Castilhos, Virgínia de

Lume 5.8

Evento Salão UFRGS 2014: SIC - XXVI SALÃO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA UFRGSAno 2014Local Porto AlegreTítulo Caracterização funcional do transportador de metais OsNRAMP7 de plantas de arroz (Oryza sativa L.)Autor VIRGÍNIA DE CASTILHOSOrientador JANETTE PALMA FETTOs genes  NRAMP (Natural Resistance-Associated  Macrophage Protein)  pertencem a umasuper  família  de  transportadores  de  metais  presentes  em  bactérias,  leveduras,  plantas  eanimais. As proteínas codificadas por esses genes atuam no transporte e homeostase de metaiscomo manganês e ferro, e outros metais divalentes tais como níquel, zinco, cobre, e cádmio.Em  trabalhos  anteriores,  nosso  grupo  de  pesquisa  encontrou  oito  membros  da  famíliaNRAMP no genoma do arroz. Também detectamos correlação negativa entre a expressão dogene  OsNRAMP7  na  folha  bandeira  durante  o  estágio  de  enchimento  de  grãos  e  asconcentrações  finais  de  Fe  e  Zn  nos  grãos  de  arroz.  A importância  de  OsNRAMP7  naalocação de metais para os grãos também pode ser sugerida pela co-localização deste genecom dois QTLs no cromossomo 12, identificados por outro grupo, que explicam parte davariação na concentração de Fe e Zn nos grãos de arroz.  Este estudo teve como objetivoestudar  a  possível  atividade  de  transporte  de  metais  da  proteína  codificada  pelo  geneOsNRAMP7. Expressão heteróloga em linhagens de leveduras mutantes, com deficiência notransporte (na membrana plasmática ou no tonoplasto) de metais (Fe, Zn, Mn, Cd, Co, Cu, Ni,e  As) está  sendo utilizada para avaliar  a afinidade por potenciais  substratos e o papel  deOsNRAMP7 na sensibilidade ou resistência a diferentes metais. Além disso, o fenótipo deuma  linhagem  de  Arabidopsis  que  super-expressa  OsNRAMP7  (linhagem  FOX,  RIKENBioResource Center)  submetida a  tratamentos de deficiência e excesso desses metais  estásendo avaliado e comparado ao da linhagem selvagem Columbia (Col-0). Estes experimentosvisam avaliar a sensibilidade ou resistência aos metais conferida à linhagem de Arabidopsispela super-expressão deste gene de arroz. Linhagens de leveduras mutantes para transporte deFe para vacúolo (Δccc1) e Tipo Selvagem (DY150) estão sendo testadas. Clone completo decDNA do  gene  OsNRAMP7 foi  obtido  do  National  Institute  of  Agrobiological  Sciences(NIAS), Japão, e amplificado por PCR para clonagem no vetor de entrada pENTR-D Topo(Life Technologies) e recombinado com vetores de expressão em levedura (pYTV e pAG426-EGFP).  Ensaios de complementação do fenótipo das leveduras mutantes para o transporte deFe para vacúolo foram realizados. As células transformadas foram crescidas em meio SC –URA contendo excesso de Fe (sulfato de Fe-III 0, 3 e 5 mM). As colônias foram visualizadasapós incubação das placas até 6 dias a 30 °C. O gene OsNRAMP7 complementou fracamenteo fenótipo da linhagem Δccc1, o que sugere pouca eficiência de OsNRAMP7 no transporte deFe  para  o  vacúolo.  Testes  para  complementação  de  linhagem  de  levedura  deficiente  notransporte de Fe na membrana plasmática em deficiência de Fe estão sendo realizados, alémde ensaios com linhagens de levedura deficientes para transporte de outros metais. Linhagemde Arabidopsis super-expressando OsNRAMP7 e Columbia (Col-0) foram germinadas emmeio MS contendo sacarose. Após 5 dias, as plântulas foram transferidas para meio contendo50 µM de Fe-EDTA (controle), 250 e 500 µM (excesso de Fe), ou para meio simulando adeficiência de Ferro (com Ferrozina 153 µM e 300 µM). As plântulas foram avaliadas aos 3dias,  7  dias  e  14  dias  após  transferência  para  os  tratamentos.  Não  houve  diferenças  decrescimento nas plântulas que super-expressam OsNRAMP7. Todas as plântulas mostraramsintomas relacionados à sensibilidade tanto a deficiência quanto ao excesso de Fe comparadascom as plântulas da linhagem selvagem. As plântulas em deficiência  de Fe apresentavamsintomas de clorose e redução de crescimento e as plântulas com excesso de Fe apresentaramcrescimento reduzido e escurecimento dos tecidos quando comparadas a plântulas crescidasna  condição controle.  Experimentos  com outros  metais  utilizando a  linhagem FOX serãorealizados para avaliar a sensibilidade e tolerância a Mn, Zn, Cd, Ni, Cu, Co e As.Apoio: CNPq, CAPES e FAPERGS.

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Caracterização funcional do transportador de metais OsNRAMP7 de plantas de arroz (Oryza sativa L.)

Universidade Federal do Rio Grande do Sul

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Caracterização funcional do transportador de metais OsNRAMP7 de plantas de arroz (Oryza sativa L.)

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