Dissertação de Mestrado em BiotecnologiaA indústria vinícola tem um papel extremamente importante na economia portuguesa, contribuindo de
forma significativa para as exportações agrícolas nacionais. De forma a manter a elevada reputação
deste setor é importante controlar o risco de potenciais contaminações que possam afetar a segurança
dos produtos vinícolas. Um potencial perigo é a ocorrência de substâncias tóxicas naturais
denominadas micotoxinas, que podem pôr em causa a saúde dos consumidores. Algumas das
micotoxinas que podem ocorr\er nos vinhos em pequenas quantidades são a ocratoxina A (OTA),
aflatoxina B1 (AFB1), aflatoxina B2 (AFB2) e fumonisina B2 (FB2). Para a sua deteção, é necessária a
implementação de métodos rápidos, sensíveis, precisos e robustos. Neste sentido, procurou-se
desenvolver um método analítico com recurso a extração em fase sólida para determinar estas
micotoxinas em vinho. Inicialmente, avaliou-se e otimizou-se o desempenho de diferentes tipos de
colunas. No final, validou-se um método com colunas Strata X-A para a determinação de OTA e um
método com colunas Isolute Myco para a determinação simultânea de OTA, AFB1, AFB2 e FB2. Todas
as amostras foram analisadas por HPLC com deteção de fluorescência, tendo-se determinado vários
parâmetros analíticos como a linearidade, estabilidade, seletividade, taxa de recuperação, limite de
deteção e limite de quantificação. Ambos os métodos demonstraram ser lineares para as gamas de
trabalho adotadas, bem como seletivos e estáveis para as micotoxinas em questão. O método com as
colunas Strata X-A apresentou linearidade entre 0,05-10,00 μg/L. Por sua vez, o método com as
colunas Isolute Myco apresentou linearidade entre 0,05-5,00 μg/L para a OTA, AFB1 e AFB2, e entre
2,0-200,0 μg/L para FB2. Obtiveram-se taxas de recuperação entre 70-110% para ambos os métodos,
valores esses que se demonstraram adequados tendo em conta a literatura, tal como os limites de
deteção e quantificação. Onze vinhos portugueses foram analisados por estes métodos, tendo-se
encontrado níveis de OTA entre 0,0015-0,44 μg/L (colunas Strata) e entre 0,090-0,98 μg/L (colunas
Isolute Myco). Análises feitas com colunas IAC-OchraTest indicaram a presença de OTA entre 0,015-
0,48 μg/L. Relativamente às outras micotoxinas, apenas de detetou AFB2 entre 0,46-0,68 μg/L. Estes
resultados revelam que os níveis de OTA se encontram claramente abaixo do valor limite
regulamentado, indicando que os vinhos comercializados em Portugal cumprem os requisitos de
qualidade exigidos.The wine industry has a significant role in the Portuguese economy and contributes significantly to the
national agricultural exports. To maintain its reputation, it is also important to control any potential
contamination risk that may affect the wine safety. One of the potential hazards is the occurrence of
natural toxic substances known as mycotoxins, since they may harm consumers’ health. Some of the
mycotoxins that may occur in wines in small quantities are the ochratoxin A (OTA), aflatoxin B1 (AFB1),
aflatoxin B2 (AFB2), and fumonisin B2 (FB2). For their detection, rapid, sensitive, accurate, and robust
methods are required. Therefore, we tried to develop an analytical method using solid phase extraction
to determine these mycotoxins in wine. At first, we assessed and optimized the performance of different
types of columns. In the end, a method with Strata X-A columns for the determination of OTA, and a
method with Isolute Myco columns for the simultaneous determination of OTA, AFB1, AFB2 and FB2
were validated. All samples were analyzed using HPLC with fluorescence detection and various
analytical parameters such linearity, stability, selectivity, recovery rate, detection limit, and
quantification limit were determined. Both methods have shown to be linear for the adopted work
ranges, as well as selective and stable for the mycotoxins in question. The Strata X-A method showed
linearity in the range of 0.05-10.00 μg/L. The Isolute Myco column method showed linearity in the
range of 0.05-5.00 μg L for OTA, AFB1, and AFB2, and in the range of 2.0-200.0 μg/L for FB2.
Recovery rates between 70-110% were obtained for both methods, which have proved to be appropriate
according to the literature, as well as the detection and quantification limits. Eleven Portuguese wines
were analyzed according to these methods, with OTA levels in the range of 0.015-0.44 μg/L (Strata
columns) and 0.090-0.98 μg/L (Isolute Myco columns). Analyzes made with IAC-OchraTest columns
showed the presence of OTA in the range of 0.015-0.48 μg/L. Regarding the other mycotoxins, only
AFB2 was detected between 0.46-0.68 μg/L. These results show that OTA levels are clearly below the
regulated limit value and indicate that the wines marketed in Portugal meet the established quality
requirements
