BASSI, S.

FERNANDES, L. T.

MORES, N.

SCHIOCHET, M. F.

TROMBETTA, C.

ZANELLA, J. R. C.

Infoteca-e

0,1,67e5, ' $*5,&8/785$3(&8É5,  $%$67(&,0(172 Comunicado 339Técnico ISSN 0100-8862Dezembro/2003Concórdia, SCEstudo da Ocorrência deCircovírus Suíno tipo 2 (PCV2) emSuínos Vivos ou em Materiais comSuspeita Clínica de CircoviroseSuína Enviados para DiagnósticoJanice Reis Ciacci-Zanella1Nelson Morés2Lana Teixeira Fernandes3Simone S. Bassi4Cristiano Trombetta5Marisete Fracasso Schiochet6IntroduçãoA circovirose suína é uma infecção por circovírussuíno tipo 2 (PCV2), identificada pela primeira vez noCanadá em 1991 e desde então tem sido descritaem vários países inclusive no Brasil, sendo consi-derada, atualmente, como uma doença de distribuiçãomundial. A síndrome multisistêmica do definhamentodos suínos (SMD) é a manifestação da circovirosesuína mais conhecida e é caracterizada porperda de peso progressiva, sintomas respiratórios edigestivos, aumento de volume de linfonodos, anemia eicterícia. As lesões patológicas incluem inflamações devários órgãos, como linfonodos, pulmões, fígado, rins,pâncreas e, principalmente necrose do tecido linfóidecom consequente redução na resistência dos animaisà outras doenças. Antígenos e DNA do PCV2 podemser demonstrados em órgãos de suínos com SMD. Parao diagnóstico definitivo de SMD deve-se considerartrês fatores: a) a doença clínica, b) a lesões macroe microscópicas, c) e, mais importante, a associaçãode PCV2 (antígeno ou DNA) com essas lesões. Oobjetivo principal desse trabalho foi avaliar a freqüênciade diagnósticos de circovirose em suínos ou materiaisenviados ao Laboratório de Sanidade da EmbrapaSuínos e Aves nos anos de 2000 a 2003, compararos resultados dos testes laboratoriais e associar aocorrência do PCV2 ao diagnóstico clínico, patológicoe virológico e confirmar sua associação à SMD.Estudo realizadoNo período entre janeiro de 2000 a outubro de 2003,152 amostras de órgãos de suínos ou suínos vivos(99 somente em 2003) provenientes de 74 rebanhossuínos foram submetidos a diagnóstico laboratorialpara circovirose suína no Laboratório de Sanidade daEmbrapa Suínos e Aves, Concórdia, SC. Para realizaro diagnóstico de leitões provenientes de rebanhos com1Méd. Vet., Ph.D. Pesquisadora da Embrapa Suínos e Aves.2Méd. Vet., M.Sc. Pesquisador da Embrapa Suínos e Aves.3Méd. Vet., M.Sc. Universidade Federal de Goiás - UFG, Goiânia - GO.4Bióloga, estagiária, convênio Embrapa Suínos e Aves e Universidade do Contestado - UnC - Concórdia, SC.5Biólogo, estagiário, convênio Embrapa Suínos e Aves e Universidade do Contestado - UnC - Concórdia, SC.6Auxiliar de Operações III - Embrapa Suínos e Aves.2 Estudo da Ocorrência de Circovírus Suíno tipo 2 (PCV2) em Suínos Vivos ou em Materiais com Suspeita Clínica de CircoviroseSuína Enviados para Diagnósticohistórico de emagrecimento progressivo, refugageme mortalidade na creche e início de crescimento,foram solicitados animais entre 5 a 12 semanas deidade. Os suínos eram examinados e a necrópsia erarealizada para observação de lesões macroscópicase colheita de materiais para exames histopatológicos,virológicos ou bacteriológicos, se necessário. Para oexame histopatológico eram coletados (ou submetidos)órgãos linfóides como amígdala, timo, baço, linfonodos(inguinais e mesentéricos), íleo (placas de Peyer),pulmões, fígado, rins, coração e encéfalo, fixados emformalina 10% tamponada. Para comprovar a presençade DNA de PCV2 através da nested-PCR (reação emcadeia da polimerase - interna), fragmentos dessesmesmos órgãos também foram enviados para examesvirológicos. Este exame também foi realizado quandosolicitado por clientes externos, após a suspeita clínicae / ou exame histopatológico preliminar. Fragmentosde órgãos suínos foram submetidos à extração deDNA pelo método da proteinase K. Nesse estudo,dois protocolos de nested-PCR foram empregadosutilizando seqüência de primers específica para PCV2.Resultados e comentáriosNo total de 152 amostras, 82 amostras de ór-gãos (ou leitões vivos) foram submetidos à necrop-sia, exames histopatológicos e nested-PCR. Vinte ecinco foram submetidos apenas à histopatologia e 45submetidos apenas para teste de nested-PCR. Nanecropsia, as alterações mais freqüentes foram palidezemagrecimento (definhamento) da carcaça (Fig. 1) eaumento de volume dos linfonodos (Fig. 2) e pontosbrancacentos na superfície renal (Fig. 3). Outras lesõesencontradas com menor freqüência foram lesões circu-lares e hemorrágicas na pele, pulmões não-colabados,redução de tamanho do timo (Fig. 4), edema de tecidosconjuntivos e úlcera gástrica. Lesões microscópicascaracterísticas de circovirose suína (depleção de lin-fócitos e infiltração inflamatória linfo-histiocitária) foramencontradas em órgãos linfóides (linfonodos, amíg-dalas, placas de Peyer e baço), fígado, rins e pulmões.Nos órgãos linfóides, além de necrose e redução dascélulas da linhagem linfóide, observou-se infiltração dehistiócitos, as vezes formando células multinucleadas,proliferação de tecido conjuntivo e em muitos casospresença de inclusões intracitoplasmáticas nos histió-citos (Fig. 5) As lesões pulmonares incluíram pneu-monia multifocal intersticial com infiltração de célulasinflamatórias e bronquite severa, com graus variados dedisseminação pelo órgão. Nos rins, graus variáveis denefrite multifocal com vasculite, especialmente na áreada córtex, foi o achado mais freqüente. A variação daintensidade e distribuição de lesões em órgãos alvo noscasos de SMD depende, provavelmente, do estágio dadoença no suíno afetado.Oitenta e duas amostras de órgãos suínos foramanalisadas por histopatologia e também por nested-PCR para amplificar o DNA de PCV2 presente nessestecidos. Dentre elas, 51 amostras (62,2%) forampositivas em ambos testes, 17 (20,7%) foram positivasapenas na histopatologia, 06 (7,3%) foram positivasapenas na nested-PCR e 08 (9,8%) foram negativas emambos os testes (Fig. 6).Embora o DNA de PCV2 não foi amplificado domaterial de muitos dos suínos refugos, os testesde histopatologia e PCR juntos foram os que deramresultados mais consistentes. O fato de algumasamostras serem positivas na histopatologia e negativasna nested-PCR pode ser explicada pela ausência deDNA viral nessas amostras, devido ao estágio evolutivoda doença. Amostras positivas no teste de PCR,porém negativas na histopatologia indicam a presençado DNA viral na amostras sem a ocorrência de lesõesou doença. Suínos refugos não são necessariamentesuínos com SMD, existem várias outras causas infec-ciosas ou não que provocam refugagem de leitões nacreche e crescimento.Quarenta e cinco amostras de órgãos suínos previa-mente diagnosticadas clinicamente e por histopatologiacomo SMD por clientes externos, foram submetidas ànested-PCR para detecção do PCV2. Dentre elas, 23(51%) foram positivas e 22 (49%) foram negativas paraPCV2 (Fig. 7) sugerindo também que o teste de PCRsozinho deve ser utilizado com cuidado para diagnósti-co de circovirose suína. Amostras de órgãos suínoscom suspeita de circovirose também foram submetidaspor clientes externos, para serem analisadas somentepor histopatologia. De 25 amostras testadas, 23 (92%)foram positivas e 02 (8%) foram negativas (Fig. 7).Esses resultados indicam a necessidade de utilizarvários procedimentos para o diagnóstico definitivo daSMD associada ao PCV2.Conclusões e recomendaçõesA SMD associada ao PCV2 é freqüente em casosde quadros clínicos de emagrecimento progressivo deleitões nas fases de creche e início do crescimento emrebanhos suínos no Brasil. Para o diagnóstico definitivoda SMD, é necessário combinar o quadro clínico, comas lesões macroscópicas e microscópicas e detectar oagente (PCV2) nos órgãos afetados. Por esta razãorecomenda-se que diante de um quadro clínico suspeitoda SMD, dois leitões afetados sejam sacrificados paracolheita de amostras ou enviados a um laboratório dediagnóstico que esteja habilitado em fazer os testesnecessários. No caso de envio de amostras de órgãosao laboratório deve-se colher fragmentos de linfonodos(inguinais e mesentéricos), íleo, pulmão, rim e fígado.Uma amostra de cada órgão citado deve ser colocadaem formalina 10% tamponada e outra parte refrigeradaou congelada, para em seguida serem enviadas aolaboratório.Estudo da Ocorrência de Circovírus Suíno tipo 2 (PCV2) em Suínos Vivos ou em Materiais com Suspeita Clínica deCircovirose Suína Enviados para Diagnóstico 3Figura 1 – Lote de leitões em fase inicial de crescimentocom a Síndrome Multissistêmica do Definha-mento: sinais de apatia e emagrecimento.Figura 2 – Suíno com Síndrome Multissistêmica doDefinhamento: hipertrofia dos linfonodosinguinais.Figura 3 – Suíno com a Síndrome Dermatite-Nefropatia: superfície irregular e difusasmanchas brancacentas na superfície.Figura 4 – Suíno com Síndrome Multissistêmica do De-finhamento; áreas multifocais de pneumonia.Figura 5 – Suíno com Síndrome Multissistêmica doDefinhamento: histiócito com múltiplas in-clusões basofílicas intracitoplasmáticas emum linfonodo.51176 80102030405060His to e PCR + His to + PCR+ NegFigura 6 – Amostras testadas por Histopatologia enested-PCR. Número de amostras positi-vas nos testes de Histopatologia (Histo+),nested-PCR (PCR+), em ambos os testes(Histo e PCR+) e amostras negativas nosdois testes (Neg.).4 Estudo da Ocorrência de Circovírus Suíno tipo 2 (PCV2) em Suínos Vivos ou em Materiais com Suspeita Clínica de CircoviroseSuína Enviados para Diagnóstico23 2322201020304050His to P CRP os it ivo NegativoFigura 7 – Amostras testadas somente por Histopato-logia ou nested-PCR. Suíno com SíndromeMultissistêmica do Definhamento: histiócitocom múltiplas inclusões basofílicas intracito-plasmáticas em um linfonodo.Referências BibliográficasELLIS, J. A. AND ALLAN, G. The natural historyof porcine circoviruses. PMWS Symposium. In:INTERNATIONAL PIG VETERINARY SOCIETYCONGRESS, 16., 2000, Melbourne. Proceedings.Melbourne: IPVS, 2000. P.3. PMWS Symposium.HAMEL, A. L., LIN, L. L., SACHVIE, C., GRUDESKI,E., NAYAR, G. P. S. PCR detection and characterizationof type-2 porcine circovirus. The Canadian Journal ofVeterinary Research, v.64, p.44-52, 2000.KIM, J.; HAN DU; CHOI, C.; CHAE, C. Differentiationof porcine circovirus (PCV)-1 and PCV2 in boar semenusing a multiplex nested polymerase chain reaction.Journal of Virological Methods, Amsterdam, v. 98, n.1, p. 25-31, 2001.LAROCHELLE, R.; MORIN, M.; ANTAYA, M. MAGAR,R. Identification and incidence of porcine circovirus inroutine field cases in Quebec as determined by PCR.Veterinary Record, v.145, p.140-142, 1999.ROSELL, C., SEGALES, J., PLANA-DURAN, J., BA-LASCH, M., RODRIGUEZ-ARRIOJA, G. M., KENNEDY,S., ALLAN, G. M., MCNEILLY, F., LATIMER, K. S.,DOMINGO, M. Pathological, immunohistochemical,and in situ hybridization studies of natural cases ofpost-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS)in pigs. Journal of Comparative Pathology, v.120,p.59-68, 1999.ZANELLA, J. R. C.; MORES, N. Síndrome multisistêmi-ca do definhamento do leitão desmamado (SMDLD)causada por circovírus suíno. In: CONGRESOMERCOSUR DE PRODUCCIÓN PORCINA, 2000,Buenos Aires. Memoria. Buenos Aires: Universidadde Buenos Aires, 2000. p.EIP16.ZANELLA, J. R. C.; MORES, N.; SCHIOCHET, M.F.; TROMBETTA, C. Diagnóstico molecular e caracte-rização de circovírus suíno tipo 2 isolados no Brasil.In: CONGRESSO BRASILEIRO DE VETERINARIOSESPECIALISTAS EM SUINOS, 10., 2001, Porto Alegre.Anais. Concórdia: Embrapa Suínos e Aves. 2001, p.99-100.ComunicadoTécnico, 3390,1,67e5, ' $*5,&8/785$3(&8É5,  $%$67(&,0(172Exemplares desta edição podem ser adquiridos na:Embrapa Suínos e AvesEndereço: Caixa Postal 21, 89700-000,Concórdia, SCFone: (49) 442-8555Fax: (49) 442-8559Email: sac@cnpsa.embrapa.br1a edição1a impressão (2003) tiragem: 100Comitê dePublicaçõesPresidente: Paulo Roberto Souza da SilveiraMembros: Paulo Antônio Rabenschlag de Brum,Janice Reis Ciacci Zanella, Gustavo J.M.M. deLima, Julio Cesar P. Palhares, Cícero JulianoMonticelli.RevisoresTécnicosCícero J. Monticelli, Jalusa Deon Kich.Expediente Supervisão editorial: Tânia M.B. Celant.Editoração eletrônica: Simone Colombo.Normalização bibliográfica: Irene Z.P. Camera.Foto capa: Nelson Morés.

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