GULARTE, V. F.

OLIVEIRA, R. P. de

ROCHA, P. S. G. da

SCIVITTARO, W. B.

Portuguese

Infoteca-e

ISSN 1806-9185Agosto, 2009Pelotas, RSComunicadoTécnicoNova metodologia paramicropropagação deframboeseira12111Trabalho de pesquisa realizado com apoio financeiro e bolsas do CNPq.2Eng. Agrôn., Dr., Embrapa Clima Temperado, Pelotas, RS. (rpedroso@cpact.embrapa.br) ; (wbscivit@cpact.embrapa.br)3Bolsista Pós-doutorado CNPq.4Graduanda em Ciências Biológicas, Universidade Católica de Pelotas, Bolsista CNPq, Pelotas, RS.Roberto Pedroso de Oliveira2Paulo Sérgio Gomes da Rocha3Vanessa Flores Gularte4Walkyria Bueno Scivittaro2IntroduçãoA framboeseira (Rubus idaeus L.) é umaespécie do grupo das chamadas pequenasfrutas, cuja produção pode ser destinada aomercado in natura ou à fabricação de polpa,purê, conserva, geléia e sucos (DONADIO etal., 1998). Trata-se de uma cultura de baixocusto de implantação e de manutenção, quedemanda bastante mão-de-obra, mas queapresenta alta rentabilidade por hectare,sendo uma boa alternativa de renda parapequenas propriedades familiares das regiõesde clima subtropical e temperado (OLIVEIRAet al., 2006).A propagação da framboeseira pode serrealizada por estaquia de raízes, enraizamentode estacas e por cultura in vitro de tecidos,sendo este último procedimento o maisseguro para evitar contaminações por vírus,fungos, bactérias e/ou nematóides (OLIVEIRAet al., 2009). Há 18 anos, a Embrapa ClimaTemperado micropropaga framboeseiras,tendo sido produzidas milhares de mudas, asquais têm sido disponibilizadas a produtoresde diferentes Estados.O gênero Rubus é bastante responsivo invitro, obtendo-se taxas de multiplicaçãosatisfatórias, com valores variando de 3,0 a 7,9por subcultivo de 30 a 45 dias, dependendo dacultivar e das condições de cultivo(ANDERSON, 1980; OLIVEIRA et al., 2009). Noentanto, uma observação mais detalhada dasplantas, durante o seu desenvolvimento invitro, indicou a existência de sintomas declorose internerval, confirmada, após análisequímica, como sendo decorrente dedeficiência de ferro.2 Nova metodologia para micropropagação de framboeseiraO ferro é um micronutriente essencial para aorganização dos meristemas e crescimentodas brotações, atuando como cofator demúltiplos elementos no sistema de transportede elétrons, em processos enzimáticos e naeficiência fotossintética das plantas (HANSENet al., 2006). Em cultura de tecidos, o ferropode ser adicionado na forma quelatizada(FeDTPA, FeEDTA, FeEDDHA e FeEDDHMA)ou inorgânica (FeSO4 ou FeCl3), sendoutilizado, no meio MS (MURASHIGE eSKOOG, 1962), a fonte FeSO47H2O.Este trabalho teve por objetivo ajustar aconcentração de ferro no meio de cultura paraotimizar a micropropagação de framboeseira.MetodologiaO trabalho foi realizado no laboratório deCultura de Tecidos da Embrapa ClimaTemperado, situado em Pelotas, RS.Para o experimento foram utilizados explantesde 8-10 mm contendo 3-4 gemas das cultivaresHeritage e Batum, provenientes de trêssubcultivos em meio MS completosuplementado com 0,8 mg L-1 de BAP. Foramestudadas as concentrações de 0, 25, 50 e 75mg L-1 de FeSO47H2O no meio MS. Em todosos tratamentos utilizou-se 0,8 mg L-1 de BAPno meio de cultura, sendo o cultivo realizadosob 20 µE m-2 s-1, temperatura de 25 ± 2ºC efotoperíodo de 16 horas. Desta forma,realizou-se três subcultivos de 45 dias(Subcultivos 4, 5 e 6), utilizando umdelineamento inteiramente casualizado, emesquema fatorial (2 cultivares x 4concentrações de ferro), com quatrorepetições. A unidade experimental foiconstituída por um frasco contendo cincoexplantes. As variáveis analisadas foram: taxade multiplicação, níveis de contaminação,vitrificação e oxidação e ocorrência desintomas de deficiência ou toxidez de ferro.Para a determinação da taxa de multiplicaçãoacumulada, multiplicaram-se os valoresobtidos nos subcultivos 4, 5 e 6.Os dados foram submetidos à análise devariância, comparando-se as médias do fatorcultivar pelo teste de Tukey (p<0,05) e do fatorconcentração de ferro no meio de cultura, poranálise de regressão polinomial.Resultados e DiscussãoNos três subcultivos iniciais em meio MScompleto com 0,8 mg L-1 BAP (Subcultivos 1, 2e 3), todas as plantas de framboeseiraapresentaram sintomas de deficiência deferro, ou seja, clorose internerval das folhasmais novas, permanecendo as nervuras dasfolhas com a coloração verde e o limbo,amarelo-esbranquiçado. Isto demonstra que aframboeseira é mais exigente nessemicronutriente do que a maioria das espécies.De forma geral, os sintomas visuais iniciaramna segunda semana de cultivo, intensificando-se ao longo do subcultivo.Para as cultivares de framboeseira Heritage eBatum, o efeito da concentração de ferro domeio de cultura sobre a taxa de multiplicaçãofoi ajustado a modelos quadráticos deregressão nos três subcultivos estudados. Nafigura 1, subcultivos 5 e 6, observa-sedesempenho similar das duas cultivaresquanto à taxa de multiplicação nas diferentesconcentrações de FeSO47H2O, embora a‘Heritage’ sempre tenha sido mais responsivain vitro. Apenas no subcultivo 4 houvepequena variação nos resultados,provavelmente em função da mudança nacomposição do meio de cultivo. A ausência deferro no meio ocasionou morte de todas asplantas no subcultivo seguinte, confirmandosua essencialidade (DECHEN e NACHTIGALL,2006). Além da importância do ferro nosprocessos enzimáticos e de fotossíntese, adeficiência do nutriente leva à deficiência de P,S, Cu, Zn e Mn e ao aumento na concentraçãode Ca e K nos tecidos, afetando odesenvolvimento das plantas (SILVEIRA et al.,2007).Com base nos resultados obtidos nossubcultivos 4, 5 e 6, determinaram-se asconcentrações de FeSO47H2O que otimizarama multiplicação in vitro da cv. Heritage (853,3plantas) e da Batum (523,7 plantas), as quaisforam: 43,4 e 43,1 mg L-1, respectivamente(Figura 1). Essas concentrações de ferro sãobastante superiores à recomendada porMURASHIGE e SKOOG (1962) no seu meioMS, que é de 27,85 mg L-1. Deve-se considerar,no entanto, que o meio MS foi desenvolvidovisando o crescimento de calos de tabaco,tendo sido utilizado de forma quase quegeneralizada em cultura de tecidos de3Nova metodologia para micropropagação de framboeseirainúmeras espécies, sem a prévia adequação evalidação para a otimização dodesenvolvimento in vitro de outras espécies.Os resultados evidenciaram a necessidade desuplementação do meio MS com ferro para amicropropagação de framboeseira.Durante o cultivo in vitro, as plantasestudadas não apresentaram formação decalos, contaminação por bactérias e porfungos e nem vitrificação. Quanto à oxidaçãodos explantes, esta ocorreu, apenas, notratamento MS isento de ferro, para o qual severificou morte de todos os explantes já apartir do segundo subcultivo.Figura 1. Taxa de multiplicação de explantes de framboeseira (Rubus idaeus L. cvs. Heritage eBatum) no 4o (a), 5o (b) e 6o (c) subcultivo em meio MS modificado com diferentes concentraçõesde ferro. Gráfico (d) refere-se à taxa média de multiplicação nos três subcultivos.Conclusões1. A framboeseira exigiu maior concentraçãode ferro do que a proposta no meio MS parao adequado desenvolvimento in vitro.2. A concentração ideal de FeSO47H2O nomeio de cultura MS para micropropagaçãoda ‘Heritage’ foi de 43,4 mg L-1 e da ‘Batum’de 43,1 mg L-1.'Heritage': y = -0,004x 2 + 0,400x + 0,365; R 2  = 0,95**'Batum': y = -0,004x 2 + 0,354x + 0,205; R 2 = 0,98**0246810120 25 50 75FeSO4.7H2O (mg L-1)TaxamultiplicaçãoHeritage' Batum'(b)'Heritage': y = -0,003x 2  + 0,238x + 4,731; R 2 = 0,88**'Batum': y = -0,001x 2 + 0,067x + 6,344; R 2 = 0,50**0246810120 25 50 75FeSO4.H2O (mg L-1)TaxamultiplicaçãoHeritage' Batum'(a)'Batum': y = -0,004x 2 + 0,372x + 0,362; R 2 = 0,94**'Heritage': y = -0,0043x 2 + 0,4054x + 0,435; R 2 = 0,93**0246810120 25 50 75FeSO4.7H2O (mg L-1)TaxamultiplicaçãoHeritage' Batum'(c)'Batum': y = -0,266x2 + 22,901x + 30,832; R2 = 0,92**'Heritage': y = -0,430x2 + 37,323x + 43,456; R2 = 0,92**020040060080010000 20 40 60 80FeSO4.7H2O (mg L-1)TaxamultiplicaçãoHeritage' Batum'(d)4 Nova metodologia para micropropagação de framboeseiraExemplares desta edição podem ser adquiridos na:Embrapa Clima TemperadoEndereço: Caixa Postal 403Fone/fax: (53) 3275-8199E-mail: sac@cpact.embrapa.br1a edição1a impressão 2009: 50 exemplaresPresidente: Ariano Martins de Magalhães JúniorSecretário-Executivo: Joseane Mary LopesGarcia Membros: José Carlos Leite Reis, Ana PaulaSchneid Afonso, Giovani Theisen, Luis AntônioSuita de Castro, Flávio Luiz Carpena Carvalho,Christiane Rodrigues Congro Bertoldi e Regina dasGraças Vasconcelos dos Santos Suplentes: MárciaVizzotto e Beatriz Marti EmygdioNormalização bibliográfica: Regina das GraçasVasconcelos dos SantosEditoração eletrônica: Oscar CastroComposição e Impressão: Embrapa Clima TemperadoComunicadoTécnico, 211Comitê depublicaçõesExpedienteReferênciasANDERSON, W. C. Tissue culture propagationof red and black raspberries Rubus idaeusand R. occidentalis. Acta Horticulturae,The Hague, v. 112, p. 13-20, 1980.DECHEN, A. R.; NACHTIGALL, G. R.Micronutrientes. In: FERNANDES, M. S. (Ed.).Nutrição mineral de plantas. Viçosa:Sociedade Brasileira de Ciência do Solo, 2006.p. 327-354.DONADIO, L. C.; NACHTIGAL, J. C.;SACRAMENTO, C. K. Frutas exóticas.Jaboticabal: Funep, 1998. 279 p.HANSEN, N. C.; HOPKINS, B. G.;ELLSWORTH, J. W.; JOLLEY, V. D. Ironnutrition in field crops. In: BARTON, L. L.;ABADIA, J. (Ed.). Iron nutrition in plantsand rhizospheric microorganisms.Dordrecht: Springer, 2006. p. 23-59.MURASHIGE, T.; SKOOG, F. A revised mediumfor rapid growth and bioassays with tobaccotissue cultures. Physiologia Plantarum,Copenhagen, v. 15, n. 3, p. 473-497, 1962.OLIVEIRA, R. P.; NINO, A. F. P. Potencial demultiplicação in vitro de cultivares deframboeseira. Revista Brasileira deFruticultura, Jaboticabal, v. 31, n. 1, p. 280-284, 2009.OLIVEIRA, R. P.; RASEIRA, M. C. B.; NICKEL,O.; NINO, A. F. P.; SILVA, F. O. X.  Produção demudas certificadas de framboeseira pormeio de cultura in vitro de tecidos.Pelotas: Embrapa Clima Temperado, 2006. 42 p.(Embrapa Clima Temperado. Sistema deprodução, 9).SILVEIRA, V. C.; OLIVEIRA, A. P.; SPEROTTO, R.A.; ESPINDOLA, L. S.; AMARAL, L.; DIAS, J. F.;CUNHA, J. B.; FETT, J. P. Influence of iron onmineral status of two rice (Oriza sativa L.)cultivars. Brazilian Journal of PlantPhysiology, Piracicaba, v. 19, n. 2, p. 127-139,2007

Nova metodologia para micropropagação de framboeseira.

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Nova metodologia para micropropagação de framboeseira.

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