Casuni, Luciana Finkler

Nonning, Ricardo Bettiol

Rodnight, Richard Burnard

Universidade Federal do Rio Grande do Sul

Identificação de substratos da proteína quinase C em fatias de cérebro de ratos usando ésteres de forbol e extração com ácido acético

Lume 5.8

162   549 UFRGS). IDENTIFICAÇÃO DE SUBSTRATOS DA PROTEÍNA QUINASE C EM FATIAS DE CÉREBRO DE RATO USANDO ÉSTERES DE FORBOL E EXTRAÇÃO COM ÁCIDO ACÉTICO. L. F. Casuni, R. B. Nonnig, R. Rodnight (orientador). (Departamento de Bioquímica IB - A proteína quinase C (PQC) é uma enzima dependente de Ca2+ e lipídios que tem vários papéis na transdução de sinais no SNC. Entretanto, além das proteínas B-50 e MARCKS sabe-se muito pouco sobre os substratos desta enzima. Neste trabalho usamos ésteres de forbol para ativar a enzima em fatias de córtex cerebral de rato e extração com ácido acético para separar os seus subtratos de outras fosfoproteinas celulares. Robinson (Anal. Biochem, 212:172-178, 1993) mostrou que substratos da PQC são solúveis em ácido acético 40%. Fatias foram marcadas com 32P [fosfato] na presença ou ausência de forbol dibutirato (1mM) e dissolvidas em SDS 2%. Depois da adição de ácido acético até 40% a mistura foi centrifugada, o sobrenadante foi liofilizado e o resíduo foi dissolvido  em  solução  de  amostra  para  análise  por  eletroforese  bidimensional.  Autoradiografias  dos  geis mostraram a fosforilação e estimulação por forbol de algumas proteínas, incluindo B-50, MARCKS, e 3 outras proteínas desconhecidas que devem ser substratos da PQC. (CNPq, FAPERGS, FINEP e PROPESP).  

Identificação de substratos da proteína quinase C em fatias de cérebro de ratos usando ésteres de forbol e extração com ácido acético

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