Cecagno, Ricardo

Jacques, Guilherme Silveira

Passaglia, Luciane Maria Pereira

Roesch, Luiz Fernando Wurdig

Soares, Rene Arderius

Universidade Federal do Rio Grande do Sul

Identificação por métodos moleculares de organismos diazotróficos endofíticos e de solo

Lume 5.8

 Ciências Biológicas  475 IDENTIFICAÇÃO POR MÉTODOS MOLECULARES DE ORGANISMOS DIAZOTRÓFICOS ENDOFÍTICOS E DE SOLO. Soares, R. A.; Jacques, G; Cecagno, R; Roesch, L. F; Passaglia, L. M. P. (Centro de Biotecnologia, Departamento de Genética e Microbiologia dos Solos, UFRGS). Os organismos diazotróficos são os únicos capazes de transformar o nitrogênio gasoso atmosférico, que está na forma N2 e inacessível aos demais organismos, em formas assimiláveis, como, por exemplo, a amônia. O grande interesse em torno destes microrganismos é tanto econômico quanto ecológico, pois através da Fixação Biológica de Nitrogênio (FBN) a indústria agrícola economiza grande parte de seus gastos com adubação. Além disso, a utilização do nitrogênio como adubo causa danos ao meio ambiente, sendo um deles a lixiviação do mesmo, que pode contaminar as diversas fontes de águas existentes. A metodologia utilizada para a identificação de diazotróficos neste trabalho está baseada na existência de seqüências conservadas que codificam a enzima nitrogenase, esta sendo a principal enzima responsável pela FBN. Nas amostras de solo, a lise é feita in situ, onde o material genético das bactérias é separado do restante dos componentes celulares, precipitado e purificado de impurezas e substâncias contaminantes presentes no solo, que precipitam junto com o DNA. Nas amostras de planta, a lise é feita ex situ, de forma que existe uma prévia separação das bactéria e dos tecidos vegetais. Essa separação se dá através de lavagem do tecido vegetal, que é cortado em pequenos pedaços e fica sob agitação para que as bactérias se libertem e passem para a solução. Nas etapas seguintes, as bactérias são separadas, lisadas e o DNA é extraído e purificado. Para averiguar a existência de bactérias diazotróficas nas diferentes amostras ambientais, o DNA extraído é utilizado como molde em reações de PCR, onde são utilizados oligonucleotídeos específicos, que foram projetados a partir de uma região bastante conservada do gene nifH. Fragmentos ao redor de 300 pares de bases (pb), correspondentes ao tamanho esperado, foram obtidos com amostras de DNA extraídas do solo e raízes de milho. Uma amplificação inespecífica foi obtida com DNA obtido de amostras do colmo das mesmas plantas. Os fragmentos amplificados foram hibridizados com o fragmento de 300 pb do gene nifH de A. brasilense. Um sinal específico de hibridização foi obtido. Os fragmentos amplificados serão, agora, utilizados em experimentos de SSCP e clonagem. (Fapergs e PROPESQ-UFRGS)  409 

Portuguese

https://lume.ufrgs.br/bitstream/10183/76740/1/000375048.pdf

Identificação por métodos moleculares de organismos diazotróficos endofíticos e de solo

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Universidade Federal do Rio Grande do Sul

Lume 5.8