Introdução. As Aflatoxinas. A Aflatoxina M1 (AFM1). Mecanismos de contaminação do leite por AFM1. Principais efeitos tóxicos. Relação de AFB1 ingerida e a concentração de AFM1, excretada no leite. Prevenção. Métodos de detecção e qualificação de Aflatoxina M1 em leite e derivados. Legislação. Referências bibliográficas.bitstream/item/79983/1/doc67-2005.pd

FARIAS, A. X. de

FREITAS-SILVA, O.

MONTELLO, A. P.

MORAES, M. H. de

SOUZA, M. de L. M. de

Introdução. As Aflatoxinas. A Aflatoxina M1 (AFM1). Mecanismos de contaminação do leite por AFM1. Principais efeitos tóxicos. Relação de AFB1 ingerida e a concentração de AFM1, excretada no leite. Prevenção. Métodos de detecção e qualificação de Aflatoxina M1 em leite e derivados. Legislação. Referências bibliográficas

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ISSN 0103-6068 67Dezembro, 2005Empresa Brasileira de Pesquisa AgropecuáriaCentro Nacional de Pesquisa de Tecnologia Agroindustrial de AlimentosMinistério da Agricultura, Pecuária e AbastecimentoDocumentos67Antônio Xavier de FariasOtniel Freitas-SilvaMaria Heloísa de MoraesMaria de Lourdes Mendes de SouzaAndré Pires MontelloAflatoxina M1 em Leite: UmRisco para a Saúde PúblicaRio de Janeiro, RJ200520 Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde PúblicaExemplares desta publicação podem ser adquiridos na:Embrapa Agroindústria de AlimentosAv. das Américas, 29.501 - GuaratibaCEP: 23020-470 - Rio de Janeiro - RJTelefone: (0xx21)2410-9500Fax: (0xx21)2410-1090Home Page: www.ctaa.embrapa.brE-mail: sac@ctaa.embrapa.brComitê de Publicações da UnidadePresidente:  Regina Isabel NogueiraMembros: Maria da Graça Fichel do NascimentoMaria Ruth Martins LeãoNeide Botrel GonçalvesRonoel Luiz de O. GodoyVirgínia Martins da MattaSecretária: Renata Maria Avilla PaldêsSupervisor editorial:  Maria Ruth Martins LeãoRevisor de texto:  Comitê de PublicaçõesNormalização bibliográfica:  Maria Ruth Martins LeãoFoto da capa: André Guimarães de SouzaTratamento de Ilustrações: André Guimarães de SouzaEditoração eletrônica: André Luis Gomes do Nascimento                               André Guimarães de Souza1a edição1a impressão (2005): versão on-lineTodos os direitos reservados.A reprodução não-autorizada desta publicação, no todo ou emparte, constitui violação dos direitos autorais (Lei n0 9.610).Dados Internacionais de Catalogação na Publicação - CIPEmbrapa Agroindústria de AlimentosFarias, Antônio Xavier de.    Aflatoxinas M1 em leite: um risco para a saúde pública/ por Antônio Xavier de Farias ... [et al.] - Rio de Janeiro:Embrapa Agroindústria de Alimentos, 2005.    20 p. ; 21 cm. - (Embrapa Agroindústria de Alimentos.Documentos, ISSN 0103-6068; 67).    1. Aflatoxina 2. Leite. 3. Detecção I. Freita-Silva, Otniel.II. Moraes, Maria Heloísa de. III. Souza, Maria de Lourdes M. de.IV. Montello, André Pires. V. Título VI. Série.                                                        CDD 615.9529 (21. ed.)                    © Embrapa, 200519Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde PúblicaAutoresAntonio Xavier de FariasBiól., M.Sc., Pesquisador da  Embrapa Agroindústria deAlimentos, Av. Das Américas, 29.501 - Guaratiba, CEP23020-470, Rio de Janeiro, RJ. Telefone: ( 0xx21)2410-9585. E-mail: antxafar@ctaa.embrapa.brOtniel Freitas-SilvaEng. Agron., M.Sc., Pesquisador da  EmbrapaAgroindústria de Alimentos, Av. Das Américas, 29.501 -Guaratiba, CEP 23020-470, Rio de Janeiro, RJ. Telefone:( 0xx21) 2410-9585.E-mail: ofreitas@ctaa.embrapa.brMaria Heloisa de MoraesQuím., M.Sc., Tecnologista do Instituto Nacional deControle Qualidade em Saúde – Fundação Oswaldo CruzAv. Brasil 4365 – Manguinhos, CEP 21045-900Rio de Janeiro, RJ. Telefone: (oxx21) 3865-5123E-mail: isa@incqs.fiocruz.brMaria de Lourdes  Mendes de SouzaFarmac., M.Sc., Técnico de Nível Superioro da EmbrapaAgroindústria de Alimentos, Av. Das Américas, 29.501 -Guaratiba, CEP 23020-470, Rio de Janeiro, RJ. Telefone:( 0xx21) 2410-7521. E-mail: mlourdes@ctaa.embrapa.brAndré Pires MontelloQuím. Lic., Assist. Operacional da Embrapa Agroindústriade Alimentos, Av. Das Américas, 29.501 - Guaratiba,CEP 23020-470, Rio de Janeiro, RJ. Telefone: ( 0xx21)2410-9586. E-mail: montello@ctaa.embrapa.br18 Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde PúblicaReferências BibliográficasASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods ofanalysis...  17th  ed. Vírgínia: AOAC, 2000. cap. 49, p. 1-64.BRESSAN, M.; MARTINS, M. C. Segurança alimentar na cadeia produtiva,Juiz  de Fora, Revista de Política Agrícola, Brasília, DF, v. 13, n. 3, p. 27-37,2004.DENNIS, P.; HSIEH, H. Metabolism and transmission of mycotoxins. In:INTERNATIONAL SYMPOSIUM AND WORKSHOP ON MYCOTOXINS,Cairo, 1981. Proceedings... Cairo,1983. p. 151-165.GIMENO, A.; MARTINS, M. L. Micotoxinas y micotoxicosis en animales yhumanos. Buenos Aires: Special Nutrients, Inc., 2003. (Talleres graficos delSRL, Buenos Aires , Argentina). p. 1-160.HESSELTINE, C. W. Conditions leading to mycotoxin contamination of foodsfeeds. In: RODRICKS, J.V. (Ed.) Mycotoxins other fungal related foodproblems. Washington, DC: American Chemical Society, 1976. p. 1-22.KUIPER-GOODMAN, T. Prevention of human mycotoxicoses trough riskassesment risk management. In: MILLER, J.D.; TRENHOLM, H. L.  (Eds.).Mycotoxins in grain, compouns other than aflatoxin. St.Paul, Minnesota:Eagan Press,1994. p. 439 - 469.LEGISLAÇÃO sobre micotoxinas. Disponível em: <http: //www.micotoxinas.com.br/legisla.html>. Acesso em:  10 out. 2005.MYCOTOXINS: risks in plant, animal, and human systems. Ames: Councilfor Agricultural Science and Technology,  2003. 199 p. (Série  Task ForceReport,139).OLIVEIRA, C. A. F.; GERMANO, P. M. L. Aflatoxina M1 em leite ederivados. In: GERMANO, M. L.;  GERMANO, M. J. S. Higiene e vigilânciasanitária de alimentos. Ed. São Paulo: Livraria Varela, 2001. p. 99 - 102.17Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde PúblicaBulgária- AFM1: Produtos de leite fluido = 0,5 µg/kg; Leite em pó = 0,1 ppb; Leite   em pó para dietas e alimentos infantis = 0 µg/kgRepública Tcheca- Leite: M1 = 0,5 µg/kg- Alimentos infantis na base de leite: M1 = 0,1 ppb; B1 = 0,1;  B2,G1,G2 = 0,2 µg/kgRomênia- Leite e laticínios: M1 = 0 µg/kgSuiça- Leite e produtos: M1 = 0,05 µg/kg- Soro de leite e produtos: M1 = 0,025 µg/kgChina- Leite fluido e produtos lácteos (calculados na base de leite fluido):  B1 = 0,5 µg/kgChipre- Leite e laticínios: todas micotoxinas: 0,5 µg/kgEgito- Leite e laticínios: G1, G2, M1, M2 = ) µg/kgNigéria- Leite fluido: M1 = 1 µg/kgApresentaçãoNos últimos 25 anos, a produção brasileira de leite aumentou 119%,passando de 10,2 bilhões de litros em 1979 para 22,3 bilhões em 2003.Para o ano de 2005 a expectativa é de que se confirme uma produção de22,9 bilhões de litros de leite.Considerando a importância do leite para a economia, para a dieta humana eas exigências de qualidade dos consumidores faz-se necessário a produçãode publicações que contemplem informações quanto a contaminação desteproduto por substâncias e/ou resíduos químicos, sobre tudo as ocasionadaspor metabólitos fúngicos, com foco na melhoria da qualidade, segurança einocuidade do leite.Amauri RosenthalChefe Geral da Embrapa Agroindústria de Alimentos16 Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde PúblicaInternacionalMercosulLegislação comum a todos integrantes- Leite fluido: AFM1 = 0,5 µg/L (ppb)- Leite em pó: AFM1 = 5,0 µg/kg (ppb)Argentina- Leite fluído e em pó: M1 = 0,05 µg/kgUruguai- Leite e produtos lácteos: Aflatoxina M1 = 0,5 µg/kgBarbados- Leite fluído: M1 = 0,05 µg/kgHonduras- Leite e laticínios: M1 = 0,05 µg/kgUnião Européia- Legislação comum para todos os membros:- Leite in natura ou destinado para elaboração de produtos à base de leite, eleite tratado termicamente: Aflatoxina M1= 0,05 ng/LAlemanha- Leite: M1 = 0,05 µg/kgFrança- Leite, leite em pó (calculado no produto reconstituído):  Aflatoxina M1 = 0,05 µg/kg- Leite, leite em pó, (crianças menores que 3 anos): M1 = 0,03 µg/kg15Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde PúblicaProcedimento de detecção e quantificaçãoO procedimento mais utilizado é a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência(CLAE), com ou sem derivação pós-coluna, detector de fluorescência, os kitsde Elisa, fluorimetria e Cromatografia de Camada Delgada (CCD) ou aCromatografia de Camada Delgada de Alta Eficiência (CCDAE).Especificamente na CLAE a coluna cromatográfica mais utilizada é a C18. Osvolumes de injeções mais freqüentemente  utilizados estão entre 50 e150 µL, e a temperatura da coluna varia de ambiente à 50ºC. Oscomponentes das fases móveis mais utilizados são os solventes: acetonitrila,metanol, água. No caso da derivação pré-coluna o reagente utilizado é oÁcido Trifluoracético (TFA), e na pós-coluna o reagente perbrometode di-bromo pirimidina (C5H6Br3N)  e a razão de fluxo fica entre 0,25 a 0,75mL/min. Nas metodologias que não realizam a derivação, a razão de fluxovaria de 0,25 até 1,75 mL/min. Os tipos de detectores são os defluorescência, Ms, MS-Ms e UV (Association..., 2000).LegislaçãoA legislação para as micotoxinas, inclusive a AFM1 é muito controvertida,entretanto existe uma perspectiva de uma maior uniformização ao longo dospróximos anos em função das recomendações do Codex Alimentarius,principalmente,  dos países signatários da Organização Mundial do Comércio.Existindo, porém,   diferenças significativas na regulamentação demicotoxinas a nível nacional e internacional ( Legislação..., s.d.).BrasileiraMinistério da Saúde: Resolução RDC no 274, da ANVISA, de 15 de outubrode 2002, publicada no Diário Oficial da União, de 16/10/2002:- Leite fluido: Aflatoxina M1 = 0,5 µg/L (ppb)- Leite em pó: Aflatoxina M1 = 5,0 µg/L (ppb)SumárioIntrodução .................................................................................   9As Aflatoxinas ..........................................................................  9A Aflatoxina M1 (AFM1) ..........................................................  10Mecanismos de Contaminação do Leite por AFM1 ...............  11Principais Efeitos Tóxicos .......................................................  11Relação de AFB1 ingerida e a concentração de AFM1,excretada no leite....................................................................  12Prevenção ................................................................................  12Métodos de detecção e qualificação de Aflatoxina M1 emleite e derivados ......................................................................  13Legislação ................................................................................  15Referências Bibliográficas ........................................................  1814 Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde PúblicaMétodos de detecção equantificação de Aflatoxina M1 emleite e derivados Os métodos existentes para determinação de aflatoxina M1 baseiam-se emalguma medida física ou característica química da mesma. A vantagem eutilidade do método analítico são diferenciadas pelas características práticascomo aplicabilidade, o custo, a eficiência, o tempo requerido, o equipamentoe o nível de treinamento necessário. A confiança é determinada pelascaracterísticas científicas tais como precisão, exatidão, sensibilidade eespecificidade. De um modo geral os métodos de análise de resíduos contêmcinco etapas básicas. A primeira é a amostragem, a segunda é a extraçãoou diluição, a terceira o clean-up ou limpeza do extrato, a quartaconcentração e a quinta detecção ou quantificação.A extraçãoOs solventes de extração mais utilizados nas metodologias disponíveis naliteratura para análise de aflatoxina M1 em leite em pó e fluído são: água,acetonitrila, metanol, além de clorofórmio, diclorometano, acetato de etila,hexano, solução de cloreto de sódio, NaOH, tampão fosfato, dentre outros.Procedimento de extraçãoOs tratamentos mais utilizados no leite fluído e leite em pó são: blender ehomogeneização com solvente, centrifugação, agitação mecânica comsolvente, adição de  NaCl, dentre outros Existem metodologias que utilizamtambém ultrasom, ultra turrax e extração com água quente ou gelada para aanálise de micotoxinas em leite em pó.Procedimento de limpeza ou clean-upOs mais utilizados são as colunas de imunoafinidades, e os clean-up químicosmais utilizados são os cartuchos de sílica tipo Sep-PaK ou SPE.13Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde PúblicaPrevençãoA melhor forma de prevenção contra a contaminação por AFM1 consiste emnão administrar aos animais rações contaminadas por AFB1. Os métodos deseleção dos grãos de cereais e posterior separação mecânica da casca e dopó, do resto do cereal, são adequados para minimizara contaminação, umavez que normalmente  a maior concentração de micotoxinas se verifica nopericarpo do grão e no pó do cereal. Estes procedimentos podem serutilizados tanto nos alimentos para animais como para seres humanos.Portanto, é fundamental a aquisição de milho e rações de boa procedência,bem como dispensar os devidos cuidados na armazenagem destes produtos,tais como : controle da temperatura, da umidade, e de pragas.Os tratamentos térmicos aplicados para o controle de aflatoxinas, a umamatéria-prima ou a um alimento composto, não são muito eficazes, uma vezque a AFB1 é resistente a altas temperaturas, cerca de 120ºC. Apesar de,em alguns tipos de processamento onde a temperatura utilizada ser superiora 120ºC, o tempo de permanência nessa temperatura é insuficiente parauma redução significativa do teor de AFB1.As rações destinadas a alimentação de animais poligástricos e,consequentemente, para vacas leiteiras normalmente contém matérias-primas secas (12-13% de umidade ou água livre), como também, forragenscom um teor de umidade ou de água livre muito elevado, na ordem dos 70 a85%. Estes  valores que podem dar origem a atividades de água (Aa) muitoelevadas de cerca de 0,85-0,98 em temperaturas entre 20 e 25ºC. Estascondições são ideais para o desenvolvimento dos Aspergilli econsequentemente para a síntese de AFB1.A aplicação de normas de higiene, de limpeza, bem como de fumigaçãocontra insetos, roedores, bactérias e fungos nas fábricas de alimentos e derações  devem ser observadas. É aconselhável, sempre que possível,  oarmazenamento das matérias primas  com teores de umidade situados entre8 e-11,5% no caso das oleaginosas, ou entre 12-13% para amiláceas comoé o caso dos cereais, proporcionando  atividades de água (aA) da ordem de0,65-0,70 a 25-30ºC.  Desse modo pode-se minimizar o desenvolvimento defungos e a conseqüente produção de micotoxinas (Gimeno & Martins,2003).                         IntroduçãoAflatoxina M1 em Leite: UmRisco para a Saúde PúblicaAntônio Xavier de FariasOtniel Freitas-SilvaMaria Heloísa de MoraesMaria de Lourdes M. de SouzaAndré Pires MontelloO leite  está entre os  produtos alimentícios que apresentarão maiorcrescimento de produção e de consumo nos próximos anos. Entretanto, oleite é altamente susceptível a contaminações microbianas que o tornafacilmente deteriorável,  podendo ser um veículo de toxi-infecção alimentar.Existe, ainda  a   contaminação ocasionado  por  substâncias  e/ou resíduosquímicos entre os quais a aflatoxina M1 (AFM1). Este composto,potencialmente  hepatocarcinogênico, é sintetizado a partir  dabiotransformação de aflatoxina B1, um metabólito secundário, produzido poralgumas espécies fúngicas pertencentes ao gênero Aspergillus,  que sedesenvolvem  principalmente  em grãos,  cereais e rações. Estas matérias-primas são cada vez mais são utilizados na complementação da alimentaçãode bovinos, a medida que se busca maior produtividade, e pela insuficiênciade pasto,  e quando a silagem, não são suficientes para alimentação derebanhos de alta produtividade. A presença de AFM1 no leite, destinado aoconsumo humano, é altamente preocupante para a segurança alimentar(Bressan & Martins, 2004), considerando-se que grande parte deste produtoé destinado a alimentação infantil.As AflatoxinasSão substâncias tóxicas, essencialmente produzidas por espécies deAspergillus flavus e A. parasiticus. Embora estes microrganismosdesenvolvam-se  a  temperatura média de 30º C, a síntese de micotoxinassitua-se na faixa  entre  10 - 12º C. A atividade de água (Aa) mínimanecessária para o início do desenvolvimento e conseqüente produção destas12 Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde PúblicaPrincipais Efeitos TóxicosO potencial carcinogênico da AFM1 é significativamente inferior ao da AFB1,como tal, a AFM1 e a AFB1 possuem uma TD50 (teor de micotoxina passívelde desenvolver tumores malignos em 50% dos indivíduos) de 10,38 e 1,15microgramas/kg p.c. (peso corporal) / dia, respectivamente, o que pressupõeque a AFM1 é cerca de nove vezes menos carcinogênica que a AFB1. Osfatores que influenciam a toxicidade da AFM1 em seres humanos, sãosimilares aos mesmos que influenciam a toxicidade das micotoxinas, de umamaneira geral (Kuiper-Goodman, 1994), tais como:a) a biodisponibilidade das micotoxinas;b) os sinergismos que ocorrem entre elas;c) o teor de micotoxinas ingerido diariamente em função da concentração desubstâncias e da quantidade dos alimentos ingeridos;d)  a continuidade ou intermitência da ingestão do alimento contaminado;e) o peso do indivíduo, respectivo estado de saúde e condição fisiológica;f) a idade do indivíduo, as crianças e os jovens são mais sensíveis àtoxicidade das micotoxinas devido à maior variabilidade do metabolismobasal e que eventualmente não possuem todos mecanismos bioquímicossuficientes para a destoxificação.Relação de AFB1 ingerida e aconcentração de AFM1 excretada noleiteEm  vacas leiteiras, a relação entre a concentração de AFB1 na ração e a daAFM1 produzida é muito variável, podendo oscilar  entre 34:1 a 1600:1.Esta variação  pode ocorrer de um animal para outro, bem como, de umalactação para outra.10 Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde Públicamicotoxinas situa-se entre 0,75 e de 0,83, respectivamente. Os Aspergillicrescem e podem  produzir micotoxinas a 25º C, com uma atividade de águade 0,95. No entanto, existem algumas espécies de Aspergillus flavus quepodem produzir aflatoxinas em condições mais extremas em arroz,  comprodução entre 6 e 45º C, tendo um comportamento ótimo a 37º C,ocorrendo a produção de micotoxinas entre 11 e 36º C, com um nívelmáximo de produção a 30ºC (Hesseltine, 1976; Mycotoxins, 2003).Atualmente, conhecem-se 18 tipos de aflatoxinas,  entre as quais a maistóxica é  a aflatoxina B1 (AFB1).A  Aflatoxina  M1 (AFM1)A aflatoxina M1 (AFM1)  é um derivado 4-monohidroxilado (Fig. 1)proveniente de um complexo processo de  biotransformação da aflatoxina B1no organismo de alguns animais. Assumindo importância  destacada,considerando-se que pode ser excretada  no leite e na urina (Oliveira &Gemano, 2001).Fig. 1. A aflatoxina M1 (AFM1)11Aflatoxina M1 em Leite: Um Risco para a Saúde PúblicaFig. 2. Metabolismo de Aflatoxina B1 no fígado de avesMecanismo de Contaminação doLeite  por AFM1A contaminação do leite por Aflatoxina M1  se da a partir da ingestão deração ministrada ao gado  contaminada por Aflatoxina B1, sendo absorvidavia trato gastrointestinal, passando ao sistema sangüineo e transportadapara o fígado onde se processa a sua metabolização. Uma parte destaaflatoxina é ativada e fixada nos tecidos hepáticos. Outros metabólitosconjugados da AFB1 hidrossolúveis são excretados via bílis, através dasfezes. Outras formas conjugadas hidrossolúveis, produtos de degradação daAFB1 e respectivos metabólitos não conjugados são excretados no sistemacirculatório sangüíneo distribuindo-se por via sistêmica e transferindo-separa o leite, ovos, músculos e demais tecidos comestíveis (Dennis & Hsieh,1981) (Fig. 2).A AFM1 é um desses derivados metabólicos que passa para o leite,contaminando-o. A partir da AFB1 poderão se formar outros metabólitos. Namaioria  das vezes o organismo animal produz  estes metabólicos como umsistema de auto-destoxificação. A reação que se produz a partir damicotoxina original não é, necessariamente  completa, nem irreversível.

Aflatoxina M1 em leite: um risco para a saúde pública.

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Aflatoxina M1 em leite: um risco para a saúde pública.

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