CARVALHO, J. E. U. de

FIGUEIREDO, F. J. C.

MULLER, C. H.

REIS, G. G. dos

Infoteca-e

06499 CAPTU 1979 -- TTTI1 5* BRASILEIRA DE PESQUISA AGROPECUARIA ia Ministério di Agricultura de Ps.quS Agrop.cukle do trôpico úmido 1) 	 ilí)..flU 	 1 .IÜN 	 1 U7U Travessa Or. Enéas Pinheiro sln Caixa Postal N.° 48- 66.000— Belém-Pa cornun'cocio tecn co CALIBRAÇT0 DO TESTE DE TETRAZOLIO EM SE-MENTES DE CASTANHA-DO-BRASIL GERALDO GONÇALVES Dos REIS JOSE EDMAR URANO DE CARVALHO CARLOS HANS MULLER FRANCISCO JOSE CJIMARA FIGUEIREDO Calibraçào do teste de 1979 	 FL-06499 IIII DI DII DIII DII 	 DIII 	 ]I 31133-1 E MB RAPA CENTRO DE PESQUISA AGROPECUgRIA DO TRUPICO UMIDO COMUNICADO TCCNICO N9 17 CALIBRAÇ7ÇO DO TESTE DE tETRAZOLIO EM SE-MENTES DE CASTANHA-DO-BRASIL GERALDO GONÇALVES DOS REIS EngQ Florest, M.S. em Fisiologia Vegetal, Pesquisador do CPATU JOSE EDMAR URANO DE CARVALHO EngQ AgrQ, Pesquisador do CPATU CARLOS HANS MÜLLER 'ËngO AgrÇ, M.S. emFitotednia, Pesquisador do tPATU FRANCISCO JOSE CÂMARA FIGUEIREDO EngÇ AgrO, M.S. em Tecnologia de Sementes, Pesquisador do CPATU • 	• 	 BELEM CPATU janeiro de 1979 ri Reis, GeraÏdo ddiiaives dos Calibração do teste de tetraz6lio em semen tes de castanha-do-Briisi. Belgm,CPATU, 19797 .LQoflmicadP:T&cfliCO, 17). 1. Sementes •-Testes de laborat6rio. 2. Se mentes de castanha-do-Brasil - Testes de labo rat6rio. 3. Teste de tetraz6lio. I. Carvalho Jose Edmar Urano de. II. MUiler, Carlos Hans. III. Figueiredo, Francisco Jose Câmara. IV.S rie. V. Titulo. CDD: 634.57521028 CDU: 634.575:631.53.02.001.41 CALIBRAÇO DO TESTE DE TETRAZaLIO EM SE-MENTES DE CASTANHA-DO-BRASIL 5 UM A RIO p . 	1 — INTRODUÇÇO ............................................. 	.1 	2 — MATERIAL E MrT000S ......... ...................,........ 	 2 3 - RESULTADOS E DISCUSS1O . ....................... .........3 	4 — CONCLUSUES . ............................. s.........s.... 	 4 	5 - ANEXOS ...................... .......... .................. 	 6 5.1 — ASPECTO DE UMA "MEIA SEMENTE" APS O CORTE LONGITUDI-NAL .................. 5.2 — "MEIA SEMENTE"MOSTRANDO A LOCALIZAÇ1O DO EMBRIJtO 	 DA 	SEMENTE DE CASTANHA-DO-BRASIL ....................... 	 6 6 — FONTES CONSULTADAS .................................... 	 7 CALIBRAÇAO DO TESTE DE TETRAZOLIO EMSE- MENTES DE CASTANHA-DO-BRASIL RESUMO: Sementes de castanha-do-Brasil com dez meses de colhidas e armazenadas em sa cos de aniagem foram cortadas longitudinaT mente e submetidas a diferentes tempos de exposição em solução de tetrazolio a 0,5% apos embebição em 5gua destilada (20 1w ras) ou em solução aquosa de fungicida mor pacine (princrpio ativo "acetato de fenil mercürio") a 1%. A 5rea não diferenciada do embrião apresentou perfeito contraste de coloração vermelho intenso no interval2 de 10_a 20 minutos na solução de tetrazolio aros embebição em 5gua destilada. A aubebi çao de sementes em solução aquosa do fungi cida prejudicou a grea de diferenciação do embriao. O uso adequado de tetraz6lio pres ta-se para a avaliação de viabilidade de senentes de castanha-do-Brasil e possibili ta a localização e o acompanhamento do de senvolvimento do embrião durante a germina ção, que o torna importante na explicação do mecanismo controlador da germinaçao das sementes. 1 - INTR0DUÇ1O O processo germinativo das sementes de castanha-do-Bra sil (Bertholletia excelsa, H.B.K.) (v.6-1 e 6-21) g lento e irregu lar, assim como a percentagem de germinação dessas sementes 6 bai xa, sugerindo, dentre outros fatores, a possibilidade de deteriora ção antes do semeio, possivelmente em decorrência das excessivas intermediações ap5s a coleta (v.6-2) como também, ap6s semeadas, devido principalmente, ao ataque de fungos. Observações t6m mostrado que sementes de castanha-do--Brasil, armazenadas em sacos de aniagem por mais ou menos 2 anos, em ambiente de labõrat6rio, apresentam odores características de rancidificação e espaços vazios na amêndoa, sendo provArei que es ses ultimos sejam causados pela aparente desidratação dos tecidos, 2. uma vez que o tegumento dessa semente parece não ser barreira efe tiva s trocas hidricas (v.6-19 e 6-22). Os graus desses distiir bios podem ser avaliados atrav5s do teste de tetraz6lio (v.6-7,-9, -lO,-ll,-l4,-lS,-l6,-17,-18). O teste de tetraz6lio, al5m de figurar como 	 indicador da viabilidade de sementes (v.6-3,-4,-5,-6), tamb6m podera 	 ofere cer subsídios para a explicação do mecanismo controlador da germi nação de sementes de castanha-do-Brasil, possibilitando acompanhar o desenvolvimento de embrião durante o processo germinativo, assim como favorecer a sua localização, o que constitui objeto desse es tudo. 2 - MATERIAL E METODOS Foram utilizadas sementes de castanha-do-Brasil, de 10 meses depois de colhidas em castanhais da região de Maraba-Parã e armazenadas em sacos de aniagem em ambiente de laborat6rio. Ensaios preliminares indicaram ser mais apropriado, na interpretação do teste de tetraz6lio nessas sementes, a aplicação de corte longitudinal no sentido dos polos da semente inteira e seca, e a embebição das "meias sementes" (v.Fig.l) do que a embebi ção de sementes inteiras ou descascadas, processando-se o corte por ocasião do tratamento das mesmas. Assim, as sementes foram cortadas longitudinalmente 	 e aS "meias sementes" embebidas em 5gua destiladas por 20 horas.Ap6s esse período de embebição estas foram expostas a uma solução aquo sa de cloreto de 2,3,5- trifenil tetraz6lio a 0,5%, pH 6,0 - 7,0 (ajuste com HC1 ou NaOH concentrado) , e mantidas em banho-maria a 45 °C. Testes preliminares demonstraram que há um tempo 6timo de exposição na solução de tetraz6lio para o desenvolvimento de cor nos tecidos vivos da semente. Visando identificar esse tempo, 	 fo ram submetidas "meias sementes", previanente embebidas em 	 água i s (20 horas), aquela solução de tetraz6lio, nos tempos de exposição de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 e 60 minutos. Tamb&i foi feita uma tentativa de substituir a Sgua destilada por solução aquo sa do fungicida merpacine*  a 1,0%, para a embebição das sementes. 3 - RESULTADOS E DISCUSSAO Os resultados demonstraram que sementes de-lO meses de colhidas, armazenadas em sacos de aniagem e colocadas em condiç6es ambientais de laborat6rio apresentam um alto potencial de viabili dado. Na porção central da superfície cortada da "meia semente" houve o desenvolvimento de unia coloração vermelha intensa que cor responde ao embrião da semente, representada na Figura 2,pela par te escura. Nas sementes de castanha-do-Brasil, o embrião apresen ta-se como um tecido aparentemente não diferenciado (v. Fig. 1) su gerindo que, no decorrer da germinação, esse venha a sofrer modi ficações morfo16gicas, projetando-se para a região dos polos germi nativos onde h5 eclosão do caulículo e da radícula. É possível que esta condição amorfa e não diferenciada do embrião justifique, em parte, a tardia germinação dessas sementes. Foi observado que o tempo de exposição das "meias semen tes" em solução de tetraz6lio a 0,5% a 45 °C, para a obtenção de um perfeito gradiente de cor entre as partes vivas e as outras, esta entre 10 e 20 minutos. No entanto a prolongada exposição a solução de tetrazdlio elimina totalmente o gradiente de cor. A embebição das "meias sementes" em solução de merpaci ne a 1,0% mudou o padrão de cor observado anteriormente, desapare cendo o vermelho das regiões vivas da semente, prejudicando a dife renciação da £rea do embrião. * 5,1% em "acetato de fenil nercrio" 4. Esse efeito do fungicida pode ser explicado pela pronto ção de um efeito letal, quando em contato com as partes vivas da semente ou pela neutralização do poder redutor do sal de 	 tetraz6 lio da solução. Baseardo-se em dados não publicados de MULLER FREIRE (v.6-20), onde foi observada destacada eficiência desse fun gicida, em comparação com uma s6rie de outros, na conservação de am6ndoas desta espcie, durante a germinação cm areia, 6 posstvel descartar a primeira hip6tese. É provhel, entretanto, que 	 este fungicida contenha ingrediente(s) de alto poder oxidante, inativan do o efeito do tetraz6lio sobre a semente. 4 - CONCLUSUES O embrião 6 aparentemente não diferenciado, 	 sugerindo que, durante.,a germinação, ocorram profundas modificaç6es morfofi siol6gicas, justificando, em parte, a germinação demorada 	 dessas sementes. O melhor tempo de exposição na solução de tetraz6lio foi o intervalo de 10 a 20 minutos, permitindo perfeito contraste 	 da coloração vermelha intensa dos tecidos do embrião da semente. 	 A embebição das sementes em solução aquosa do fungicida merpacine a 1,0% prejudicou o desenvolvimento da coloração vermelha intensa na região do embrião da semente. Os resultados sugerem que, por oca sião da aplicação do teste de tetraz6lio, o tratamento das 	 semen tes de castanha-do-Brasil com esse fungicida deve ser evitado. 	 O teste de tetraz6lio presta-se para a avaliação da viabilidade 	 de sementes de castanha-do-Brasil e possibilita a localização e 	 o acompanhamento do desenvolvimento do embrião durante a germinação, que.o torna importante na explicação do mecanismo controlador da germinação das sementes. S. REIS, G.a.dos; CARVALHO I J.E.U. de;MULLER, Cdl; FIGUEIREDO, F.J.C. Calibração do teste de tetraz6lio em sementes de cas-tanha-do-Brasil. Bel&n, CPATU, 1979. 9 p. (Comunicado T5cnico,.17). ABSTRACT: Brazil nut (Bertholletia excelsa, H.B.K.) seeds of 10 month harvesting, storaged in jute fiber bags were cutted longitudinally and submitted to different tirites of exposure in a 0.5% 	tetrazolium solution, after imbibition in 	 distilled water (20 hours) or in a 1% aqueous solution of merpacine (5.1% in phenil 	mercuric acetate). The undifferentiated arca 	 of embryo showed perfect contrast of 	 dark red color in the interval of 10 	 to 	 20 minutes in the .solution of 	 tetrazoliuin, after imbibition of distilled water. 	 The imbibition of seeds in the aqueous solution of fungicide prejudiced the contrast of embryo arca. The adequate use of teüazolium is satisfactory to the evaluation of viability of Brazil nut seeds and enables the localization and accompanying of embryo development, during germination, which is important to explain the controlling mechanisni of germination of the seeds. 5 - ANEXOS 6. Ls •'-' '' 	..A\' 5.1 - Fig. 1 - ASPECTO DE UMA "MEIA SEMENTE" APQS O CORTE LONGITUDINAL 5.2 - Fig. 2 - "MEIA SEMENTE" MOSTRANDO A LOCALIZAÇÃO DO EMBRIAO DA SEMENTE DE CASTANHA-DO-BRASIL 7 . 6 - FONTES CONSULTADAS 1 - BARBOSA, M.M.S.; LELIS, W.T. & PINTO, A.F.S. Ensaio sobre 	 a germinação da castanha do Para. B.Inst. Biol. Bahia. 13:100-6, 1974. 2 - CASTANHA do para: bem renthel sG com a modernização. Arnaz6nia. São Paulo, 3:10-5, 1978. 3 - INTEP.NATIONAL rules for seed testing. Proc. Int. Seed. Test. 31:1-152, 1972. 4 - KIM, M.C. The tetrazolium test for evaluating the viability of oil palm (Elaeis guianensis Jacq.) seed. Proc. Int. Seed Test. Assoc. 37(3):771-8, 1972. 5 - HOORE, R.P. Tetrazolium testing of seed peanuts. Oleagineaux. 27(8-9):433-8, 1972. 6 - 	 . Tetrazoliun testing practices and guides. 	 In: INTERNATIONAL SYHPOSIUM ON SEED PROCESSING. Raleigh, 1973, Raleigh, North Carolina State University, 1973. p.1-13. 7 - 	 . Tetrazolium for diagiosing causes for disturbance in seed quality. Zeitschrj.ft Lardiwirtscha Ftliche 	 Forchung. 24:104-9, 1970. 3 - 	 . Tetrazolium evaluation of- troe: and .shrub zeeds. Proc....Sced Test. Assoc. 37:1-7, 1972. 	 -. 9 - 	 . Tetrazolium for detoction of physiological necroses in lettuce seed. Seod Technol. News. 40(3):16-7, 1969. 10 - 	 . Tetrazo].ium insights into leaky enbryos and bloated seeds. Seed Technol. News. 40(4):5-6, 1969. 8. 11 - )IOORE, R.P. Seed vigor or soundness and corn inprovment. IPreparado para 18th. Annual Hybrid Industry - Research Conference. Chicago, 19631. 	12 - 	 . Technique innovation Tltesting of snall seeds Seed Tcchnol. News. 44(2):18-9, 1972. 	13 - 	.Tetrazoliun as a universally acceptable quality test of value seed. Proc. Int. Seed Test. Assoc. 27(3) :795-805, 1972. 	14 - 	 . Seed gernination difficulties deternined by a TZ chemical nethod (2, 3, 5 - triphenil tetrazolium chloride). Raleigh, 1956. Weather - fractured hypocotyls in great 	 northemn bean secd. News Letter of Assoc. of 0ff. Seed Anal. 35(3):7-8, 1965. 	16 - 	 . Weather - fractured seed coats beans. News Letter of Assoc. of 0ff. Seed Anal. 39(2):26-7, 1965. 	17 - 	 . The use of tetrazoliun test as a rapid nethod of deternining secd viability, vigor and causes for seed germination difficulties in com. lApresentado na Hybrid Seed Corri Industry Research Conference. Chicago, 19581 	18 - 	 . Tetrazolium tests for deternination of injury 	 and viability of seed corri. In: ANNUAL HYBRID CORN INDUSTRY RESEARCH CONFERENCE, 13th, 1958. Proceedings. IS.L.I 1958. p. 13-20,28-33. 19 - MORAES, V.H.F.M. & NULLER, C.H. Influancia da casca e da in-jeção de £cido giberlico na absorção de água pelas senen-tes da castanheira (Bertholletia excelsa, H.B.K.). Belgn, CPATU, 1978. 7p. (Conunicado flcnico, 2). 9 . 20 - MULLER, C.H. Ej. FREIRE, F.C.O. Influ€ncia de fungicidas 	 na conservação e na geminação de angndoas de castanha 	 do Brasil. (em preparação). 21 - PINHEIRO, E. & ALBUQUERQUE, N. Castanha do Para. In: 	 LIVRO ANUAL DA AGRICULTURA. Brasília, 1968. p.225-33. 22 - REIS, G.G. dos. Absorção de gua pelas senentes de castanhas do Brasil. (No prelo) 

Calibração do teste de tetrazólio em sementes de castanha-do-brasil.

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