O presente trabalho teve como objetivo a avaliação preliminar da variabilidade fenotípica presente nessas aves e a seleção de marcadores moleculares, microssatélites ancorados (ISSR), para análise da variabilidade genética...bitstream/item/80683/1/circular-46.PD

BARBOSA, F. J. V.

BRITTO, F. B.

CLEMENTINO, C. de S.

DINIZ, F. M.

LIMA, P. S. da C.

MARTINS, D. M.

O presente trabalho teve como objetivo a avaliação preliminar da variabilidade fenotípica presente nessas aves e a seleção de marcadores moleculares, microssatélites ancorados (ISSR), para análise da variabilidade genética..

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Teresina, PINovembro, 200846ISSN 0104-7633Variabilidade Fenotípica e Genotípica emGalinhas Caipiras (Gallus gallus domesticus):Resultados PreliminaresIntroduçãoA galinha doméstica teve origem e se desenvolveu em um habitat de florestas debambu no Sudeste Asiático a partir do gênero Gallus gallus (G. g. domesticus),evidência monofilética confirmada por análise molecular do DNA mitocondrial(FUMIHITO et al., 1994, 1996). Em pouco tempo, elas se difundiram pelo mundo,sendo introduzidas no Brasil na época do descobrimento. Em razão de sua fácildomesticação e de programas de melhoramento genético, tornaram-se uma das maisimportantes fontes econômicas na agropecuária (HELLMEISTER FILHO et al., 2003).Se, por um lado, os avanços tecnológicos no campo da nutrição, genética, reprodução,sanidade e ambiência de linhagens modernas de galinhas promoveram o alcance dealtos índices de produtividade no sistema de produção industrial, por outro, a ausênciade práticas de manejo apropriadas às galinhas naturalizadas, que são predominantesna agricultura familiar (RAMOS et al., 2001), prejudica a viabilidade econômica de suaexploração.Nesses 500 anos, surgiram nas aves caipiras, a partir de vários ramos genealógicos,diferentes fenótipos em termo de plumagem, porte, hábitos, aptidão e coloração dosovos. Porém, não se tem ainda a certeza de evidências que confirmem a correlaçãodas variações morfológicas às características de interesse econômico. Essas aves seadaptaram ao clima, ficaram mais resistentes a algumas doenças e se alimentamprincipalmente de produtos fibrosos, conferindo-lhes características peculiares à carnee aos ovos. O estudo dos caracteres fenotípicos e genotípicos permitiria a obtenção dedados precisos sobre a variabilidade presente nesses indivíduos (NISHIBORI et al.,2005).O presente trabalho teve como objetivos a avaliação preliminar da variabilidadefenotípica presente nessas aves e a seleção de marcadores moleculares,microssatélites ancorados (ISSR), para análise da variabilidade genética. Essemarcador vem sendo empregado em diversos estudos filogenéticos de populaçõesnaturais (HANG; BURTON; BOCKELMAN, 2006; LUQUE et al., 2002; PANARARI,2006; PHARMAWATI; YAN; FINNEGAN, 2005), destacando-se pelo seu elevado graude polimorfismo, alta reprodutibilidade e baixo custo, o que poderá corroborar esteestudo.AutoresCíntia de Souza ClementinoDepartamento de Biologia,CCN-UFPIDenise Mendes MartinsDepartamento de Biologia,CCN-UFPIPedro Rodrigues de Araújo NetoDepartamento de Biologia,CCN-UFPIFábio Barros BrittoDepartamento de Biologia,CCN-UFPIFirmino José Vieira BarbosaZootecnista,  Professor daUESPI,   Teresina, PI.Paulo Sarmanho da Costa LimaEngenheiro agrônomo,Pesquisador da EmbrapaMeio-Norte, Teresina, PI. Fábio Mendonça DinizEngenheiro de pesca,Pesquisador da EmbrapaMeio-Norte, Teresina, PI.2 Variabilidade Fenotípica e Genotípica em Galinhas Caipiras (Gallus gallus domesticus): Resultados PreliminaresMetodologiaAnálise fenotípicaAnalisaram-se 300 aves quanto a sua plumagem e620 ovos, ambos provenientes de indivíduosreproduzidos no aviário-modelo da Embrapa Meio-Norte, durante o período de agosto de 2007 a janeirode 2008. Os ovos, inicialmente, foram submetidos àassepsia e identificados numericamente, observando-se a data de coleta. A classificação foi realizada pormeio da pesagem, da mensuração dos parâmetrosmorfométricos e da coloração da casca. Os ovosviáveis foram selecionados pelo processo deovoscopia e, em seguida, incubados artificialmente àtemperatura de 37,7 °C e umidade de 65 % durante21 dias.Coleta e Extração de DNANa análise molecular, as amostras de DNA foramcoletadas a partir de penas e pele de galinha caipirareproduzidas no campo experimental da EmbrapaMeio-Norte, em Teresina, Piauí. Em seguida, asamostras foram armazenadas em sacos plásticos eacondicionadas em recipientes de 1,5 mL contendoetanol 100 %, a -20 °C, para conservação domaterial. A extração foi realizada utilizando-se oprotocolo de fenol-clorofórmio-álcool isoamílico eprecipitação em etanol (SAMBROOK; FRITSCH;MANIATIS, 1989). A amplificação do DNA, utilizando-se a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction), foivisualizada por eletroforese em gel de agarose a 2 %.Análise de ISSRForam analisados 63 primers de ISSR, sintetizadospela University of British Columbia, no Canadá, numvolume final de reação de PCR de 20  L, com osseguintes parâmetros: tampão 1,0   L [20 mM TrisHCl, pH 8,0; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 % (v/v)glicerol], 2,0 mM MgCl2, 800 mM dNTP, 0,4 pMol deprimer, 1 U de Taq DNA polimerase e 1  L da amostrade DNA (~100 ng). Os programas específicos dasPCRs foram estabelecidos de acordo com asrespectivas temperaturas de anelamento dos primers.As reações de amplificação foram realizadas emtermociclador Techne Genius ou GeneAmp 2400Thermal Cycler PCR (Perkin-Elmer), com uma faseinicial de desnaturação a 94 °C por 1,5 minutos,seguida de 42 ciclos nas seguintes condições: 40segundos para desnaturação a 94 ºC; 1 minuto paraanelamento (Ta), com a temperatura ajustada deacordo com cada primer; 2 minutos para extensão a72 ºC. A extensão final foi realizada a 72 ºC por 5minutos. Após as reações, as amostras foramsubmetidas à eletroforese em gel de agarose 2 %, a100 V. As bandas produzidas foram fotografadas eposteriormente analisadas para verificação depolimorfismo e tamanho do amplicon (fragmento deDNA gerado por PCR).Resultados e DiscussãoNas análises fenotípicas, foram obtidos ovos em tonsde marrom, branco e azul, e uma variação no peso(Fig.1 e 2). Quanto à plumagem, a ocorrência de muitosindivíduos híbridos, decorrente de um cruzamentoaleatório, apresentando duas ou mais cores,demonstrou a grande variação quanto a esse caráter.Assim, não foi possível realizar a classificação porcores individuais.No estudo molecular, houve amplificação de dez dosprimers testados (UBC-822, UBC-840, UBC-845, UBC-849, UBC-854, UBC-856, UBC-881, UBC-886, UBC-895, UBC-899), sendo obtido um padrão de bandasmultialélicas e polimórficas (Fig. 3). O comprimentodos fragmentos obtidos variou de 350 a 2.036 paresde bases. Os resultados mostraram uma média deaproximadamente sete bandas amplificadas por primer,sendo encontradas bandas polimórficas nos diferentesgenótipos, como mostra a Tabela 1. Esse polimorfismo,detectado pelo ISSR no DNA de galinhas caipiras, podeinferir a variabilidade genética presente nessesindivíduos (BORNET; BRANCHARD, 2001). Osresultados aqui encontrados mostram-se dentro de umlimite satisfatório para o estudo sobre a variabilidadegenética, quando comparados com outros trabalhos emanimais (ABBOT, 2001; BORBA et al., 2005;MALTAGLIATI et al., 2006) e em algumas plantas(AJIBADE; WEEDEN; CHITE, 2000; HAO et al., 2006;NARAYANAN ET AL., 2006; PHARMAWATI;PATRICK, 2005;), que mostram um padrão deamplificação e polimorfismo semelhante.É importante mencionar que o estudo fenotípico aliadoàs análises moleculares permite uma seleção mais3Variabilidade Fenotípica e Genotípica em Galinhas Caipiras (Gallus gallus domesticus): Resultados Preliminaresadequada de caracteres desejados, como tolerância aaltas temperaturas e resistência a doenças (DEKKERS;HOSPITAL, 2002; RIEGER; CAMPOS; SANTOS,2006), características presentes nas galinhas caipiras,que provavelmente são decorrentes do cruzamentoentre várias raças e da adaptabilidade às condiçõesimpostas pelo meio ambiente, e que ainda podemservir de matéria-prima para um futuro trabalho demelhoramento genético. Entretanto, a seleção decaracteres de interesse pode diminuir essa riqueza emdiversidade genética, sendo prejudicial em algunscasos, como a adaptação a determinado meio e a fugaao predador (RODRIGUES; QUEIROZ; DUARTE, 2006).Assim, é importante melhorar geneticamente asgalinhas caipiras, porém, preservando ascaracterísticas peculiares que originaram essadenominação.Fig. 1. Distribuição dos ovos de galinhas caipiras porcoloração da casca.Fig. 2. Peso médio dos ovos de galinhas caipirasreproduzidas na Embrapa Meio-Norte.Fig. 3. Padrão de amplifica-ção de bandas mostrado pelatécnica de ISSR, utilizando-se dois primers.Tabela 1. Padrão dos fragmentosamplificados pelos dez marcadoresISSR testados.Primer Variação no comprimento dos fragmentos (em pb) Número de bandas Banda polimórfica UBC 822 2036 - 800 8 5 UBC 840 1300 - 900 7 4 UBC 845 2036 - 1100 5 1 UBC 849 800 - 506 8 2 UBC 854 2036 - 1200 6 2 UBC 856 2036 - 800 8 4 UBC 881 2036 - 900 4 3 UBC 886 1636 - 700 8 1 UBC 895 2036 - 1018 4 1 UBC 899 1636 - 350 7 4 Total   65 27 Média   6,5 2,7 4 Variabilidade Fenotípica e Genotípica em Galinhas Caipiras (Gallus gallus domesticus): Resultados PreliminaresConclusãoTanto os dados fenotípicos quanto o polimorfismoencontrado entre os marcadores moleculares ISSRselecionados indicaram o alto nível de variabilidadegenética. A seleção dessas características por meiode análises moleculares poderá auxiliar no isolamentode características de interesse.ReferênciasABBOT, P. Individual and population variation in invertebratesrevealed by Inter-simple Sequence Repeats (ISSRs). 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New York: Cold SpringHarbor Laboratory Press, 1989. v. 1.Comitê dePublicaçõesExpedienteCircularTécnica, 46Presidente: Flávio Flavaro Blanco,Secretária Executiva: Luísa Maria Resende GonçalvesMembros: Paulo Sarmanho da Costa Lima, FábioMendonça Diniz, Cristina Arzabe, Eugênio Celso EméritoAraújo, Danielle Maria Machado Ribeiro Azevêdo, CarlosAntônio Ferreira de Sousa, José Almeida Pereira e MariaTeresa do Rêgo LopesSupervisão editorial: Lígia Maria Rolim BandeiraRevisão de texto: Francisco de Assis David da SilvaEditoração eletrônica: Jorimá Marques FerreiraExemplares desta edição podem ser adquiridos na:Embrapa Meio-NorteEndereço: Av. Duque de Caxias, 5.650, BairroBuenos Aires, Caixa Postal 01, CEP 64006-220,Teresina, PI.Fone: (86) 3089-9100Fax:   (86) 3089-9130E-mail: sac@cpamn.embrapa.br1a edição1a impressão (2008): 120 exemplaresMINISTÉRIO DA AGRICULTURA,PECUÁRIA E ABASTECIMENTO

Variabilidade fenotípica e genotípica em galinhas caipiras (Gallus gallus domesticus): resultados preliminares.

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