LIMA, M. I. P. M.

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Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento  218ISSN 1517-4964Dezembro, 2007Passo Fundo, RSFoto: Paulo KurtzProtocolo usado na Embrapa Trigo para produção de peritécios de Gibberella zeae em grãos de trigoMaria Imaculada Pontes Moreira Lima1IntroduçãoA produção de peritécios de Gibberella zeae (Schwein.) Petch; Sn. G. Saubinettie), forma assexuada Fusarium graminearum Schwabe (Parry et al., 1995) tem sido realizada em vários substratos. O uso de meio de cultura (Bowden & Leslie, 1999), de grãos de milho (Campbell & Lipps, 1998), de aveia (Jin & Zhang, 1998), de trigo (Bai et al., 1989; Wang et al., 1982, citados por Dill-Macky, 2003), mistura de grãos (Stack, citado por Dill-Macky, 2003) e colmos de milho (Casa & Reis, 2005) são relatados com maior freqüência. Visando à caracterização de genótipos de trigo, cevada e triticale quanto à doença giberela, a Embrapa Trigo, baseando-se nas técnicas descritas para a produção de peritécios de G. zeae, selecionou e adequou procedimentos e produz a fase perfeita do fungo em grãos de trigo, que são usados, em campo para compor ambiente favorável à simulação de epidemia da doença. O objetivo desse trabalho é divulgar o protocolo usado na Embrapa Trigo para a produção de peritécios de G. zeae. Material e MétodosPara a produção de peritécios de G. zea são necessários os seguintes materiais e/ou equipamentos:● grãos de trigo de boa qualidade;● água de torneira;● água destilada e estéril;● algodão;● areião (areia grossa peneirada);● autoclave● caixas de madeira de aproximadamente 40 cm de largura, 42 cm de comprimento, 10 cm de altura e fundo falso;● câmara asséptica;● câmara de crescimento de microrganismos, regulada para 22  2oC e fotoperíodo de 12 horas;● erlenmayer de 500 ml de boca larga;● luvas plásticas descartáveis;● máscara de proteção descartável;1Pesquisador da Embrapa Trigo, Caixa Postal 451, CEP 99001-970 Passo Fundo, RS. E-mail: imac@cnpt.embrapa.br.● peneira plástica; ● proveta de 100 ml;● pipeta de 10 ml;● placas de Petri com cultura de F. graminearum em BDA com 5 - 10 dias de idade; ● regador ou mangueira para jardim;● sombrite.Os procedimentos para a produção de peritécios de G. zeae são: colocar em cada erlenmayer, 200 g de grãos de trigo (Fig. 1), completar o volume com água de torneira e deixar repousar à temperatura ambiente por 5 h (Fig. 2). Após, colocar uma peneira na boca do erlenmayer e escorrer o excesso de água (Fig. 3). Em seguida, tampar o frasco com algodão, autoclavar (esterilizar) por 30 min à pressão de 1,5 atm e deixar 24 h de repouso à temperatura ambiente (Fig. 4). Em câmara asséptica, lavar as placas com a cultura de F. graminearum (Fig. 5) com água destilada estéril até obter um volume aproximado de 200 ml por placa e, distribuir, com auxílio de micropipeta, 20 ml de suspensão de conídios em cada frasco contendo os grãos esterilizados. Após, agitar os frascos e colocá-los na câmara de crescimento por um período de 12 a 15 dias (Fig. 6). Os frascos devem ser agitados, vigorosamente, uma vez ao dia. Quando os grãos estiverem uniformemente colonizados (Fig. 7), proteger-se com máscara e luvas, e distribuí-los em bandejas (de alumínio ou plásticas) forradas com dupla camada de papel jornal até formar espessura de 1 cm (Fig. 8). Destorroar os grãos que permaneceram aglutinados em grandes grupos, deixando-os secar em casa de vegetação por aproximadamente oito dias, revolvendo-os diariamente. Após seco, distribuí-los em fina camada sobre a superfície de areia contida nas caixas (Fig. 9), protegendo-os com sombrite (Fig. 10). Se não chover, e estiver muito quente, molhar uma vez ao dia, ou a cada dois dias se a temperatura estiver amena. Se chover, deixar secar pelo menos quatro dias para proceder ao molhamento artificial. O excesso de molhamento pode provocar o apodrecimento dos grãos.ResultadosOs primeiros peritécios podem ser observados a partir do quarto dia pela constatação a olho nu de pequenas pontuações escuras nos grãos (Fig. 11). De 15 a 20 dias, a maioria dos grãos está coberta por uma camada escura (Fig. 12), semelhante à borra de pó de café, apresentando peritécios maduros (com ascosporos). O processo para a produção de peritécios demora em torno de 37 a 45 dias. Referências BibliográficasBOWDEN, R. L.; LESLIE, J. F. Sexual recombination in Gibberella zeae. Phytopathology, St. Paul, v. 89, p. 182-188, 1999.CAMPBELL, K. A. G.; LIPPS, P. E. Allocation of resources: sources of variation in Fusarium head blight screening nursires. Phytopathology, St. Paul, v. 88, p. 1078-1086, 1988.CASA, R. T.; REIS, E. M. Método para produção de inóculo e inoculação de Gibberella zeae em espigas de trigo. Summa Phytopathologica, Botucatu, v. 31, n. 2, p. 204-206, 2005.DILL-MACKY, R. Fusarium head blight of wheat and barley. St. Paul: The American Phytopathological Society, 2003. Cap. 8, p. 184-210.JIN, Y.; ZHANG, X. Mass production of ascospores of  Gibberella zeae. Phytopathology, St. Paul, v. 88, p. S44, 1998.PARRY, D. W.; JENKINSON, P.; McLEOD, L. Fusarium ear blight (scab) in small grain cereals - a review. Plant Pathology, London, v. 44, p. 207-238, 1995.Foto: Paulo Kurtz Foto: Paulo KurtzFig. 1. Frasco contendo 200 g de grãos de trigo.Fig. 2. Frasco contendo grãos de trigo de molho em água.Foto: Paulo KurtzFoto: Paulo KurtzFig. 3. Retirada do excesso de água do frasco.Fig. 4. Frasco contendo grãos de trigo autoclavados.Foto: Paulo KurtzFoto: Paulo KurtzFig. 5. Colônia característica de F. graminearum.Fig. 6. Câmara de crescimento de microrganismo contendo frascos com grãos de trigo em fase de colonização por F. graminearum.Foto: Paulo Kurtz Foto: Paulo Kurtz Fig. 7. Grãos de trigo em fase final de colonização por F. graminearum.Fig. 8. Grãos de trigo colonizados por F. graminearum em fase inicial de secagem.Foto: Paulo Kurtz Foto: Paulo KurtzFig. 9. Caixa de madeira contendo areia e grãos de trigo secos colonizados por F. graminearum. Fig. 10. Caixas cobertas com sombrite.Foto: Paulo KurtzFig. 11. Grãos de trigo apresentando os primeiros peritécios (setas) de G. zeae.Foto: Paulo KurtzFig. 12. Peritécios de G. zeae formados em grãos de trigo.ComunicadoTécnico Online, 218Ministério da Agricultura,  Pecuária e Abastecimento Embrapa TrigoCaixa Postal, 451, CEP 99001-970 Passo Fundo, RSFone: (54) 3316 5800Fax: (54) 3316 5802E-mail: sac@cnpt.embrapa.brExpediente Comitê de Publicações Presidente: Leandro Vargas Ana Lídia V. Bonato, José A. Portella, Leila M. Costamilan, Márcia S. Chaves, Maria Imaculada P. M. Lima, Paulo Roberto V. da S. Pereira, Rita Maria A. de MoraesReferências bibliográficas: Maria Regina MartinsEditoração eletrônica: Márcia Barrocas Moreira PimentelLIMA, M. I. P. M. Protocolo usado na Embrapa Trigo para produção de peritécios de Gibberella zeae em grãos de trigo. Passo Fundo: Embrapa Trigo, 2007. 16 p. html. (Embrapa Trigo. Comunicado Técnico Online, 218). Disponível em: <http://www.cnpt.embrapa.br/biblio/co/p_co218.htm>.

Protocolo usado na Embrapa Trigo para produção de peritécios de Gibberella zeae em grãos de trigo.

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