Insensibilização dos peixes; Dados biométricos; Sequência de procedimentos para coleta de parasitos de peixe; Detecção e métodos de fixação de parasitos de peixes; Preparação dos reagentes fixadores de parasitos;bitstream/item/46620/1/AP-2011-Metodos-coleta-Circular.pd

ISHIKAWA, M. M.

JERÔNIMO, G. T.

MARTINS, M. L.

TAVARES-DIAS, M.

VENTURA, A. S.

Insensibilização dos peixes; Dados biométricos; Sequência de procedimentos para coleta de parasitos de peixe; Detecção e métodos de fixação de parasitos de peixes; Preparação dos reagentes fixadores de parasitos

Infoteca-e

••••Macapá, APMaio,2011AutoresGabriela Tomas JeriinimoEngBnheiril de Aquicultura, Doutonl"'dil,Universidade Fedanl de Saf'la G,HarillJ.Floriarópoli:l, se.gabriela@cc<l.uisc.brMaurício Laterça MartinsBiúluyu, D..,Ulur,Universidaoc Fcdi:nl de Silf'til Gatarirw,Flnrial'ápolis, sernlaten;a@GC3.utsc.brMárcia Mayumi IshikawaMédica Veterinária, Oolltoril,Embrapa AgrooBcuária OeUe,DDlJildos, ]\·1S.r,-,arda@coaO.Bl"braoa.brArlene Sobrinho VenturaAcadêmica de 1\·1edicina Veterinária,Faculdi"J.. Anhmguerc, DO\Jadm" ME;."dane_o; _ '-'Bntura@hotm,Jil.coN'Marcos Tavares-DiasBiólogo, Doutor,Embr"p" Am"pi\.C.Pot;t:ll: 1), 68903-~19, M;J,c:lo;Í,AP.marcostavares@cllaíaJ.er'braDa.brCIRCULAR TECNICA FINAL2sexta-feira, 5 de agosto de 20-11 15:-15:59••••ISSN 1517-4980Métodos para Coleta de Parasitos de PeixesIntroduçãoEntre as metodologias para diagnóstico de doenças em peixes podem ser ressaltadas asanálises parasitológicas, sendo importante coletar e processar os parasitos de maneiracorreta, para obtenção de material que possa ser identificado.Para obtenção dos parasitos é necessário realizar uma necropsia do peixe, ou seja, éimportante retirar e analisar todas as partes do peixe onde podemos encontrar os parasitos.É então necessário seguir uma sequência de procedimentos que facilite a execução egaranta a preservação dos parasitos (EIRAS et aI., 20061.Sempre que possível, os peixes deverão ser examinados imediatamente após sua coleta emorte, para observação de parasitos externos (ectoparasitosl e internos (endoparasitos).o objetivo desta circular é orientar técnicos, estudantes e profissionais da área sobre asmetodologias adequadas para coleta de parasitos de peixes, principalmente na piscicultura.Insensibilização dos PeixesPara conter e sacrificar os peixes podem ser utilizados alguns anestésicos sintéticos como atricaína metano sulfonato (MS-2221 e a benzocaína, os quais são muito utilizados. Estesanestésicos podem causar efeitos indesejados em algumas espécies de peixes, tais como aperda de muco, irritação das brânquias e danos na córnea (INOUE et aI., 2003). além daperda de ectoparasitos.••••Outra alternativa é a utilização do óleo de cravo queapresenta algumas vantagens como a praticidade,baixo custo, eficiência em baixas concentrações erápida metabolização e depuração ICHO; HEAT,2000; MUNDAY; WilSON, 1997; WATERSTRAT,1999).Em geral, os anestésicos não são recomendados paraestudos e coletas de ectoparasitos, mas quando oobjetivo é coletar ectoparasitos não há inconveniênciaDados BiométricosA biometria é realizada para complementar asinformações referentes ao diagnóstico de doençasparasitárias no peixe. Na biometria, são realizadasalgumas medidas do peixe tais como seu peso (g) ecomprimento (cml.••••no uso de anestésicos (EIRAS et aI., 2006).Assim, para estudos e coletas de ectoparasitos, amaneira simples e eficaz de causar a morte dos peixesconsiste em perfurar a parte superior da cabeça comum instrumento pontiagudo. Um pequeno movimentolateral nesta posição causa a comoção cerebral,provocando a morte do peixe.o comprimento pode ser o total, que vai da boca atéa cauda ou o comprimento padrão, quando se mededa boca até o início do pendúculo caudal.Sequência de Procedimentos para Coleta de Parasitos de PeixeA) Coleta de ectoparasitos de peixes de pequenoporte1. Colocar o peixe em um frasco com formol1 :4.000.2. Esperar duas horas e completar com formaldeído37%-40% até atingir uma concentraçãoaproximada de 5%.3. Etiquetar o frasco identificando a espécie, data einformações do proprietário.C) Coleta de ectoparasitos das narinas1. As narinas devem ser abertas com auxílio deuma tesoura de ponta fina e deve-se realizar alavagem das suas cavidades com soro fisiológico0,65% ou formol 1 :4.000.2. O conteúdo deve ser colocado em um frasco.3. Adicionar formol a 10% até alcançar aconcentração de 5% sobre o conteúdo.4. Etiquetar o frasco contendo o órgão e identificá-10 com informações sobre espécie, local e data decoleta.CIRCULAR TECNICA FINAL2sexta-feira, 5 de agosto de 20-11 15:Hi:OOBI Coleta de ectoparasitos do tegumento1. Fazer uma inspeção macroscópica com objetivode detectar possíveis parasitos visíveis a olho nu.2. Realizar raspagem do tegumento no sentidocabeça-cauda, não se esquecendo das nadadeiras.3. Colocar o conteúdo do tegumento em umfrasco.4. Adicionar formol a 10% até alcançar aconcentração de 5% sobre esse conteúdo.5. Etiquetar o frasco, contendo o órgão, peixeanalisado e data.••••E) Coleta de endoparasitos de olhos de peixes1.Com auxilio de instrumento pontiagudo, externaro globo ocular do peixe.2.Retirar os dois globos oculares.3.Estourar os globos oculares dentro de um frasco.4.Adicionar AFA frio ou formol 10%.5.Etiquetar o frasco contendo o órgão, com dadosdo peixe analisado e a data de coleta.G) Coleta de endoparasitos de órgãos de peixes1. Retirar o órgão desejado (estômago e/ouintestino I .2. Individualizá-Ios em placa de Petri.3. Os órgãos devem ser abertos cuidadosamente.CIRCULAR TECNICA FINAL2sexta-feira, 5 de agosto de 20-11 15:Hi:Q-l••••D) Coleta de ectoparasitos de brânquias (guelras)1. Levantar o opérculo, expondo as brânquias, retirá-Ias com cuidado e separar os arcos.2. Colocar em frasco e banhá-Ias com água a 55 °C,e após aproximadamente 30' minutos, completar ofrasco com formol a 10%.3. Etiquetar o frasco, contendo o órgão, espécie,data e informações do proprietário.'Em regiões que registram altas temperaturasambientais, como as que ocorrem na Amazônia, nãoé necessário expor as brânquias à água quente porlongo período. Cerca de 10-15 minutos são osuficiente.FI Necropsia para coleta de endoparasitosA necropsia dos peixes consiste na abertura dacavidade visceral e exposição dos órgãos.1. Fazer uma incisão ventral, começando na regiãodo ânus e prolongando-a até a região anterior.2. A seguir, rebater as paredes laterais da cavidadevisceral.3. Expor os órgãos internos e observar se háparasito aderido à superfície dos órgãos ou naprópria cavidade visceral.••••h) Processamento dos órgãos para coleta deendoparasitos1.0s órgãos devem ser banhados em água a 55 °C(estômago e/ou intestinol.2.Após 30 minutos completar o frasco com formol10% ou AFA aquecido a 60 oCo O intestino e oestômago devem ser abertos e fixados diretamenteno frasco com formol 10% ou AFA aquecido a600C.3.Etiquetar identificando qual órgão, data, espéciee informações do proprietário.4.Para facilitar a coleta, o conteúdo doestômago e/ou intestino poderão ser lavados empeneiras com malha de 100-150pm de abertura.5.0bservar o órgão em estereomicroscópio.OBS: Se a coleta for realizada em laboratório, podeseguir direto para o passo 4.••••Detecção e Métodos de Fixação de Parasitos de PeixesNos peixes de cultivo podem ser encontradosdiferentes parasitos pertencentes aos vários grupos,em órgãos distintos (Tabela 1). Assim, sãonecessárias as seguintes recomendações paradetecção e fixação:Protozoários - A detecção é efetuada através daobservação microscópica de raspados de brânquiase tegumento, ou de pequenos fragmentos debrânquias colocados entre lâmina e lamínula. Afixação pode ser feita diretamente em lâmina ouapós remoção dos arcos branquiais e raspado dotegumento usando formo I a 5%.Mvxozoa - Podem ser encontrados nas brânquias,rins, fígado, baço, coração e ovários. Sãocaracterizados, na sua fase de parasito de peixes,por possuírem esporos, podendo ter formas edimensões muito diferentes. A sua observação deveser feita, tanto quanto possível, imediatamentedepois de coletados, colocando-se entre lâmina elamínula. Se for impossível observar os esporos afresco, então pode proceder-se a fixação dosmesmos em formol tamponado a 4%-10%.Monogenoides - Se encontram nas brânquias,narinas e superfície do corpo dos peixes(tegumento). Pode-se detectar também noestômago, cavidade visceral, ovidutos e canaisCIRCULAR TECNICA FINAL2sexta-feira, 5 de agosto de 20-11 15:Hi:02Urlnarlos. A verificação da parasitose causada porMonogenoidea pode ser feita analisando-se peixesvivos, através de raspados de tegumento ebrânquias, ou de pequenos fragmentos de brânquiascolocados entre lâmina e lamínula. Para visualizaçãodos mesmos nos órgãos internos, necropsia-se opeixe, retirando o órgão desejado. Para fixação doparasito, recomenda-se banhar as brânquias emágua aquecida (a 60 o Cl até cobrir seu volume, eaproximadamente 30 minutos após, adicionar formol5%-10%.Digenéticos - Podem ser coletados no trato-gastrointestinal {estômago e/ou intestinol, órgãosocos, sistema circulatório ou tecido conjuntivo. Jáem sua forma larval (metacercárias) podem localizar-se nas brânquias, olhos, encéfalo, pericárdio,musculatura, cavidade geral, parede interna e váriosórgãos e mesentério. Os adultos devem sercomprimidos entre lâminas ou entre lâmina elamínula e fixados com formo I 5% ou AFA.Cestoides e nematoides - Em geral, os cestoides enematoides são encontrados na fase adultaparasitando intestino e/ou a cavidade do corpo dospeixes. Estes devem ser fixados com formol 5% ouAFA quente, para distensão do corpo.Acantocéfalos - Os parasitos adultos são quase•••• 51 ••••Tabela 1. Principais órgãos onde parasitos de peixes podem ser encontrados.Local de preferênciaB ~. Olh Músculoranqulas os e mesentérioParasitosMucoe nadadeiras IntestinoDemaisórgãos internosIchthyophthirius multifiliisPiscinoodinium pillulareT~icodinideosMi}(osporídcosMonogenoideosLernaea(larvas e adultos)Argulus/DolopsLarvas de moluscoLarvas de digenéticos+++++++++++++ + ++++++++ + + +Larvas de cesto icesLarvas de nematoidesDigeneticos, c€stoidese nelllatoides adultos++++++++Preparação dos Reagentes Fixadores de ParasitosA) Formol 1 :4.000Formal (37%-40%) 1 mLÁgua destilada 4.000 mLB) Formol a 5%:Formal (37%-40%)......... .. 50 mLÁgua destilada 950 mLO) Formol 10'10 tamponado:Formal (37%-40%) 100 mLÁgua destilada 900 mLFosfato de sódio dibásico 6,5g (Na2HP04)Fosfato de sódio mOllobásico .4.0g (NaH2P04)E) Álcool 70%Álcool absoluto 700 mLCompletar com água destilada 300 mLF)AFAÁlcool 70 "GL 930 mLFormal (37%-40%)........ ...50 mLÁcido acético glacial 20 mLC) FormoI10%:Formol (37%-40%) 100 mLÁgua deslilada 900 mL085: Deve ser armazenado em geladeira {4 uGI, para ha evetsão da ptobóscide de Etcan1océfalos.São necessários cuidados básicos na manipulação dos reagentes indicados para fixação dos órgãos e/ouparasitos de peixes. Recomenda-se a utilização de luvas e máscaras para manipulação dos reagentes, visto queformol e ácido acético são altamente tóxicos, cancerígenos e irritantes para as vias respiratórias. Esses produtosquando entram em contato com a pele, podem causar irritação nos olhos, nariz e mucosas, mas em altasconcentrações pode causar ainda bronquite, pneumonia e laringite.Os sintomas mais frequentes no caso de inalação são: forte dor de cabeça, tosse. falta de ar. vertigem edificuldade para respirar. O contato com o vapor ou com a solução pode deixar a pele esbranquiçada, áspera ecausar forte sensação de anestesia e necrose na pele superficial. O ácido acético quando concentrado podecausar queimaduras graves na pele e nos olhos.Considerações FinaisA coleta de parasitos de peixe pode ser realizada, preferencialmente, no Laboratório, no entanto, pode tambémser realizada na piscicultura ou no campo. No primeiro caso, o material deve estar acondicionado adequadamenteem frasco, seguindo as recomendações acima e de tal maneira que a amostra fique coberta, pelo fixado r(formol), 5 a 10 vezes o seu volume. Junto com a amostra deverá ser encaminhado para o Laboratório algumasinformações complementares sobre o material que está sendo enviado:> Nome, endereço e telefone da propriedade;> Data da coleta dos parasitos;> Nome e espécie do peixe que foi feita a coleta os parasitos;> Ração utilizada e a frequência com que os peixes estavam sendo alimentados;> Data que iniciou a mortalidade;> Descrição do tratamento (produto, quantidade e freqüência) caso tenha sido utilizado.CIRCULAR TECNICA FINAL2sexta-feira, 5 de agosto de 20-11 15:Hi:03•••• ••••AgradecimentosOs autores agradecem ao CNPq e Ministério da Pesca e Aquicultura (MPAl, pelo apoio financeiro ao ProjetoAquabrasil e Projeto MAPA/CNPq (Proc. 578159/2008-2).ReferênciasCHO, G. K.; HEAT, D. D. Comparison Di tricaine methanesulp"'onate (MS222) and clave ail anaesthesia effects on the phvsiology af juvenileChinook salmon Oncorhynchus tshawytscha (Walbaum). Aquaculture Research, Oxford, n. 31. o. 537-546, 2000.EIRAS, J. C.; TAKEMOTO, R. M.; PAVANELLI, G. C. Métodos de estudo e técnicas laboratoriais em parasitologia de peixes. 2. ed. Maringá;Eduem, 2006.199 p.INOVE, L. A, K, A.; SANTOS-NETO, C,; MORAES, G, Clove oil as anaesthetic for juveniles of matrinxá Brycon cephalus [Günther, 1869).Ciência Rural, Srlnt~ MeUirl, v. 33, n. 5. p. 943-947, 2003.MUNDAY, P. L.; WILSON, S. K. Cnmnrlr~tivp. Bttir.<1r.Vnt r.lov? oil rlnd nther r.hp.mir.rlls in ~n;:lf~j;;ihp.tiz;rtinn ot PnmrJr.p.ntrlJ .••ÇJmhoim:msis:, ricoral reef fish, Journal of Fish Biology, London, v, 51, p, 931-938, 1997,WATERSTRAT, P. R. Induction and recoverV from anaesthesia in channel catfish /ctafurLls pLlnctatus fingerlings exposed to c10ve oi!. Journalof World Aquaculture Society, Baton Rouge, v. 30, n. 2, p. 250-255,1999.CircularTécnica. 39Exemplares desta edição podemser adquiridos ra:Embrapa AmapáEndereço: Rnrlovi;, Jw;r.elinn Kllhit~r.hp.k,Km 5, W 2600, CEP 68903-419,Macapá, AP.Caixa Postal 10, CEP 68906-970Fone: (96) 4009-9500Fax: (96) 4009-9501E-mail: sac@cpafap.embrapa.brComitê dePublicaçõesPresidente: Rogério Mauro Machado AlvesSecretária: Elisabete da Silva RamosMembros: Marcelino Carneiro Guedes,Raimundo Pinheiro Lopes Filho, ValeriaSaldanha Bezerra, Ricardo Adaime da Silva,Adilson Lopes Lima.Ministério daAgricultura, Pecuáriae AbastecimentoExpediente Supervisar Editorial: Rogério Mauro Machado AlvesNormalização bibliográiica: Adelina do SocorroSerrão BelémRevisão de Texto: Elisabete da Silva RamosFotos: G.abriela Tomas Jelôllimo e Marcos Tavales Diasr ediçãor impressão (2011): 500 exemolaresCIRCULAR TECNICA FINAL2sexta-feira, 5 de agosto de 20-11 15:Hi:03....'I"....'I"CIRCULAR TECNICA FINAL2sexta-feira, 5 de agosto de 2011 16:16:03....'I"....'I"CIRCULAR TECNICA FINAL2sexta-feira, 5 de agosto de 2011 16:16:03

Métodos para coleta de parasitos de peixes.

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