Kich, Débora Mara

Universidade Federal do Rio Grande do Sul

Padronização da técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de micro-organismos patogênicos em amostras de leite bovino in natura oriundas de produtores do Vale do Taquari, RS.

Lume 5.8

Padronização da técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de micro-organismos patogênicos em amostras de leite bovino in natura oriundas de produtores do Vale do Taquari, RS.   Débora Kich, Camila Agostini, Adriane Pozzobon, Ivan Cunha Bustamante-Filho, Claudia Majolo, Vanderlei Biolchi, Claucia Fernanda Volken de Souza, Eduardo Périco Centro Universitário- UNIVATES  A região do Vale do Taquari, RS é um importante pólo de produção leiteira no Rio Grande do Sul. O leite e seus derivados são frequentemente contaminados por uma série de patógenos, entre estes, os Staphylococcus aureus e a Listeria monocytogenes. O S.aureus é uma bactéria presente na maior parte dos ambientes ocupados pelo homem, podendo contaminar, inclusive, sua pele, o que facilita a transmissão desta bactéria pelas mãos. A L. monocytogenes é um importante patógeno de origem alimentar. O presente estudo tem como objetivo principal utilizar a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) na detecção das bactérias L. monocytogenes e S. aureus em amostras de leite bovino in natura provenientes de produtores da região do Vale do Taquari. Para controle positivo foram feitas contaminações artificiais de leite com diferentes concentrações de S. aureus e L. monocytogenes (101, 103, 105 e 107 UFC/ml) segundo a escala de Mac Farland e processadas junto com as amostras de oito produtores locais. As amostras foram submetidas a diferentes protocolos de isolamento do DNA bacteriano para posterior detecção pela técnica de PCR. Até o presente momento foram testados quatro protocolos de isolamento de DNA: 1- fenol-clorofórmio-isoamílico 2- isotiocianato de Guanidina 3- Kit comercial PrepMan (Applied Biosystems ®), 4- fenol tamponado e proteinase k. Dos protocolos testados até o presente momento foi obtida a identificação do produto de 702pb correspondente a L. monocytogenes e o de 132pb correspondente ao S. aureus na contaminação artificial de 107 UFC/ml utilizando o protocolo 4. A extração de DNA de micro-organismos no leite é dificultada em virtude da presença de componentes inibitórios que podem bloquear o DNA ou impedir a ação da polimerase, portanto estão sendo testados e adaptados outros protocolos que utilizam a Lisozima para aperfeiçoar a extração e aumentar a sensibilidade da detecção.   

Portuguese

https://lume.ufrgs.br/bitstream/10183/47747/1/Resumo_10455.pdf

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