Descreve a metodologia de desafio para a identificação de bovinos resistentes ou suscetíveis à primo-infecção por B. bovis para fins experimentais.bitstream/item/55805/1/CO65.pdfDsiponível no formato online

BENAVIDES, M. V.

SACCO, A. M. S.

SÁ, G. L. de

Descreve a metodologia de desafio para a identificação de bovinos resistentes ou suscetíveis à primo-infecção por B. bovis para fins experimentais.Dsiponível no formato online

Infoteca-e

65ISSN 1982-5382Dezembro, 2008Bagé, RSMétodo para classificar bovinos resistentes à infecção por Babesia bovis1Magda Vieira Benavides2Gizele Lima de Sá3Ana Maria Sastre SaccoA babesiose bovina é uma enfermidade caracterizada por prostração, febre, icterícia, anemia hemolítica, presença ou não de hemoglobinúria, sintomatolo-gia nervosa e freqüentemente morte. É causada por parasitos do gênero Babesia, hemoprotozoários que são transmitidos por carrapatos, sendo identifi-cada e descrita em várias regiões do mundo onde há criação de bovinos com condições climáticas adequadas ao desenvolvimento do carrapato, ou seja, áreas geográficas entre os paralelos 32ºN e 32°S. No Brasil, as espécies res-ponsáveis pela babesiose bovina são Babesia bovis e Babesia bigemina e são transmitidas pelo carrapato comum dos bovinos, o Rhipicephalus (Boophilus) microplus. A Babesia, junto com o Anaplasma, faz parte do complexo tristeza parasitária bovina.ComunicadoTécnico1-  Zootecnista, Dr., Pesquisadora da Embrapa Pecuária Sul, Bagé/RS, mbenavid@cppsul.embrapa.brMagda Vieira Benavides 2Gizele Lima de Sá - Bióloga, gezelha@hotmail.com3Ana Maria Sastre Sacco - Veterinária, Dr., Pesquisadora da Embrapa Pecuária Sul, Bagé/RS, anasacco@cppsul.embrapa.brA resistência de indivíduos frente às infecções provocadas por parasitos tem sido sugerida como possível alternativa para amenizar o problema. Há evidên-cias de que a característica de resistência seja transmitida de geração em gera-ção, e por isso é de interesse no estudo de doenças veterinárias de alta morta-lidade e morbidade. Até que sejam conhecidos e validados resultados de marca-dores genéticos que indiquem que bovinos são mais resistentes à babesiose através do DNA, métodos de identificação experimentais são importantes para pesquisas na área da babesiose bovina.Apesar da presença quase que constante do carrapato em todo o Brasil, a babesiose tem maior importância em determinadas regiões onde o clima é variável ao longo do ano com estações climáticas bem definidas e nem sempre favoráveis ao desenvolvimento constante do carrapato vetor, conseqüente-mente ocorrendo babesiose. Esse quadro normalmente ocorre nas fronteiras sul e oeste do Rio Grande do Sul, onde existem bacias leiteiras utilizando gado europeu, muitas vezes importados de países livres de carrapato. Atualmente, a pecuária de corte fora do Rio Grande do Sul, a fim de aumentar a produtivi-dade que consistia essencialmente na criação de gado zebuíno, está sofrendo transformações tais como: mudanças no manejo dos campos (introdução de grandes áreas de agricultura e de pastagens cultivadas) e dos animais (cruza-mentos industriais com introdução de raças européias onde só havia zebuínos, aumento da densidade populacional de bovinos) que alteram de maneira impor-tante a estabilidade que era mantida com relação à sanidade do rebanho. A importância econômica da babesiose no desenvolvimento da pecuária é de-terminada por muitos fatores, dentre os quais perdas por mortes, menor pro-dução de carne e leite em animais doentes ou em recuperação, custos com quarentenas, tratamentos, manejos especiais, abortos e menor fertilidade temporária nos touros resultante da febre (LOMBARDO, 1976; McCOSKER, 1981). Segundo estudos realizados no Brasil, Argentina e Uruguai, os produto-res apontam os carrapatos e a Tristeza Parasitária Bovina (TPB) como dos maiores problemas sanitários dos rebanhos (MADRUGA et al., 1986; SPÄTH; MANGOLD, 1986), sendo que a babesiose provoca perdas de 23 a 45% no ganho de peso dos animais (SOLARI et al., 1992). A grande limitação no controle do problema TPB se encontra no fato de que os métodos de prevenção (pré-imunização e vacinas atenuadas) consistem de imunização através da infecção, ou seja, inoculação do agente vivo através de sangue, o que além de apresentar risco de doença, também pode disseminar outros agentes etiológicos, podendo trazer sérias conseqüências sanitárias aos rebanhos.Atualmente, a única possibilidade de identificação dos fenótipos (resistente, intermediário e suscetível) em animais é através da exposição dos bovinos ao parasito, o que ocorre de forma descontrolada quando há surtos de babesiose. Como os trabalhos de pesquisa devem ser realizados sob condições controladas e com segurança, foi desenvolvida uma metodologia através da inoculação de B. bovis em bovinos. Portanto, o objetivo deste trabalho é descrever a metodologia de desafio para a identificação de bovinos resistentes ou suscetíveis à primo-infecção por B. bovis para fins experimentais.Os fenótipos resistente, intermediário e suscetível estão relacionados à rapidez e duração da resposta imune do bovino frente a B. bovis. Uma rápida ativação do sistema imune será benéfica ao hospedeiro, no entanto o prolongamento desta resposta pode, por outro lado, prejudicará o bovino, podendo levá-lo a óbito.O principal órgão responsável pela imunidade frente à babesiose é o baço, devi-do a interação de células esplênicas tais como macrófagos e linfócitos no desen-volvimento de mecanismos que visam a remoção do parasito no organismo hos-¯pedeiro. Além disso, os macrófagos secretam fatores tóxicos (NO e O ) e molé-2culas chamadas citocinas (IFN, IL12, IL18 e TNF) que regulam a resposta infla-matória. Tais fatores e moléculas também são responsáveis pela patologia clí-nica, uma vez que, durante a resposta imune, as hemácias, tanto parasitadas como sadias, acabam sendo danificadas. Metodologia1. Cepas. As cepas virulentas de B. bovis são mantidas em nitrogênio líquido e    sua reativação é realizada em terneiro sensível e esplenectomizado. A    terminologia sensível significa que o animal nunca teve contato direto com    o carrapato vetor. Como o baço participa ativamente da resposta à infecção    por B. bovis é necessária a remoção do órgão para que a infecção seja    efetiva. O terneiro é infectado com cepa virulenta de B. bovis e quando    este apresentar parasitemia, o sangue parasitado deste animal é inoculado7    em bovinos sensíveis experimentais (inóculo de 1 x 10  de hemácias    parasitadas via subcutânea). ComunicadoTécnico, 65Exemplares desta edição podem ser adquiridos na:Embrapa Pecuária SulEndereço: BR 153, km 603, Caixa Postal 242Fone/Fax: (53) 3242-8499E-mail: sac@cppsul.embrapa.br1ª edição1ª impressão (2008): 1ª tiragem96401-970 - Bagé, RSExpedienteComitê de PublicaçõesSupervisão editorial: Comitê Local de Publicações - EmbrapaRevisão de texto: Comitê Local de Publicações - EmbrapaTratamento das ilustrações: Kellen PohlmannEditoração eletrônica: Kellen PohlmannPresidente: Alexandre Varella Secretário-Executivo: Ana Maria Sastre Sacco Membros: Eduardo Salomoni, Eliara Freire Quincozes, Graciela Olivella Oliveira, J  oão Batista Beltrão Marques, Magda Vieira Benavides, Naylor BastianiPerez.Pecuária SulPecuária SulReferênciasBENAVIDES, M. V.; SACCO, A. M. S. Differential Bos taurus cattle response to Babesia bovis infection. Veterinary Parasitology, Amsterdam, v. 150, n. 1-2, p. 54-64, Nov. 2007.2 Método para classificar bovinos resistentes à infecção por Babesia bovisDentre os parâmetros observados, a queda de volume globular está estreita-mente associada com os fenótipos de resistente, intermediário e suscetível. A decisão de tratamento deve estar baseada em quedas contínuas e bruscas de volume globular, número de dias com parasitemia positiva e alterações com-portamentais como apatia, perda de condição corporal e alterações nervosas. A principal vantagem desta metodologia é a possibilidade de monitorar cuidado-samente e classificar bovinos em função de sua resposta frente à infecção por B. bovis para fins experimentais. Isto não era possível antes a menos que ocor-ressem surtos de babesiose nos rebanhos, o que seria extremamente perigoso uma vez que em surtos de campo não são conhecidos os inóculos e a possibi-lidade de óbito de animais seria extremamente alta. No entanto, não é desneces-sário ressaltar que esta metodologia é experimental e não é adequada a tra-balhos de campo.2. Animais. É essencial que os animais doadores (terneiros esplenectomizados)    sejam livres de outras enfermidades para que não ocorra a inoculação de        outros patógenos nos animais receptores e sensíveis, caso contrário poderão    reagir à inoculação, uma vez que já possuem imunidade contra o inóculo. É    também imprescindível que os animais receptores sejam sensíveis. Caso    contrário, a identificação dos fenótipos não será confiável, uma vez que    reações em animais já infectados mascaram a resposta do indivíduo,    podendo classificá-lo como resistente quando na realidade esta resistência    poderá ser devida à imunidade adquirida nas possíveis infecções anteriores. LOMBARDO, R. A. Socioeconomic importance of the tick problem in the Americas. Pan American Health Organization Scientific Publication, v. 316, p. 79-89, 1976.3. Monitoramento. Antes da inoculação com B. bovis, são realizadas três    coletas nos doadores e receptores para a determinação de temperatura retal    e volume globular, e uma coleta de sangue com anti-coagulante para a    determinação parasitemia e sangue sem anti-coagulante para sorologia anti-    B. bovis, anti-B. bigemina e anti-Anaplasma marginale. O objetivo destas    coletas pré-desafio é determinar os parâmetros normais de temperatura e de    volume globular e obter a confirmação de negativa de parasitemia e de    sorologia para B. bovis para os doadores e receptores. No desafio, o    aumento de temperatura retal e a queda de volume globular são calculados    como porcentagem em relação aos parâmetros normais. O monitoramentoo o    do desafio é realizado do 4 . ao 30 . dia pós-inoculação e neste período são    realizadas coletas diárias para a determinação de temperatura retal, volume    globular e parasitemia. 4. Critérios de classificação em fenótipos. Através do desafio são distinguidas    três categorias de animais quanto a resposta frente ao desafio: (1) animais resistentes (ou refratários) à infecção por Babesia bovis: animais     com queda de volume globular de até 21,5%, leve parasitemia (detecção     de presença do parasito) e sem necessidade de tratamento veterinário     específico para babesiose; (2) animais de fenótipo intermediário: bovinos com queda de volume globular     de >21,5%, parasitemia e sem necessidade de tratamento veterinário     específico para babesiose, e (3) animais de fenótipo suscetíveis: animais com queda de volume globular de     >21,5%, parasitemia e com necessidade de tratamento veterinário     específico para babesiose.A necessidade de tratamento veterinário específico é o único critério usado para classificar um indivíduo como suscetível. Os animais de fenótipo interme-diário apresentaram uma resposta imune mais eficiente, que os permitiu re-estabelecer seus parâmetros normais sem a necessidade de tratamento vete-rinário específico.A correta classificação dos animais em fenótipos é somente possível quando observada a resposta primária, objetivo principal da metodologia. Também é imprescindível a manutenção de potreiros de isolamento, áreas livres do carra-pato vetor Rhipicephalus (Boophilus) microplus para a manutenção dos animais sensíveis. Note-se que em nenhum momento é usado desafio com carrapato, uma vez que seria difícil quantificar a carga parasitária destes animais em rela-ção a B. bovis. A Figura 1 mostra os passos das etapas do desafio e a Tabela 1 mostra os resultados obtidos em 240 bovinos que foram classificados em três fenótipos (resistentes, intermediários e suscetíveis) conforme suas rea-ções pós-inoculação. Com esta metodologia de monitoramento da primo-inoculação dos hospedeiros é possível classificar bovinos como resistentes, intermediários e sensíveis à infec-ção por B. bovis. É necessário esclarecer que esta metodologia é experimental e não se destina a uso indiscriminado como forma de selecionar animais por meio de fenótipos mas sim de selecioná-los quando obtivermos marcadores molecu-lares associados à resistência frente à B. bovis. A seleção de animais mais resis-tentes à babesiose por meio de marcadores moleculares não pretende superar completamente as limitações atuais impostas pela babesiose, no entanto, permi-tirá que produtores rurais das mais diversas regiões endêmicas, beneficiários di-retos dos resultados desta pesquisa, reduzam perdas produtivas e mortalidade nos seus rebanhos. Também, um menor número de tratamentos veterinários re-sultará em produtos de origem animal mais saudáveis e menor custo de produ-ção. McCOSKER, P. J. The global importance of babesiosis. In: RISTIC, M.; KREIER, J. P. Babesiosis. New York: Academic Press, 1981. p. 1-24.SOLARI, M. A.; NARI, A.; CARDOZO, H. Impact of Babesia bovis and Babesia bigemina on the production of beef cattle in Uruguay. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, v. 87, p. 143-149, 1992. Supplement III.SPÄTH, E. J. A.; MANGOLD, A. J. Algunas caracteristicas de produccion y sanidad de rodeos de ganado bovino de carne en el Sudeste de Salta y norte de Tucumán. Revista Argentina de Producción Animal, Buenos Aires, v. 6, n. 1-2, p. 101-112, 1986.

Método para classificar bovinos resistentes à infecção por Babesia bovis.

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