ANTHONISEN, D. G.

RIBEIRO, M. E. R.

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Ensaio de ProficiênciaInterlaboratorial paraContagem de CélulasSomáticas em Leite225ISSN 1806-9185Pelotas, RSDezembro 2009ComunicadoTécnicoDenilson Anthonisen1Maria Edi Rocha Ribeiro21 Bacharel em química; Mestre em Ciência e Tecnologia Agroindustrial; Analista da Embrapa Clima Temperado, Pelotas, RS, denilson@cpact.embrapa.br2 Médica Veterinária; Mestre em Veterinária; Pesquisadora da Embrapa Clima Temperado, Pelotas, RS, dindi@cpact.embrapa.brAs células somáticas presentes no leite compreendemas células brancas ou leucócitos e as células epiteliais.Os leucócitos são produzidos quando há processosinflamatórios, enquanto as células epiteliais, produtosde descamação, são geradas em processos naturais dereposição de células no interior da glândula mamáriaou em lesões físicas (LEITE, 2006; NORO et al.,2006). Sendo assim, a contagem de células somáticas(CCS) constitui-se num importante indicador do estadosanitário da glândula mamária e, consequentemente,da qualidade do leite produzido pelos rebanhos leiteiros(PAULA, et al., 2004).Por outro lado, a publicação da Instrução Normativa51/02 (BRASIL, 2002) do Ministério da Agricultura,Pecuária e Abastecimento, constituiu um marcotransformador para o setor laticinista, pois definiunovas regras para a avaliação da qualidade do leitecru refrigerado no Brasil. No documento, estabeleceu-se que , em estabelecimentos sob fiscalização federal,a composição (gordura, proteína e sólidos totais), acontagem bacteriana total (CBT), a contagem decélulas somáticas (CCS) e os resíduos de drogasveterinárias devem ser monitorados, no leite cru eprocessado. Cabe destacar que estas determinaçõesdeverão ser realizadas por laboratórios credenciadospelo MAPA (EVANGELISTA, 2008).É condição determinante para o credenciamento delaboratórios pelo MAPA o cumprimento da legislaçãovigente e o atendimento aos requisitos de normas daqualidade, ABNT NBR ISO/IEC 17.025 ou BoasPráticas de Laboratório (BPL), conforme estabelece aInstrução Normativa 01/07 (BRASIL, 2007).Entre os requisitos da ISO/IEC 17.025, o item 5.4.5versa sobre a validação de métodos. Destaca-se nesteitem a necessidade do processo de validação sersuficientemente abrangente para atender a aplicaçãoa que se destina. Em nota, a ABNT (2005) sugere quepara determinar o desempenho de um método aplique-se uma ou mais das seguintes técnicas: calibraçãocom padrão ou material de referência, comparação deresultados com métodos diferentes, comparaçõesinterlaboratoriais, avaliação sistemática dos fatoresque interferem no resultado e avaliação da incertezaFoto: Maria Edi Rocha Ribeiro2 Ensaio de Proficiência Interlaboratorial para Contagem de Células Somáticas em Leitede medição.Segundo Ponçano (2005), a qualidade de um resultadolaboratorial está vinculada ao atendimento derequisitos de normas da qualidade voltadas aoreconhecimento e à acreditação de laboratórios.Dentre os recursos importantes para obter resultadosconfiáveis dispõe-se dos programas de comparaçãointerlaboratorial e, dentre eles, os ensaios deproficiência que permitem uma avaliação direta dodesempenho laboratorial.O objetivo do trabalho foi avaliar o desempenho doLaboratório da Qualidade do Leite da Embrapa ClimaTemperado no Programa Interlaboratorial paraContagem de Células Somáticas em matriz “Leite cruadicionado de bronopol”, provido pelo MAPA.Os ensaios foram realizados com leite cru refrigeradoobtido de tanques de propriedades rurais e/ou deanimais individuais e considerou-se a possibilidade demistura para obter a ordem de grandeza desejada,cuja variação se limita aos intervalos normais para otipo de matriz. Ao leite foi adicionado 2-bromo-2-nitro-propanodiol-1,3, o bronopol (MAPA, 2009).O Programa Interlaboratorial para Contagem deCélulas Somáticas foi conduzido no período de outubrode 2008 a setembro de 2009, coordenado peloLANAGRO-MG e contou com um número total de 15laboratórios (MAPA, 2009).Assim como os demais participantes, o Laboratório deQualidade do Leite da Embrapa Clima Temperadorecebeu mensalmente amostras de leite cruadicionado de bronopol para executar a contagem decélulas somáticas, por meio da técnica de análiseinstrumental de citometria de fluxo (BENTLEY, 1998),em conformidade com a IN 51/02.Os ensaios foram executados dentro do intervalomáximo de 144h a contar do “tempo zero” definidopara cada lote e mediante calibração do equipamentoa não mais do que quinze dias da data de análise(MAPA, 2009).A designação do valor de referência e da respectivaincerteza padrão referente aos materiais empregadosfoi feita por meio de valor de consenso, por meio dedelineamento fatorial 3A x 3R x 1r x 1F, onde Acorresponde ao número de analistas, R, de repetições(esfregaços) e r, de réplicas de um mesmo esfregaço.Como requisito de validação dos resultados adotou-seo limite de 5% para o coeficiente de variação. O valordesignado e sua incerteza foram obtidos peloalgoritmo A, conforme definido na Norma ISO13528:2005. Foram avaliados os seguintesparâmetros estatísticos em cada rodada do programa:(1) Valores designados para cada material e suaincerteza padrão; (2) Avaliação da incerteza padrão dovalor designado frente ao desvio padrão deproficiência laboratorial; (3) Homogeneidade eestabilidade dos materias; (4) Desvio padrão deproficiência laboratorial relativo à rodada; (5)Estimativa do bias, D (diferença entre valor obtido e odesignado); Bias laboratorial (D%); (6) z escore; (7) z’escore (Quadro 1); (8) parâmetros estatísticos deprecisão: repetitividade e reprodutividade e desviospadrão respectivos (MAPA, 2009).Quadro 1. Critérios de julgamento relativos ao zescore e ao z’ escore (MAPA, 2009).Critério Conclusãoz ou z’>  3,0 Ação corretiva3,0 >  z ou z’>  2,0 Atenção2,0 >  z ou z’>  -2,0 Conform idade-3,0 <  z ou z’<  -2,0 Atençãoz ou z’<  -3,0 Ação corretivaA análise dos dados expostos na tabela 1 permiteverificar que os resultados das determinações de CCSrealizadas no Laboratório de Qualidade do Leite daEmbrapa Clima Temperado (LQL) com ambos osmateriais de referência foram considerados“conformes”, tendo em vista estarem contidos nointervalo equivalente ao valor designado ± 2s, cujoslimites inferior e superior são, respectivamente, 402,8e 495,2. Além disso, foi possível observar que osdesvios padrão de 4,2 e 7,1 foram inferiores ao desviopadrão de proficiência, equivalente a 23,1.Tabela 1. Resumo dos resultados de CCS dosmateriais de referência.Padrão CCS (CS/uL)Média LQL (padrão 67CT21) 467Desvio padrão 4,2Média LQL (padrão 08HB75) 451Desvio padrão 7,1Média dos labs 477,4Desvio padrão 23,1Valor designado ajustado 449Variação correspondente a  2  46,2Variação correspondente a  3  69,33Ensaio de Proficiência Interlaboratorial para Contagem de Células Somáticas em LeiteComunicadoTécnico, 225Exemplares desta edição podem ser adquiridos na:Embrapa Clima TemperadoEndereço: Caixa Postal 403Fone/fax: (53) 3275 8199E-mail: sac@cpact.embrapa.br1a edição1a impressão 2009: 20 exemplaresPresidente: Ariano Martins de Magalhães JúniorSecretária- Executiva: Joseane Mary Lopes GarciaMembros: José Carlos Leite Reis, Ana Paula SchneidAfonso, Giovani Theisen, Luis Antônio Suita de Castro,Flávio Luiz Carpena Carvalho, Christiane RodriguesCongro Bertoldi e Regina das Graças Vasconcelos dosSantosSupervisor editorial: Antônio Luiz Oliveira HeberlêRevisão de texto:  Antônio Luiz Oliveira HeberlêEditoração eletrônica: Sérgio ILmar Vergara dos SantosComitê depublicaçõesExpedienteQuando tratou-se de Bias, o desempenho do LQLtambém indica conformidade com o conjunto deresultados. Os valores de bias (D) absoluto e relativo(D%), respectivamente, de 21 e 4,68%, ficarampróximos aos obtidos pelo laboratório de referência,27 e 6,01%. Além disso, estão contidos nos intervalosde resultados aceitos para estes parâmetros, que são–16 a 42, para D, e –3,56 a 9,35 para D%.A avaliação baseada no “z” escore ratifica o bomdesempenho do LQL, tendo em vista que os valoresobtidos pelo laboratório da Embrapa Clima Temperadopara z e z’, respectivamente, de 0,91 e 0,88, sãointermediários aos resultados mínimos, -0,69 e -0,67,e máximos, 1,82 e 1,77, obtidos no programa.Repetiu-se, neste caso, a similaridade aos resultadosobtidos pelo laboratório de referência para z, 1,17, ez’, 1,14. Ainda tomando por base os parâmetros z ez’, os resultados das rodadas 5 a 8, asseguramposição de destaque ao LQL, já que no universo de 15participantes, o laboratório faz parte do grupo deapenas cinco, cujos resultados apresentados nãoindicaram “atenção” ou “ação corretiva” em nenhumadas rodadas (quadro 1).O bom desempenho do Laboratório da Qualidade doLeite da Embrapa Clima Temperado no ProgramaInterlaboratorial para contagem de células somáticas(CCS) demonstra a competência técnica doLaboratório para gerar resultados estatisticamenteconfiáveis, utilizando a técnica da citometria de fluxo.ReferênciasABNT. NBR/ISO 17.025: Requisitos gerais paracompetência de laboratórios de ensaio e calibração.Rio de Janeiro: ABNT, 2005. 31 p.BENTLEY INSTRUMENTS INC. Operator’s manual.Chaska: Bentley Instruments Inc., 1998. 79 p.BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária eAbastecimento. Instrução normativa n° 51, de 18 deset. de 2002. Regulamento técnico de identidade equalidade do leite cru refrigerado. Diário Oficial daRepública Federativa do Brasil, Brasília, DF, n. 183, p.13-22, 20 set. 2002. Seção 1.BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária eAbastecimento. Instrução normativa n° 01, de 16 dejaneiro de 2007. Diário Oficial da República Federativado Brasil, Brasília, DF, p. 1, 17 jan. 2007. Seção 1.PONÇANO, V. M. L. Competência laboratorial eensaios de proficiência: avanços e desafios. SãoPaulo: Centro de Metrologia em Química - Instituto dePesquisas Tecnológicas –IPT, 2005. 7 p.NORO, G.; GONZÁLEZ, F.H.D.; CAMPOS, R.; et al.Fatores ambientais que afetam a produção e acomposição do leite em rebanhos assistidos porcooperativas no Rio Grande do Sul. Revista Brasileirade Zootecnia, Viçosa, v. 35, n. 3 (supl.), p. 1129-1135, 2006.LEITE, M.O. Fatores interferentes na análiseeletrônica da qualidade do leite cru conservado comazidiol líquido, azidiol comprimido e bronopol. 2006.62 f. Tese (Doutorado em Ciência Animal) – Escola deVeterinária, Universidade Federal de Minas Gerais,Belo Horizonte.EVANGELISTA, D. T. Comparação entre métodos dereferência e eletrônico por citometria de fluxo nacontagem bacteriana total (CBT) e de célulassomáticas (CCS) em leite submetido a diferentestratamentos térmicos. 2008. 65 p. Dissertação(Mestrado em Ciência Animal) – Escola de Veterinária,Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte.PAULA, M.C.; RIBAS, N.P.; MONARDES, H.G.; et al.Contagem de células somáticas em amostras de leite.Revista Brasileira de Zootecnia, Viçosa, v. 33, n. 5, p.1303-1308, 2004.MAPA. Programa Interlaboratorial POA08PIL001,Contagem de células somáticas em matriz “leite cruadicionado de Bronopol”. Pedro Leopoldo: LANAGRO/MG, 2009. 69 p. Relatório fase VIII.

Ensaio de Proficiência Interlaboratorial para Contagem de Células Somáticas em Leite.

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