Ledur, Pítia Flores

Lopez, Patrícia Luciana da Costa

Silva, Andrew Oliveira

Lume 5.8

 Ciências Biológicas  363  AVALIAÇÃO DO SILENCIAMENTO DO GENE DE SURVIVINA POR RNAI EM LINHAGENS DE GLIOMAS U87. Andrew Oliveira Silva, Patricia Luciana da Costa Lopez, Pítia Flores Ledur, Guido Lenz (orient.) (UFRGS). Gliomas representam o tipo de tumor mais comum do sistema nervoso central. Devido ao difícil tratamento, o prognóstico de sobrevida dos pacientes é de menos de um ano. A survivina é uma proteína pouco expressa em tecido normal e super-expressa em vários tipos de tumores, inclusive gliomas. Esta proteína tem função anti-apoptótica devido a capacidade de inibição das caspases 3 e 7. Ela está envolvida na resistência de células tumorais à radiação ionizante e outros agentes anticâncer. Considerando esta super-expressão em células tumorais, nosso objetivo foi avaliar o efeito do silenciamento gênico dessa proteína em linhagens de glioma U87 por meio de seqüência de RNA interferente (RNAi) adquirido comercialmente. Para a realização desse estudo, foram produzidos vetores lentivirais contendo a seqüência para survivina, e um vetor controle contendo uma seqüência não homóloga a nenhum gene humano, a fim de transduzir em gliomas U87. As células foram selecionadas com puromicina – visto que os vetores contêm uma seqüência de resistência a este antibiótico. Gliomas com o vetor controle apresentaram sobrevivência acima de 50%, indicando boa eficiência de transdução e uma baixa toxicidade. A interferência de survivina mostrou menor sobrevivência, indicando uma menor transdução e/ou toxicidade a interferência. O silenciamento será confirmado por RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) e um estudo da sensibilidade a apoptose será realizado. Como controle de transdução, foi usado vetor com seqüência de GFP (Green Fluorescent Protein) e apresentou 60% de células GFP positivas, indicando eficácia da metodologia utilizada. A análise do comportamento das células silenciadas ainda incluirá técnicas que avaliarão a sensibilidade à apoptose na presença de quimioterápicos. 130 

Avaliação do silenciamento do gene de survivina por RNAI em linhagens de gliomas U87

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Lume 5.8

Universidade Federal do Rio Grande do Sul