ALMEIDA, A. M. R.

BENATO, L. C.

SANTOS, P. J. C.

SOUZA, N. V. de

VIEIRA, N. D.

Infoteca-e

Utilização de Pseudomonas fluorescens no controle biológico de Macrophomina phaseolinaSANTOS, P.J.C.1; BENATO, L.C.2; SOUZA, N.V.²; VIEIRA, N.D.2; ALMEIDA, A.M.R.2 1Universidade Estadual do Norte do Paraná – UENP, PR; 2Embrapa Soja, Caixa Postal, 231, 86001-970, Londrina, Paraná.e-mail: amra@cnpso.embrapa.brIntroduçãoA maioria dos solos cultiváveis do mundo tem sido utilizado continuamente, por décadas, com deposição de resíduos e agora mostram pobreza em diversidade biológica, na perda gradual da produtividade. Com esses agravantes a preservação e a conservação do ambiente têm sido cada vez mais importantes nas áreas agricultáveis. Como resultado, o setor produtivo tem buscado tecnologias para a implantação de sistemas de produção agrícola com melhores enfoques ecológicos, rentáveis e socialmente justos.Fungos fitopatogênicos habitantes do solo, como Macrophomina phaseolina, são de difícil controle, principalmente por formarem estruturas de resistência, os microescleródios. O controle químico não tem sido efetivo, nem economicamente viável e, em vista dos problemas ambientais a rotação de culturas e o controle biológico são as melhores opções.Pseudomonas fluorescens é um dos mais efetivos antagonistas selecionados no solo, para supressão de doenças. Pseudomonas do solo produzem pigmentos verde-amarelados, fluorescentes, sendo fácil a observação em meio King-B, além de produzirem o 2,4-diacetilfloroglucinol, metabólito sintetizado por algumas colônias, muito importante para o controle biológico.Este trabalho objetivou verificar se as colônias de Pseudomonas possuem a real capacidade de inibir o fungo causador da podridão de carvão, Macrophomina phaseolina.Material e MétodosTrinta e três isolados (Tabela1) de P. fluorescens foram obtidos de diversas culturas, coletadas em diferentes regiões do Brasil. Esses isolados foram cultivados em meio King-B e colocadas em estufa a 27°C por 48h. Após a incubação as placas de petri foram submetidas a luz ultravioleta (366 nm) para confirmar a fluorescência das colônias.   Para a análise do gene phld foi realizada extração de DNA pelo protocolo de CLERC et al. (1988). Em seguida foi feita a reação em cadeia polimerase (PCR) com os primers B2BF (forward) e BPR2 (reverse) para amplificação de parte do gene phld com 629 pares de base (pb). Os produtos da amplificação foram separados em gel agarose 1,3%, corados com brometo de etídio. Os 33 isolados foram testados contra o fungo M. phaseolina, tanto em meio TSB como BDA (batata dextrose agar), em cada placa um fragmento, de meio mais fungo, com 7mm de diâmetro  131V Jornada Acadêmica da Embrapa Sojafoi depositado no centro das placas contendo os meios já citados e após 48h a suspensão de bactéria foi depositada nas placas formando um halo em torno da colônia fúngica, a 4cm da mesma. A inibição de crescimento do fungo foi avaliado após 7 dias.Tabela 1 - Identificação dos isoladosIdentificação Local de coleta Cultura Phld Inibição PG34 Ponta Grossa Trigo - + PG40 Ponta Grossa Aveia - + PG41 Ponta Grossa Aveia - + PG43 Ponta Grossa Aveia - - PG44 Ponta Grossa Aveia - - PG51 Ponta Grossa Aveia - - PG45 Ponta Grossa Aveia - + PG59 Ponta Grossa Aveia - - PG67 Ponta Grossa Aveia - + PG68 Ponta Grossa Aveia - + PG69 Ponta Grossa Aveia - - PG70 Ponta Grossa Aveia - + PG71 Ponta Grossa Aveia - + PG73 Ponta Grossa Trigo - + PG75 Ponta Grossa Trigo - + PG76 Ponta Grossa Aveia - + GP.01 Londrina Girassol - - GP.06 Londrina Girassol - + GP.02 Londrina Girassol - - GN.05 Londrina Girassol - - AV.P.01 Londrina Aveia - + AV.N.02 Londrina Aveia - - AV.N.05 Londrina Aveia - - MP.02 Londrina Milho - + MN.05 Londrina Milho - + SP.01 Londrina Soja - + SN.01 Londrina Soja + + NP.01 Londrina Nabo - + NP.03 Londrina Nabo - + NN.03 Londrina Nabo - - TP.02 Londrina Tremoço - - 9.N2.5 USA ---- + - GN221P USA ---- + - Resultados e DiscussãoDos 33 isolados selecionados apenas três foram positivos para o gene phld: SN.01, 9.N2.5 e GN221P.Dezenove isolados foram capazes de inibir M. phaseolina em ambos os meios. A maior eficiência foi do isolado PG45 que chegou a inibir em 54,2% o crescimento de Macrophomina phaseolina em meio BDA. (Fig 2 e 3)Pseudomonas fluorescens possuem a capacidade de produção de diversos antibióticos e não só o 2,4-DAPG.132 Embrapa Soja. Documentos, 323Figura 2 P. fluorescens inibindo Macrophomina,em comparação com a testemunha à direita.012345671 2Diâmetro da colônia (cm)Figura 3 Inibição apresentada pelo isolado PG45 em meio TSB e BDA.ConclusõesPseudomonas fluorescens, inibiu o desenvolvimento de Macrophomina phaseolina, mostrando potencial para o uso no controle biológico desse fungo. P. fluorescens deve ser testada contra outros fitopatógenos. Referências ABAWI, G. S.; WIDMER, T. L. Impact of soil health management practices on soilborne pathogens, nematodes and root diseases of vegetable crops. Applied Soil Ecology, v. 15, n.1, p. 37-47, 2000.AMORIN, L. Sobrevivência do inóculo. In: BERGAMIN FILHO, A.; KIMATI, H.; AMORIN, L. (Ed.). Manual de fitopatologia. 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Utilização de Pseudomonas fluorescens no controle biológico de Macrophomina phaseolina.

http://www.infoteca.cnptia.embrapa.br/infoteca/bitstream/doc/859382/1/ID30984.pdf

Utilização de Pseudomanas fluorescens no controle biológico de Macrophomina phaseolina.

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