OLIVEIRA, M. C. de S.

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Aspectos epidemiológicos da babesiose bovinaem São Carlos, SPMárcia Cristina de Sena Oliveira1Teresa Cristina Goulart de Oliveira-Sequeira21 Pesquisadora da Embrapa Pecuária Sudeste, Rod. Washington Luiz, km 234, Caixa Postal 339, CEP: 13560-970, São Carlos, SP. Endereço eletrônico:marcia@cppse.embrapa.br2 Professora do Departamento de Parasitologia, IB, Unesp-Botucatu, Rubião Júnior s/no, Botucatu, SP. Endereço eletrônico: sequeira@ibb.unesp.br49ISSN 1517-1116São Carlos, SPJunho, 2004Foto: Márcia Cristina de Sena  OliveiraTécnicoComunicadoAs babesioses bovinas, no Brasil, sãocausadas por duas espécies, Babesia bovis eBabesia bigemina, ambas transmitidas pelocarrapato Boophilus microplus. Essas parasitosesfazem parte de um complexo de doenças,conhecido no Brasil como “tristeza parasitáriabovina”. As babésias multiplicam-se exclusiva-mente no interior dos eritrócitos, resultando umaenfermidade hemolítica e febril cuja gravidadedepende de vários fatores relacionados ao parasita(cepa, espécie de protozoário, tamanho doinóculo) e ao hospedeiro (idade, raça, estadofisiológico e imunitário). Clinicamente, asbabesioses caracterizam-se por febre, anemiahemolítica, hemoglobinúria, icterícia e morte emcasos graves da doença (McCosker, 1981).Do ponto de vista epidemiológico, as áreasde ocorrência das babesioses bovinas podem serclassificadas de acordo com a distribuição e adinâmica populacional do seu vetor, o carrapatoBoophilus microplus. Dessa forma, trêssituações ocorrem: áreas livres ou indenes,áreas de instabilidade e áreas de estabilidadeenzoótica. As áreas indenes são aquelas onde ascondições climáticas não permitem odesenvolvimento dos carrapatos e dessamaneira as babesioses não ocorrem. As áreas deinstabilidade enzoótica se localizam nas áreaslimítrofes de distribuição dos carrapatos e comisso, em determinadas épocas as condiçõesclimáticas impedem o desenvolvimento doácaro. Durante esse período de ausência dosBabesia bovis                    Babesia bigemina2 Aspectos epidemiológicos da babesiose bovina em São Carlos, SPcarrapatos, ocorre queda dos níveis deanticorpos contra as babésias nos bovinos e,quando a situação climática permite novamenteo desenvolvimento desses vetores, surtos dadoença podem aparecer. Nas regiões em que oclima permite que as populações de carrapatosse mantenham, mesmo que flutuantes, ao longodos anos, ocorre a chamada estabilidadeenzoótica. Nessas condições, o rebanho éconstantemente inoculado com babésias, o quemantém os níveis de anticorpos contra essesparasitas em patamares elevados. Em regiões deestabilidade enzoótica, são mais freqüentes oscasos clínicos em animais jovens ou em animaiscom queda de resistência individual.As perdas ocasionadas por essashemoparasitoses são atribuídas a menor ganhode peso dos animais, decréscimo na produção deleite, infertilidade de touros, abortos emortalidade. As babesioses representamtambém grande obstáculo à introdução deanimais geneticamente superiores, provenientesde áreas livres, que geralmente são introduzidoscom o propósito de aumentar a produtividadedos rebanhosO diagnóstico das babesioses bovinas éfeito principalmente por meio do examemicroscópico de esfregaços de sangueperiférico. Essa técnica é de grande importânciano diagnóstico de bovinos clinicamenteafetados. Em estudos epidemiológicos, noentanto, ela apresenta limitações, porque não écapaz de detectar animais em fases iniciais dadoença e aqueles que já sofreram a doença e seestabeleceram como portadores. Os examessorológicos, que detectam anticorposespecíficos, também apresentam limitações,porque indicam a exposição ao agente, mas nãoinformam sobre o estágio da infecção (Wagneret al., 1992). As maiores dificuldades sãoencontradas nos estudos sobre a dinâmica dasinfecções por Babesia nos carrapatos. Apesquisa desses protozoários em esfregaços dehemolinfa e em macerados de ovos e larvas deBoophilus microplus apresenta como principaislimitações a dificuldade de se identificar asespécies a partir das esporocinetos (formasevolutivas das babésias encontradas nahemolinfa das fêmeas adultas) e a baixasensibilidade dos exames diretos. Por isso,tornou-se prioridade desenvolver métodos dediagnóstico específicos e sensíveis, quepossibilitem diferenciar as duas espécies debabésias e também a detecção de bovinos cominfecções inaparentes (portadores sadios) e oscarrapatos naturalmente infectados(Guglielmone et al., 1997).Avanços recentes no campo da biologiamolecular tornaram possível o uso de técnicasde amplificação de DNA para verificar, demaneira relativamente rápida e com altasensibilidade, a presença de hemoparasitastanto nos carrapatos vetores como nos bovinos(Singh, 1997). A utilização dessas técnicaspossibilita o melhor conhecimento daepidemiologia das babesioses e a obtenção dedados que permitem o aprimoramento demétodos de controle.Com a finalidade de obter dados quepermitissem a caracterização epidemiológica daregião de São Carlos e testar métodos maissensíveis e específicos para o diagnóstico dasbabesioses bovinas, as taxas de infecção poresses parasitas foram avaliados em 27 bezerrose 25 vacas mestiças leiteiras (Bos taurus x Bosindicus) criados na Embrapa Pecuária Sudeste e3             Aspectos epidemiológicos da babesiose bovina em São Carlos, SPem fêmeas adultas de B. microplus colhidasdesses animais. Amostras de sangue da jugularde todos os animais foram utilizadas para aextração de DNA e posterior amplificação doDNA das babésias, utilizando a técnica de PCR(reação em cadeia da polimerase), conformeFigueroa et al. (1993), com algumasmodificações. Amostras de sangue periféricoforam utilizadas para a confecção de esfregaçoscorados com Giemsa. Esses esfregaços foramlidos em microscópio óptico, sendo verificado onúmero de células parasitadas em 1000eritrócitos. A taxa de infecção dos carrapatospor babésias foi avaliada pelo examemicroscópico de amostras de hemolinfa e pelaamplificação do DNA parasitário de dez fêmeasadultas de B. microplus. Amostras de ovos detodas as fêmeas de carrapatos também foramavaliadas para infecção por babésias por meiodo exame direto de esfregaços de maceradodesses ovos e pela técnica de PCR.Os resultados referentes aos examesmicroscópicos e à amplificação de DNA paraBabesia bovis e Babesia bigemina estãoresumidos na Tabela 1. Dos 27 bezerrosexaminados, 12 foram positivos ao examemicroscópico para B. bigemina, com parasitemiasque variaram de menos de 0,1% a 0,2%. Apresença de B. bovis foi detectada em 3 animais.Além das babésias, Anaplasma marginale foiencontrado em 12 animais, nos quais aparasitemia variou de 0,4% a 3,6%. Entre as 25vacas, nenhuma foi positiva ao exame direto deesfregaços de sangue para babésias. Uma vacaapresentou parasitemia patente por A. marginale(0,6% de eritrócitos parasitados). As técnicas deamplificação de DNA parasitário a partir deamostras de sangue foram capazes de detectarnúmero significativamente superior (P<0,01) deanimais positivos para Babesia bovis e Babesiabigemina. Com essa técnica, apenas quatrobezerros foram negativos para B. bovis e doispara B. bigemina. Entre as vacas todas forampositivas para B. bovis e quatro foram negativaspara B. bigemina. As taxas de infecção dosbezerros, por ambas as espécies de Babesia,não  diferiram  significativamente (P<0,01) daobtida nas vacas.Nas fêmeas adultas de B. micropluscolhidas de bezerros, o número de exemplarescom infecção simples por B. bigemina (145) foisignificativamente maior (P<0,01) do que o deexemplares com infecção simples por B. bovis(12) e o de exemplares com infecções mistas(11). Nas fêmeas de carrapatos colhidas devacas, as taxas de infecção por B. bovis e por B.bigemina foram semelhantes (P>0,05), maioresdo que as de infecção mista (P<0,01) e menoresdo que a taxa de teleóginas com ausência dehemoparasitas (negativas) (P<0,01).A amplificação de DNA em amostras deovos revelou elevada porcentagem de posturasnegativas, especialmente quando os carrapatosse ingurgitaram em vacas. Para as fêmeas decarrapatos que realizaram o repasto sangüíneoem bezerros, predominou nas posturas ainfecção simples por B. bigemina. Fêmeas decarrapatos colhidas de vacas produziram menornúmero de posturas infectadas, mas o númerode posturas infectadas por B. bovis foisemelhante ao de posturas infectadas por B.bigemina.Para os 431 pares de amostras deteleóginas e posturas analisados, ficou evidenteo  encontro  de  número  expressivo de posturas4 Aspectos epidemiológicos da babesiose bovina em São Carlos, SPnegativas (60,3%). Além disso, verificou-se que70% das posturas produzidas por fêmeasinfectadas com B. bovis foram negativas,enquanto que as fêmeas infectadas por B.bigemina transmitiram a infecção para 61% deposturas produzidas.A elevada taxa de infecção apresentadapelos bovinos indica que a região estudadaapresenta características de estabilidadeendêmica, situação em que a transmissão debabésias é contínua (Mahoney & Ross, 1972;Goff et al., 1982), propiciando a infecção dosanimais jovens. Como não se observou apresença de sinais clínicos de babesiose nosbezerros, presume-se que a imunidade passiva einata seja suficiente para protegê-los contra osefeitos das babesioses clínicas durante osprimeiros meses de vida, já que a imunidadeativa começa a se efetivar a partir dos quatromeses de idade (Passos et al., 1997). Essesachados estão de acordo com aquelesencontrados na literatura para de regiõesclassificadas como de estabilidade endêmica(Mahoney & Ross, 1972).A ocorrência de babesioses em bezerros,do nascimento ao  desmame, tem  sido  descritaem diversas regiões do Brasil (Kessler et al.,1983; Madruga et al., 1983; FARIA, 1995).Essa ocorrência tem sido atribuída àredução dos níveis de anticorpos colostraisassociada à adoção de práticas de manejo queimpedem o contato dos bezerros com oscarrapatos durante os primeiros meses de vida.No rebanho estudado, o contato precoce dosanimais com os carrapatos nos pastos e aproteção colostral parecem ser responsáveispela ausência de sinais clínicos de babesiosesnos bezerros. Quanto às vacas, elas apresentamforte imunidade, em razão da prolongadaexposição e, dessa maneira, raramentedesenvolvem sinais clínicos.A alta sensibilidade das técnicas deamplificação de DNA permitiu a identificação denúmero significativamente maior de animaisinfectados por B. bovis e B. bigemina do que odetectado por meio de exames diretos. Essesresultados estão de acordo com observaçõesanteriores relativas às infecções por Babesia emvárias espécies (Fahrimal et al., 1992; Figueroaet al., 1992, 1993; Battsetseg et al., 2001,2002). Como os testes de amplificação de DNAdetectam o parasita independentemente doTabela 1. Comparação dos resultados obtidos pelo exame direto de esfregaços de sangue e poramplificação de DNA (PCR/nPCR) para o diagnóstico de Babesia bovis e Babesia bigeminaem 27 bezerros e 25 vacas mestiças leiteiras criadas no Estado de São Paulo.Amplificação de DNA (PCR/nPCR)Bezerros VacasB. bovis B. bigemina B. bovis B. bigeminaExame diretoPos. Neg. Pos. Neg. Pos. Neg. Pos. Neg.Positivo   3 0 12 0   0 0   0 0Negativo 20 4 13 2 25 0 21 45             Aspectos epidemiológicos da babesiose bovina em São Carlos, SPdesenvolvimento da resposta imunológica, foipossível diagnosticar infecções, tanto por B.bigemina como por B. bovis, nos bezerros, aindano primeiro mês de vida.Nas fêmeas de carrapatos, as taxas deinfecção pelas duas espécies de Babesiadetectadas pela amplificação de DNA diferiramem função da categoria etária dos bovinos nosquais elas haviam se alimentado. Nas teleóginascolhidas de bezerros, houve predominância deinfecções por B. bigemina, enquanto nasteleóginas colhidas de vacas não houvediferença entre o número de teleóginasinfectadas por B. bigemina e por B. bovis.Com base neste estudo, concluiu-se que,nas condições da região estudada, o ideal émanter o contato precoce dos bezerros com oscarrapatos, evitando o surgimento de casosclínicos graves nos primeiros meses de vida.Para o rebanho em geral, seria convenientemanter a população de carrapatos sob controle,de forma que o número de carrapatos por animalnão seja suficientemente elevado para causarprejuízos provocados pela espoliação de sangue,mas que não seja tão baixo a ponto de reduzir demaneira drástica os níveis de anticorposcirculantes contra os hemoparasitas.Referências bibliográficasBATTSETSEG, B.; XUAN, X.; IKADAI, H.; JOSE,R. B. L.; BYAMBAA, B.; BOLBAATAR, D.;BATTUR, B.; BATTSETSEG, G.; BATSUKH,Z.;IGARASHI, I.; NAGASAWA, H.; MIKAMI, T.;FUJISAKI, K. 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