Bengtson, Mário H.

Bizarro, Cristiano Valim

Ricachenevsky, Felipe Klein

Sogayar, Mari Cleide

Zaha, Arnaldo

Lume 5.8

Ciências Biológicas   358 ISOLAMENTO DE SEQÜÊNCIAS DIFERENCIALMENTE EXPRESSAS EM DUAS FASES DO CICLO VITAL DE MESOCESTOIDES CORTI. Felipe Klein Ricachenevsky, Cristiano Valim Bizarro, Anelise Volkweiss, Mário Henrique Bengtson, Mari Cleide Sogayar, Arnaldo Zaha, Henrique Bunselmeyer Ferreira (orient.) (Departamento de Biologia Molecular e Biotecnologia, Instituto de Biociências, UFRGS). Mesocestoides corti é um platelminto endoparasita, pertencente à classe Cestoda. Apesar de não apresentar um ciclo vital totalmente elucidado, ele constitui-se num bom modelo para o estudo da segmentação em cestódeos, pois tanto a fase larval (tetratirídeo) quanto a fase adulta (verme segmentado) são bem caracterizadas e podem ser cultivadas in vitro. Com o objetivo de estudar genes expressados diferencialmente nessas duas fases, foram feitas extrações de RNA total de tetratirídeos e de vermes segmentados, que foram utilizadas na construção de duas bibliotecas subtraídas utilizando a técnica de cDNA-RDA (cDNA representational difference analysis), uma direta, enriquecida com seqüências relacionadas ao estágio adulto, e uma reversa, enriquecida com seqüências relacionadas ao estágio larval. Após o seqüenciamento parcial de vários clones de ambas as bibliotecas, foi possível observar que alguns dos cDNAs clonados correspondiam a diferentes regiões de um mesmo gene ortólogo. Assim, com base nas seqüências de cDNA disponíveis, mais a 5’ e mais a 3’ em relação a um mesmo gene ortólogo, foram projetados primers visando à amplificação de seqüências mais completas do gene de M. corti correspondente, gerando o que passou a ser chamado de transcrito virtual. Esta estratégia permite, a partir da disponibilidade de pequenas regiões de um gene, conseguir-se a amplificação e a clonagem da quase totalidade de sua seqüência de cDNA. Até o momento, dois transcritos virtuais, ambos derivados da biblioteca reversa, foram produzidos: um relacionado a um gene que codifica um fator de remodelamento de cromatina, de 2, 5 kb, e outro relacionado a um gene que codifica uma proteína envolvida em transporte intracelular de vesículas, de 2, 0 kb. Os produtos de amplificação obtidos estão agora sendo seqüenciados e, com a disponibilização das seqüências praticamente completas dos genes, será viabilizada uma análise mais confiável de suas homologias com os prováveis ortólogos. (FAPERGS, RTPD Network/SIDA-SAREC, CAPES, CNPq). 010 

Isolamento de seqüências diferencialmente expressas em duas faces do ciclo vital de Mesocestoides corti

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Lume 5.8

Universidade Federal do Rio Grande do Sul