Cherax quadricarinatus merupakan spesies introduksi yang berasal dari Australia. Siklus hidup yang cepat dan toleransi yang tinggi terhadap lingkungan mengakibatkan C. quadricarinatusmudah menginvasi ekosistem perairan. Penelitian ini bertujuan untuk mengaplikasikan teknik eDNA secara cepat untuk deteksi C.quadricarinatus. Teknik ekstraksi dilakukan dengan menggunakan teknik pengendapan. Validasi keberadaan C.quadricarinatusdilakukan dengan menggunakan metode pengembangan PCR dan desain primer spesifik. Hasil menunjukkan bahwa keberadaan C.quadricarinatusterdeteksi sebanyak 60%dari keseluruhan badan perairan. Kombinasi protokol deteksi eDNA dan metode pengembangan PCR, serta primer spesifik yang didesain dapat digunakan untuk mendeteksi keberadaan C. quadricarinatus

Djalil, V. N. (Vella)

Farajallah, A. (Achmad)

Wardiatno, Y. (Yusli)

Neliti

Aplikasi Teknik Environmental Dna(edna) untuk Deteksi Spesies Cheraxquadricarinatus (Von Martens 1868) Menggunakan Sampel Air

Cherax quadricarinatus merupakan spesies introduksi yang berasal dari Australia. Siklus hidup yang cepat dan toleransi yang tinggi terhadap lingkungan mengakibatkan C. quadricarinatusmudah menginvasi ekosistem perairan. Penelitian ini bertujuan untuk mengaplikasikan teknik eDNA secara cepat untuk deteksi C.quadricarinatus. Teknik ekstraksi dilakukan dengan menggunakan teknik pengendapan. Validasi keberadaan C.quadricarinatusdilakukan dengan menggunakan metode pengembangan PCR dan desain primer spesifik. Hasil menunjukkan bahwa keberadaan C.quadricarinatusterdeteksi sebanyak 60%dari keseluruhan badan perairan. Kombinasi protokol deteksi eDNA dan metode pengembangan PCR, serta primer spesifik yang didesain dapat digunakan untuk mendeteksi keberadaan C. quadricarinatus.Kata kunci :Cherax quadricarinatus, Environmental DNA, deteksi, keberadaan, PC

Djalil, Vella Nurazizah

Farajallah, Achmad

Wardiatno, Yusli

Jurnal FKIP Universitas Mataram (Fakultas Keguruan Dan Ilmu Pendidikan)

      © 2018 The Author(s). This article is open access Jurnal Biologi Tropis Publisher  UPT Mataram University Press   Original Research Paper Aplikasi Teknik Environmental DNA (eDNA) untuk Deteksi Spesies Cherax quadricarinatus (Von Martens 1868) Menggunakan Sampel Air  Vella Nurazizah Djalil1, Achmad Farajallah2, Yusli Wardiatno3,4*  1Program Magister Biosains Hewan FMIPA Institut Pertanian Bogor 2Departemen Biologi FMIPA Institut Pertanian Bogor 3Departemen Manajemen Sumberdaya Perairan FPIK Institut Pertanian Bogor 4Pusat Penelitian Lingkungan Hidup, Institut Pertanian Bogor  Article history Received: 11 Juli 2018 Revised: 28 Agustus 2018 Accepted: 02 Oktober 2018 Published: 21 November 2018  *Corresponding Author:  Yusli Wardiatno,  Departemen Manajemen Sumberdaya Perairan FPIK Institut Pertanian Bogor Indonesia Email: yusli@ipb.ac.id Abstract:Cherax quadricarinatus is an introduced species from Australia. Fast life cycle and high tolerance for the environment cause C. quadricarinatus to invade aquatic ecosystems. This study aimed to apply eDNA techniques quickly for the detection of C. quadricarinatus. DNA extraction were carried out using precipitation technique. Validation of the presence of C. quadricarinatus was carried out using PCR development methods and specific primary designs. The results showed that the presence of C. quadricarinatus was detected as much as 60% of all water bodies. Combination of eDNA detection protocol and PCR development method, as well as specific primers designed can be used to detect the presence of C. quadricarinatus.  Keywords: Cherax quadricarinatus, Environmental DNA, detection, presence, PCR   Abstrak: Cherax quadricarinatus merupakan spesies introduksi yang berasal dari Australia. Siklus hidup yang cepat dan toleransi yang tinggi terhadap lingkungan mengakibatkan C. quadricarinatus mudah menginvasi ekosistem perairan. Penelitian ini bertujuan untuk mengaplikasikan teknik eDNA secara cepat untuk deteksi C.quadricarinatus. Teknik ekstraksi eDNA dilakukan dari sampel air dengan menggunakan teknik pengendapan. Validasi keberadaan C.quadricarinatus dilakukan dengan menggunakan metode pengembangan PCR dan desain primer spesifik. Hasil menunjukkan bahwa keberadaan C.quadricarinatus terdeteksi sebanyak 60% dari keseluruhan badan perairan. Kombinasi protokol deteksi eDNA dan metode pengembangan PCR, serta primer spesifik yang didesain dapat digunakan untuk mendeteksi keberadaan C. quadricarinatus.   Kata kunci : Cherax quadricarinatus, Environmental DNA, deteksi, keberadaan, PCR  Pendahuluan Introduksi spesies ke suatu ekosistem yang baru dapat mengganggu stabilitasnya, berkenaan dengan kompetisi antara spesies introduksi dengan spesies asli, penyakit yang dibawa oleh spesies introduksi, dan perubahan rantai makanan (Horwitz 1990). Persebaran spesies introduksi umumnya berkaitan dengan kegiatan manusia. Ada dua peluang persebaran spesies introduksi, yaitu secara sengaja (intentionally introduction), contohnya perdagangan hewan hias (ornamental trade) (Belle et al.  2011) dan budidaya, dan ketidaksengajaan (accidentally introduction), contohnya Podarcis siculus yang terbawa dalam material bangunan dari Eropa menuju ke Amerika Utara (Burke' dan Deichsel 2008). Salah satu spesies introduksi yang Yusli et al, Jurnal Bologi Tropis , 18 (2)  : 134 - 140 DOI: http://dx.doi.org/10.29303/jbt.v18i2.878  135  paling luas distribusinya adalah Cherax quadricarinatus (von Martens 1868). C.quadricarinatus merupakan lobster air tawar endemik dari Australia bagian Utara dan Papua Nugini (Ruscoe 2002). Menurut FAO Fisheries Statistics (2008), budidaya C.quadricarinatus terdapat pada negara tropis maupun subtropis, termasuk Indonesia (Edgerton dan Owens 2005). Sebagai hewan budidaya, spesies ini sangat adaptif pada kondisi perairan yang bervariasi (Karplus et al. 1998). Siklus hidup C. quadricarinatus sangat sederhana dari telur dan lepas ke air kemudian dengan temperatur 20-34°C tumbuh dengan cepat tanpa ada fase perkembangan larva (Jones 1995). Akibatnya, C. quadricarinatus tersebar sehingga mudah menginvasi ekosistem perairan (Patoka et al. 2016, 2018). Keberadaan spesies hewan di lingkungan dapat diketahui dengan pengamatan langsung (direct sign) dan pengamatan tak langsung (indirect sign) (Keeping dan Pelletier 2014). Pengamatan tak langsung (indirect sign) dapat diamati melalui jejak-jejak yang ditinggalkan hewan tersebut, salah satunya material genetik (DNA) yang ditinggalkan, yang dikenal dengan Environmental DNA (eDNA). Deteksi eDNAadalah teknik   yang digunakan untuk memonitoring hewan di perairan (Ficetola et al. 2008; Jerde et al.  2011). Teknik ini didasarkan pada fakta bahwa semua hewan yang hidup di air meninggalkan DNA melalui kotoran mereka, urine, dan keluapasan kulit (Herder et al. 2014). Penggunaan eDNA sudah diterapkan untuk mendeteksi keberadaan amfibi, reptil, ikan, krustasea, burung air, dan mamalia (Goldberg et al. 2011; Jerde et al. 2011; Olson et al. 2012; Biggs et al. 2015, Minamoto et al. 2015; Wilcox et al. 2015). Takahara et al.  (2012) juga menggunakan deteksi eDNA juga dapat digunakan untuk menghitung biomassa dan kelimpahan ikan (Takahara et al.  2012). Dibandingkan teknik sampling secara tradisional, teknik ini dinilai efektif dan efisien dilakukan. Artikel ini bertujuan untuk mengaplikasikan teknik eDNA secara cepat untuk deteksi C.quadricarinatus. Kami mendesain primer spesifik spesies untuk menvalidasi spesifisitas primer dengan menggunakan metode pengembangan PCR.  Bahan dan Metode Preservasi sampel Sampel air diambil dari 35 badan perairan tawar di provinsi Jawa Barat (Tabel 1). Masing-masing lokasi badan perairan dibagi menjadi tiga titik sampling, yaitu bagian inlet (daerah pemasukan air), bagian tengah (daerah anatara inlet dan outlet), dan bagian outlet (daerah keluarnya air). Dalam setiap bagian, air diambil beberapa titik menggunakan botol air kemasan yang dibuang isinya. Air dari beberapa botol kemudian disatukan dalam satu botol. Sampel air diawetkan dengan ditambahkan dengan sodium klorida 6M sebanyak 1/10 bagian dan alkohol 96% sebanyak  1/3 bagian. Sampel air dibawa ke laboratorium dalam suhu ruang. Sesampai di lab, disimpan dalam freezer dengan suhu -20°C. Sebagai kontrol negatif digunakan air mineral kemasan. Sebagai kontrol positif digunakan jaringan otot pada periopod C. quadricarinatus.   Ekstraksi DNA Sampel air disentrifus pada kecepatan 7000 rpm selama 10 menit. Endapan yang terbentuk selanjutnya dibilas dengan alkohol 70% kemudian diendapkan lagi. Sisa alkohol dalam endapan di uapkan menggunakan vacuum desiccator. Endapan yang diperoleh ditambahkan elution buffer (Thermo Fisher Scientific Inc, US)pada masing-masing sampel. Ekstraksi sampel berupa jaringan periopod C. quadricarinatus dilakukan dengan menggunakan Tissue/Blood DNA Mini Kit (Geneaid, Taiwan). Polymerase Chain Reaction (PCR) Amplifikasi pertama menggunakan primer universal yang dibuat oleh Folmer et al. (1994), yaitu forward LCO1490 (5'-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3')dan reverse HCO2198 (5'-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3') dengan suhu annealing45оC. Amplikon kemudian dijadikan cetakan dalam amplifikasi kedua menggunakan primer spesifik CO1 C.quadricarinatus, yaitu forward AF571(5'CAATCACAATTGGGGGTTTT-3') dan reverse AF570 (5'-GCTAGAACGGGGAGGGATAA-3'). Primer spesifik ini didesain menggunakan piranti lunak Primer 3 (http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/primer3/) berdasarkan sekuen utuh CO1 dari C.quadricarinatus  (Gambar 1). Yusli et al, Jurnal Bologi Tropis , 18 (2)  : 134 - 140 DOI: http://dx.doi.org/10.29303/jbt.v18i2.878  136    Gambar 1 Skema posisi penempelan amplifikasi pertama (Folmer et al. 1994) dan amplifikasi kedua (AF571 dan AF570)  Visualisasi produk PCR Produk PCR dielektroforesis menggunakan agarose gel 1,2% dan divisualisasi dengan menggunakan UV transluminator (Sambrook et al.2001). Target panjang ukuran amplifikasi pertama adalah 710 pasang basa dan amplifikasi kedua adalah 394 pasang basa.   Tabel 1 Daftar lokasi sampel air yang digunakan untuk mendeteksi C.quadricarinatus Badan Perairan Waktu Sampling Kabupaten/Kota Kode Sampel Situ Gede Bogor 15.07.2017 Bogor SG Situ Leutik 17.07.2017 Bogor LSI Situ Kemang 18.12.2017 Bogor SKA Situ Jampang 18.12.2017 Bogor SJM Situ Cicagu 18.12.2017 Bogor SCG Situ Borcess 18.12.2017 Bogor SBR Danau Dora 26.11.2017 Cibinong DD Situ Cikaret 26.11.2017 Cibinong SCK Situ Cibinong 13.01.2018 Cibinong SCI Situ Citayam 13.01.2018 Citayam SCT Situ Bentenan 13.01.2018 Cibinong SBT Situ Jatijajar 13.01.2018 Depok SJJ Situ Cilodong 13.01.2018 Depok SCL Situ Rawa Besar 13.01.2018 Depok SRB Situ Gede Bekasi 21.01.2018 Bekasi SGB Danau Cibeureum 21.01.2018 Bekasi DCB Danau Resinda  22.01.2018 Karawang DR Situ Kamojing 01.02.2018 Karawang SKJ Waduk Jatiluhur 06.12.2017 Purwakarta WJ Situ Cipanten 01.02.2018 Majalengka SCP Situ Cikuda 01.02.2018 Majalengka SCD Waduk Jatigede 01.02.2018 Sumedang WJG Waduk Dharma 17.08.2017 Kuningan WD Telaga Remis 01.02.2018 Kuningan TR Situ Gede Tasikmalaya 05.12.2017 Tasikmalaya SGT Situ Bojong 05.12.2017 Tasikmalaya SBO Situ Cibeureum 05.12.2017 Tasikmalaya SCM Situ Bagendit 17.08.2017 Garut SB Situ Lengkong  17.08.2017 Ciamis SP LCO1490 HCO1298 394 bp AF571 AF570 Yusli et al, Jurnal Bologi Tropis , 18 (2)  : 134 - 140 DOI: http://dx.doi.org/10.29303/jbt.v18i2.878  137  Hasil dan Pembahasan  Keberadaan C. quadricarinatus berhasil dideteksi sebanyak 60% dari keseluruhan badan perairan dengan menggunakan teknik eDNA (Tabel 1). Ficetola et al. (2008) mengemukakan bahwa teknik ini adalah teknik yang menjanjikan dalam ekologi. Menurut Biggs et al.  (2014) tingkat akurasi deteksi spesies menggunakan teknologi eDNA untuk amfibi mencapai 99,3%. Akurasi deteksi ini jauh lebih besar disbanding metode perangkap (76%), survei langsung keberadaan individu (75%) ataupun survei telur (44%). Pemulihan DNA selular dan ekstraselular dalam air dapat dilakukan dengan teknik pengendapan alkohol maupun teknik filtrasi penyaringan (Deiner et al. 2015). Kedua teknik mempunyai kemampuan yang sama dalam mendeteksi ada tidaknya spesies. Teknik pengendapan menggunakan alkohol jauh lebih murah dibandingkan filtrasi. Kendala utamanya adalah pada transportasi sampel air dari situs sampling ke laboratorium. Sebaliknya, teknik filtrasi jauh lebih mahal tetapi mudah ditransportasikan. Kendala lain dari teknik pengendapan adalah jumlah DNA total yang dihasilkan lebih rendah dibandingkan metode filtrasi (Deiner et al. 2015). Ketika jumlah DNA total yang didapat rendah, maka perlu dilakukan peningkatan kepekaan dengan menambah sampel air yang diendapkan atau filtrasi, dan meningkatkan sampel DNA dalam terhadap uji PCR untuk mengetahui sensitivitas (Deiner et al. 2015). Pada penelitian ini, aplikasi PCR yang dikembangkan adalah primer universal menggunakan suhu annealingyang rendah (470C) yang kemudian amplikonnya dijadikan cetakan untuk diamplifikasi menggunakan primer spesifik spesies target.  Berdasarkan Tabel 2, pada 1st PCR menggunaan primer universal (Folmeret al., 1994)  menghasilkan pita amplikon yang tidak tunggal atau tidak spesifik hanya spesies target. Setelah amplikon 1st PCR tersebut dijadikan cetakan dalam 2nd PCR menggunakan primer yang spesifik maka terjadi seleksi terhadap amplikon awal sehingga hanya spesies target saja yang berhasil diamplifikasi. PCR standar tidak cukup sensitif untuk mendeteksi target spesies dengan akurat dari sampel eDNA (Calsamiglia et. al 1999). Hal tersebut dikarenakan pada 1st PCR, membutuhkan suhu annealing (penempelan primer) yang lebih rendah, sehingga oligonukleotida kurang spesifik berikatan DNA cetakan (template) (Wu et al. 1991). Pada 2nd PCR membutuhkan suhu annealing (penempelan primer) yang lebih tinggi, sehingga oligonukleotida lebih spesifik berikatan DNA cetakan (template) (Wu et al. 1991). Kombinasi protokol eDNA dan aplikasi PCR menggunakan primer DNA yang didesain secara spesifik mampu mendeteksi keberadaan spesies di suatu perairan jauh lebih baik dibanding metode deteksi keberadaan secara konvensional (bioasessment conventional) (Lim et al. 2016).  Tabel 2 Deteksi C.quadricarinatus menggunakan PCR (1st PCR = amplifikasi pertama, dan 2nd PCR = amplifikasi kedua) Lokasi Inlet Tengah Outlet Sampel air yang terdeteksi 1st PCR 2nd PCR 1st PCR 2nd PCR 1st PCR 2nd PCR Situ Gede Bogor + + + + - - ✓ Situ Leutik/LSI + + + - - - ✓ Situ Kemang + - - - + -  Badan Perairan Waktu Sampling Kabupaten/Kota Kode Sampel Situ Cisanti 18.08.2017 Pengalengan SC Situ Ciburuy 05.12.2017 Padalarang SCB Situ Patenggang 06.12.2017 Bandung SPT Situ Cileunca 18.08.2017 Bandung SCC Waduk Cirata 06.12.2017 Cianjur WC Danau Lido 11.05.2017 Sukabumi LD     Yusli et al, Jurnal Bologi Tropis , 18 (2)  : 134 - 140 DOI: http://dx.doi.org/10.29303/jbt.v18i2.878  138  Lokasi Inlet Tengah Outlet Sampel air yang terdeteksi 1st PCR 2nd PCR 1st PCR 2nd PCR 1st PCR 2nd PCR Situ Jampang + - - - + -  Situ Cicagu - - + - + + ✓ Situ Borcess + - + - + -   Danau Dora + - + + + - ✓ Situ Cikaret + + + + + - ✓ Situ Cibinong + + + - - - ✓ Situ Citayam + - + + + + ✓ Situ Bentenan + - - - - -  Situ Jatijajar + - - - + - Situ Cilodong + - - - + + Situ Rawa Besar + + + - - - ✓ Situ Gede Bekasi - - - - + -  Danau Cibeureum - - - - - - Danau Resinda  + + + - + - ✓ Situ Kamojing - - - - + + ✓ Waduk Jatiluhur - - + - + + ✓ Situ Cipanten + + - - + + ✓ Situ Cikuda + - + + + + ✓ Waduk Jatigede - - - - + -   Waduk Dharma + - + - + + ✓ Telaga Remis + + + + + - ✓ Situ Gede Tasikmalaya - - + - - -   Situ Bojong + - - - + -   Situ Cibeureum + - - - + -   Situ Bagendit + + + - + + ✓ Situ Lengkong Panjalu + - + + - - ✓ Situ Cisanti - - - - + -   Situ Ciburuy + - + + - - ✓ Situ Patenggang + + + - - - ✓ Situ Cileunca + + + + + - ✓ Waduk Cirata + - - - + -  Danau Lido + + + + + + ✓  Kesimpulan  Dari hasil dan pembahasan dapat disimpulkan bahwa keberadaan C.quadricarinatus terdeteksi sebanyak 60% dari keseluruhan badan perairan. Kombinasi protokol deteksi eDNA dan metode pengembangan PCR, serta primer spesifik yang didesain dapat digunakan untuk mendeteksi keberadaan C. quadricarinatus.    Daftar Pustaka  Belle, C.C; Jason, Q.H.W; Yeo, D, C,J ; Tan, S.H; Heok, H.T; Clews, E dan Peter, A. T. 2011. Ornamental trade as a pathway for Australian redclaw crayfish introduction and establishment. Aquat Biol 12: 69-79. Biggs, J; Ewald, N; Valentini,A; Gaboriaud, C; Dejean, T; Griffiths, R.A; Foster, J; Wilkinson, J.W; Arnell, A; Brotherton, P; Yusli et al, Jurnal Bologi Tropis , 18 (2)  : 134 - 140 DOI: http://dx.doi.org/10.29303/jbt.v18i2.878  139  Williams, P dan Dunn, F. 2014. Using eDNA to develop a national citizen science-based monitoring programme for the great crested newt (Triturus cristatus). Biological Conservation 183: 19-28. Burke, R.L; Goldberg, S.R; Bursey, C.R; Perkins, S.L dan Andreas, P.T. 2007. Depauperate Parasite Faunas in Introduced Populations of Podarcis (Squamata: Lacertidae) Lizards in North America. Journal of Herpetology  41 (4):755-757. Calsamiglia, M; Pijoan, C dan Trigo A. 1999. Application of a Nested Polymerase Chain Reaction Assay to Detect Mycoplasma hyopneumoniae from Nasal Swabs. J Vet Diagn Invest 11: 246-251. Deiner , K; Walser, J.C; Mächler, E dan  Altermatt, F. 2015. Choice of capture and extraction methods affect detection of freshwater biodiversity from environmental DNA. Biological Conservation 183: 53-63. Edgerton, B.F dan Owens, L. 1999. Histopathological surveys of the redclaw freshwater crayfish, Cherax quadricarinatus, in Australia. Aquaculture 180: 23–40. Ficetola, G.F; Miaud, C; Pompanon, F dan Taberlet, P. 2008. Species detection using environmental DNA from water samples. Biol. Lett. 4: 423-425. Folmer, O; Black, M; Hoeh, W; Lutz, R dan Vrijenhoek, R. 1994. DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I from diverse metazoan invertebrates. Molecular Marine Biology and Biotechnology 3(5): 294-299. Goldberg, C.S; Pilliod, D.S; Arkle, R.S dan Waits, L.P. 2011. Molecular detection of vertebrates in stream water: a demonstration using Rocky Mountain tailed frogs and Idaho giant salamanders. PloS One 6, e22746. Herder, J.E. A. Valentini, E. Bellemain, T. Dejean, J.J.C.W. van Delft, P.F. Thomsen dan P. Taberlet, 2014. Environmental DNA - a review of the possible applications for the detection of (invasive) species. Stichting RAVON, Nijmegen. Report 2013-104. Horwitz, P. 1990. The Translocation of Freshwater Crayfish in Australia: Potential Impact, TheNeed for Control and Global Relevance. Bio Con  54: 291-305. Jerde, C.L;  Mahon, A.L;  Chadderton, W.L dan Lodge, D.M. “Sight-unseen” detection of rare aquatic species using environmental DNA. Conservation Letters 4: 150-157. Jones, C.M. 1995. Effect of temperature on growth and survival of the tropical freshwater crayfish, Cherax quadricarinatus (von Martens) (Decapoda, Parastacidae). Freshwater Crayfish 8: 391-398. Karplus, I; Zoran, M; Milstein, A; Harpaz, S; Eran, Y; Joseph, D dan Sagi, A. 1998. Culture of the Australian red-claw crayfish (Cherax quadricarinatus) in Israel. III. Survival in earthen ponds under ambient winter temperatures. Aquaculture 166: 259-267. Keeping D dan Pelletier, R. 2014. Animal density and track counts: understanding the nature of observations based on animal movements. PLos One : 9(5) : e96598. Lim, N.K.M; Tay, Y.C; Srivathsan, A; Tan, J.W.T; Kwik, J.T.B; Balouglu, B; Meier, R dan Ye, D.C.J. 2016. Next-generation freshwater bioassessment: eDNA metabarcoding with a conserved metazoan primer reveals species-rich and reservoir-specific communities. R. Soc. Open Sci. 3: 160635. Lin T, Liu, F dan Liao, I. 1999. Experiment on adaptation of Australian crayfish to selected environmental factors. J Taiwan Fish Res 7: 73-85. Minamoto, T;  Yamanaka, H, Takahara, T; Honjo, M. N dan Kawabata, Z. 2012. Surveillance of fish species composition using environmental DNA. Limnology 13:193–197 Olson, Z.H.; Briggler, J.T dan Williams, R.N. 2012. An eDNA approach to detect eastern hellbenders (Cryptobranchus a. alleganiensis) using samples of water. Wildl. Res. 39: 629-636. Patoka, J.; Wardiatno, Y.; Yonvitner; Kuříková, P.; Petrtýl, M dan Kalous, L. 2016. Cherax quadricarinatus (von Martens) has invaded Indonesian territory west of the Wallace Line: evidences from Java. Knowledge and Management of Aquatic Ecosystems 417: 39. Yusli et al, Jurnal Bologi Tropis , 18 (2)  : 134 - 140 DOI: http://dx.doi.org/10.29303/jbt.v18i2.878  140   Patoka, J.; Wardiatno, Y.; Mashar, A.; Yonvitner; Wowor, D.; Jerikho, R.; Takdir, M.; Purnamasari, L.; Petrtýl, M.; Kalous, L; Kouba, A. dan Bláha, M. 2016. Redclaw crayfish, Cherax quadricarinatus (von Martens, 1868), widespread throughout Indonesia. BioInvasions Records 7(2): 185-189. Ruscoe, I. 2002. Fishnote 2 : Redclaw Crayfish Aquaculture. Australia : Darwin Fisheries Northern Territory Government. Takahara, T., Minamoto, T. dan Doi, H., 2013. Using Environmental DNA to Estimate the Distribution of an Invasive Fish Species in Ponds. PLoS One 8, e56584. Wilcox, T.M; McKelvey, K.S; Young, M.K; Jane, S.F; Low,e, W.H; Whiteley, A.R dan Schwartz, M. K. 2013. Robust detection of rare species using environmental DNA: the importance of primer specificity. PLos One 8 (3): e59520 Wu, D.Y; Ugozzoli, L; Pal, B.K; Qian, J dan Wallace, R.B. 1991. The effect of emperature and oligonucleotide primer length on the specificity and efficiency of amplification by the polymerase chain reaction. DNA Cell Biol. 10(3): 233-238. 

Indonesian

APLIKASI TEKNIK ENVIRONMENTAL DNA(eDNA) UNTUK DETEKSI SPESIES Cheraxquadricarinatus (VON MARTENS 1868) MENGGUNAKAN SAMPEL AIR

https://media.neliti.com/media/publications/274199-aplikasi-teknik-environmental-dnaedna-un-ab6b987d.pdf

Aplikasi Teknik Environmental Dna(edna) untuk Deteksi Spesies Cheraxquadricarinatus (Von Martens 1868) Menggunakan Sampel Air

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Neliti

Jurnal FKIP Universitas Mataram (Fakultas Keguruan Dan Ilmu Pendidikan)