER system plays a
significant role in the repair of mutations caused by reactive oxygen species
(ROS).
This study aimed at determining the allele frequencies of MYH pathogenic
mutations in order to devise an efficient, cost effective and suitable protocol for
laboratory screening of MYH gene alterations. Using DGGE and direct
sequencing 29 positive cases with MYH altered sequence (excluding known
polymorphisms) were detected. Missense mutations p.Tyr179Cys and
p.Gly396Asp accounted for 72,2% of mutated alleles. The other pathogenic
mutations found were the frameshift mutation c.1227_1228dupGG, already
detected in the Portuguese population and the extensive deletion of exons 4-16
[c.349-? _ (1650_?)del], with only two reports in the literature. Most of the
remaining variants found, although classified as “likely pathogenic” by
computational programs predicting the effect of mutations in the protein, still
lack functional studies in order to be definitively “labelled” as pathogenic.
Given the variety of mutations found throughout this gene and the detected
cases of compound heterozygosity, the best strategy for the screening of the
MYH gene in this laboratory should include the initial screening of exons 7 and
13, followed by the study of the entire coding sequence of the gene in all cases
negative or heterozygous for a pathogenic mutation. Moreover, in patients who
appear to be homozygous or heterozygous for a certain mutation further
analysis by MLPA should be considered, in order to detect/exclude the
presence of large deletions/duplications
