Mestrado em Biologia Molecular CelularAs doenças cardiovasculares (DCV) são a principal causa de morte e
morbilidade na união europeia. Os Acidentes Vasculares Cerebrais (AVC)
jovens são raros e de difícil diagnóstico, devido ao grande número de causas
possíveis, quando comparado com os AVC’s em idosos. A maioria dos
estudos são pouco conclusivos no que diz respeito aos factores de risco
associados a este tipo de AVC. Na origem dos AVC’s jovens estão implicados
vários factores: genéticos, ambientais, dietéticos, inflamatórios, entre outros.
Tendo em conta o aumento de incidência desta patologia, a determinação de
factores genéticos de risco trombótico poderá ser um passo importante para
prevenção desta doença. Apesar da variedade de factores genéticos, apenas
alguns deles foram objecto deste estudo, nomeadamente: o Factor V Leiden
(F V Leiden), G20210 na protrombina, 4G/5G no Inibidor do Activador do
Plasminogénio-1 (PAI-1), C677T e A1298C na Metilenotetrahidrofolato
Redutase (MTHFR) e as posições T334C e C472T da Apolipoproteína E (Apo
E). O principal objectivo deste trabalho foi associar estes polimorfismos à
ocorrência do AVC jovem. Paralelamente à análise individual dos
polimorfismos, desenvolveu-se um teste PCR-SSP multiplex com a maioria
das mutações estudadas.
Neste estudo, foram analisadas amostras de sangue periférico de 294
indivíduos, divididos em três grupos distintos (98 AVC jovem, 98 população
normal e 98 controlos) por PCR-SSP. Comparando a frequência dos
polimorfismos, entre pacientes com AVC jovem e controlos, apenas se
verificou diferenças significativas no factor V (alelo A e genótipo GA) e na Apo
E (isoforma E2). O factor V Leiden revelou maior frequência no grupo AVC
jovem (p < 0,05). Por outro lado, a isoforma E2 da Apo E apresentou maior
prevalência na população controlo (p=0,0399). Para além dos resultados
significativos, obtiveram-se duas tendências, uma no genótipo E4E4, mais
prevalente no grupo alvo (p=0,0827), e outra no E2E2, que foi mais prevalente
na população controlo (p=0,0827). Não foi possível correlacionar a maioria dos
polimorfismos com a susceptibilidade para a AVC em jovem. Pode apenas
concluir-se que o genótipo GA e o alelo A do factor V Leiden, e o genótipo
E4E4 da Apo E podem ser considerados factores de risco e possíveis
preditores da ocorrência de AVC jovem enquanto a isoforma E2 e o genótipo
E2E2 podem ser consideradas factores responsáveis pela diminuição da
susceptibilidade para AVC Jovem, podendo mesmo ter papel protector. Por
fim, foi optimizada uma reacção multiplex bastante completa para a tipagem
da maioria dos polimorfismos que demonstrou ser reprodutível, rápida, versátil,
sensível, específica e económica.Cardiovascular diseases (CVD) are the leading cause of death and morbidity in
the European Union. The Strokes (CVA) in young adults are rare and difficult to
diagnose due to the large number of possible causes, compared with strokes in
the elderly. Most studies are inconclusive with regard to risk factors associated
with this type of stroke. In the origins of the strokes in young adults, are
involved several factors: genetic, environmental, dietary, inflammatory, and
others. Having regard to the increased incidence of this pathology, the
determination of genetic risk of thrombosis may be an important step in
preventing this disease. Despite the variety of genetic factors, only some of
them were the subject of this study, namely: Factor V Leiden (FV Leiden), the
G20210 in prothrombin, 4G/5G in plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1),
C677T and A1298C in the methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) and
the positions T334C e C472T of the Apolipoprotein E (Apo E). The main goal of
this work was to associate these polymorphisms with the occurrence of stroke
in young age. Parallel to the individual polymorphisms analysis, we developed
a multiplex PCR-SSP reaction with most of the studied mutations.
In this work, we analyzed peripheral blood samples of 294 individuals, from
three distinct groups (98 stroke in young adults, 98 standard population and 98
controls) by PCR-SSP. Comparing the frequency of polymorphisms among
young stroke patients and controls, we only detect significant differences in the
factor V (allele and genotype GA) and Apo E (E2 isoform). The factor V Leiden
revealed more frequently in young stroke group (p <0.05). Moreover, the E2
isoform of Apo E showed the highest prevalence in controls (p = 0.0399). In
addition to the significant results were obtained two trends, one in E4E4, more
prevalent in the target group (p = 0.0827), and another in E2E2, which was
more prevalent in controls (p = 0.0827). It was not possible to correlate most
polymorphisms with susceptibility to stroke in young age. It´s only possible to
conclude that the GA genotype and allele A of factor V Leiden, and the E4E4
genotype of Apo E can be considered risk factors and possible predictors of
the occurrence of stroke in young, while the isoform E2 and E2E2 genotype
can be considered a factor responsible for decreased susceptibility to stroke
young and may have protective role. Finally, we optimized a multiplex reaction
a lot of typing to complete most of the polymorphisms that proved to be
reproducible, rapid, versatile, sensitive, specific and economi