MARQUES, G. A.

MARTINS, I.

MELLO, S. C. M.

MENÊZES, J. E.

SANTOS, R. P.

SILVA, J. B. T.

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             Comunicado 168                    Técnico  CULTIVO DE Trichoderma SPP. E Dicyma pulvinata EM SUBSTRATOS SÓLIDOS    Marques, G.A.  Menêzes, J.E.  Martins, I.  Santos, R. P.  Silva, J.B.T.  Mello, S.C.M.   Introdução  Trichoderma spp. e D. pulvinata são microrganismos antagonistas que vêm sendo utilizados como agentes de controle biológico de fungos fitopatogênicos. Esses, por sua vez, causam redução da taxa de crescimento e desenvolvimento da planta, motivada por danos na parte área, caule ou radicular, influenciando na diminuição e qualidade dos produtos (Isaac, 1992).   Dentre os fungos filamentosos, os do gênero Trichoderma são reconhecidamente os hiperparasitas mais importantes e mais estudados, pois exibe variabilidade entre as linhagens com relação a atividade de biocontrole, espectro de ação contra hospedeiros, propriedades fisiológicas e bioquímicas, como também, adaptabilidade ecológica e ambiental (Silva, 2000).  Já o hiperparasita Dicyma pulvinata (Berk & M.A. Curtis) Arx (syn. Hansfordia pulvinata) tem sido apontado como um agente promissor no controle do M. ulei (Junqueira et. al.,1989; Delmandi, 2002)). Esse fungo é capaz de colonizar lesões estromáticas causadas por M. ulei, destruindo tanto a fase ascógena como conidial do patógeno e provocando a redução do desfolhamento das plantas e da taxa de inóculo para reinfecções (Junqueira & Gasparotto, 1991). A baixa capacidade de crescimento e esporulação em meio de cultura ou substratos artificiais de baixo custo tem representado um dos principais fatores, limitantes para o uso de Dicyma pulvinata para controle biológico de fungos estromáticos (Junqueira & Gasparotto, 1991).   Em vista disso, tem-se procurado cultivar esses antagonistas em fontes nutricionais de baixo custo. ISSN 9192-0099 Setembro, 2007 Brasília, DF  OBJETIVO  Avaliar o efeito de cama de frango e da água de coco na produção de esporos de Trichoderma spp. e D. pulvinata em substratos sólidos.   MATERIAL E MÉTODOS  Para os ensaios, arroz parboilizado e arroz com casca foram suplementados com cama de frango, um resíduo rico especialmente em nitrogênio, procedente de galpão de criação de frangos do Distrito Federal. Os substratos foram acondicionados em frascos erlenmeyer de 125mL, da seguinte forma: 1) 50g de arroz especificado, previamente, umedecido com água destilada (60%), acrescentado-se cama de frango nas concentrações de 0, 5, 10, 15 e 20% e 2) 25g de arroz com casca triturados por 10 segundos, acondicionados em erlenmeyer de 250mL e umedecido com água de coco nas seguintes concentrações: 0, 25, 50, 75 e 100%. No primeiro experimento, para cada substrato + cama de frango foram feitas três repetições e no segundo, para cada concentração, quatro repetições. O experimento foi montado em câmara de fluxo laminar esterilizada (20 minutos com luz ultravioleta) e em cada erlenmeyer foram inoculados dois discos de 9 mm retirados de colônias de Trichoderma spp e de D. pulvinata cultivadas em meio BDA.   A incubação ocorreu em sala de crescimento à temperatura de 25ºC, com fotoperíodo de 12 horas. Após 10 dias de cultivo para Trichoderma spp. e 17 dias para D. pulvinata (Fig. 1), realizaram-se as avaliações a partir de suspensões de esporos obtidas pela adição de 100 mL de Tween 0,05%, por frasco. De cada uma das suspensões, retirou-se uma alíquota para contagem dos esporos, com auxílio de câmara de Neubauer. A análise dos dados foi feita pela média das contagens de esporos de cada agente de biocontrole.  . Figura 1 - Produção de esporos Trichoderma spp. (esquerda) e Dicyma pulvinata (direita) em arroz parboilizado contendo Cama de Frango, nas diferentes concentrações.       RESULTADO E DISCUSSÃO  A esporulação de ambos os micoparasitas foi influenciada pela adição de cama de frango, principalmente para D. pulvinata em que todas as concentrações testadas de cama de frango proporcionaram maior número de esporos que a testemunha (Tabela 1). Tanto para Trichoderma spp. quanto para D. pulvinata, os maiores valores      médios de números de esporos/mL de suspensão foram obtidos nos substratos a base de arroz parboilizado, adicionado de 20% de cama de frango, para os dois agentes de controle biológico (Tabela 1).  Estes resultados indicaram que cama de frango poderá ser usada como fonte nutricional para a multiplicação de agentes de biocontrole em larga escala.               Tabela 1 - Esporulação dos fungos Trichoderma spp. (esquerda) e Dicyma pulvinata (direita) em arroz parboilizado acrescido de cama de frango.  Segundo Leite (2003) para a produção de conídios em larga escala, tem se utilizado produtos vegetais de baixo custo, especialmente o grão de arroz. A eficácia de arroz parboilizado já tinha sido constatada por Catalão (2004) e Melo (2006) para obtenção de inóculo de D. pulvinata. O substrato arroz com casca acrescida de cama de frango propiciou um baixo crescimento para todos os isolados. Esse substrato pode ser utilizado, porém deve ser acrescido de outras fontes nutricionais para seu melhor desempenho. O arroz ainda tem sido um dos substratos mais utilizados para o crescimento e esporulação de fungos agentes de controle biológico. Porém, é imperativa a busca de substratos alternativos que não sejam utilizados em alimentação humana e animal, Esporulação de Trichoderma  spp.01020304050601 2 3 4 5Concentração de cama de frangoConídios / grama x 1010 Espoulação de Dicyma pulvinata01020304050607080901 2 3 4 5Concentração de cama de frangoConidios / grama x 108mas que sejam tão eficientes como o arroz, e de menor custo.  REFERÊNCIA  Catalão, G.L. 2004. Cultivo de Dicyma pulvinata para o biocontrole de Microcyclus ulei em Hevea spp. Monografia de Graduação. Brasília, DF, Faculdades da Terra de Brasília.  Delmandi, L.C. Avaliação do potencial de uso do hiperparasita Dicyma pulvinata (Berk & Curtis) no controle biológico do mal-das-folhas [Microcyclus ulei (P. Henn v.Arx)] de seringueira [Hevea brasiliensis (Willd. Ex A. Juss) Muell. Arg] em São José do Rio Claro – MT. Tese de Mestrado. Cuiabá, MT, Universidade Federal do Mato Grosso. 2002. Gasparotto, L., Santos, A.F., Pereira, J.C.R., Ferreira, F.A. Doenças da seringueira no Brasil. Embrapa-SPI, Brasília, DF, 1997. 168p. Isaac, S. Fungal life-style. In Fungal-Plant interactions. (eds Chapman & Hall), London. 418p., 1992. Junqueira, N.T.V., Gasparotto, L. Controle biológico de fungos estromáticos causadores de doenças foliares em seringueira. In: BETTIOL, W. ed. Controle Biológico de Plantas. Embrapa-CNPDA, Jaguariúna, 1991. p.307.331.  Melo, D.F. Produção, armazenamento, estabilidade e eficiência de linhagens de  Dicyma pulvinata (Berk & M.A. Cutis) Arx [syn. Hansfordia pulvinata (Berk & Curtis)] no biocontrole para o mal-das-folhas da seringueira. Tese de Mestrado, Brasília, DF, Universidade de Brasília, 130p. 2006.  Silva, P.R.Q. da. Transformação de Trichoderma harzianum com os genes da proteína fluorescente verde e de resistência ao fungicida benomil. Tese de doutorado, Brasília, DF, Universidade de Brasília, 130p., 2000.                           Comunicado  Técnico, 168     Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento Exemplares desta edição podem ser adquiridos na Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia Serviço de Atendimento ao Cidadão Parque Estação Biológica, Av. W/5 Norte (Final) – Brasília, DF CEP 70770-900 – Caixa Postal 02372 PABX: (61) 3448-4673 Fax: (61) 3340-3624 http://www.cenargen.embrapa.br e.mail:sac@cenargen.embrapa.br  1ª edição 1ª impressão (2007): Comitê de  Publicações           Expediente Presidente: Sergio Mauro Folle Secretário-Executivo: Maria da Graça Simões Pires Negrão Membros: Arthur da Silva Mariante  Maria da Graça S. P. Negrão   Maria de Fátima Batista   Maurício Machain Franco   Regina Maria Dechechi Carneiro   Sueli Correa Marques de Mello   Vera Tavares de Campos Carneiro Supervisor editorial: Maria da Graça S. P. Negrão Normalização Bibliográfica: Maria Iara Pereira Machado Editoração eletrônica: Maria da Graça Simões Pires Negrão   

Dicyma pulvinata em substratos sólidos.

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